הערכת אפקטים Neuroprotective של בסיס Glycyrrhizae et Rhizoma לחלץ באמצעות מודל העכבר חסימה של עורק המוח התיכון ארעית
Summary
במחקר זה, נוכל לשנות שיטה ניסיונית קיימת כדי להשיג תוצאות לשחזור יותר, על-ידי יצירת מודל העכבר סגר (MCAO) של עורק המוח התיכון. אוראלי מינהל Glycyrrhizae בסיס et תמצית מתנול קנה שורש (גר) (GRex), בעקבות שבץ אינדוקציה, ירד באופן משמעותי אוטם סה כ נפח ביחס קבוצת הביקורת שלא טופלו.
Abstract
איסכמיה ואחריו פגיעה reperfusion של זרימת דם מוחי לאחר שבץ מוביל למותו של תאי עצב ואובדן רקמת המוח. המודל הנפוץ ביותר בעלי חיים לימוד קו הוא הדגם סגר (MCAO) בעורק האמצעי. מחקרים קודמים דיווחו בגדלים שונים לאוטם גם כאשר בני אותו מין חיה ניסיוני שימש בתנאים MCAO דומה. לכן, פיתחנו שיטה ניסיונית משופרת כדי לטפל אי-התאמה זו. עכברים היו נתונים MCAO שימוש נימה של החומר סגר לחקות תנאי קו אנושי, עובי נימה אופטימלי להקים עוד נפח אוטם לשחזור. עכברים שטופלו מתנול תמצית של בסיס Glycyrrhizae et קנה שורש (GRex) בעקבות שבץ אינדוקציה הראה אמצעי אחסון אוטם הכולל ירד משמעותית של מספר רב יותר של הישרדות התאים ביחס קבוצת הביקורת שלא טופלו. זה שונה נסיוני בהצלחה והפגינו reproducibly על השפעה מיטיבה של GRex על שבץ איסכמי.
Introduction
נזק מוחי שנגרם על ידי איסכמיה פגיעה reperfusion של זרימת הדם במוח מוביל למותו של תאי עצב ואובדן רקמת המוח. סוג זה של נזק מוחי ממשיך לגדול עם השכיחות הגוברת של מחלות כשאבדן עקב ההתפשטות של מחלות מטבוליות כגון השמנת יתר, לחץ דם גבוה, סוכרת1,2. המספר המוחלט בחולים קשישים עם קו גדל באופן דרמטי ברחבי העולם, העלות של טיפול רפואי עבור חולים אלו, מי הם לעתים קרובות נותר עם מוגבלות לטווח ארוך, הוא נטל ציבורי גדול. לכן, לקויות משניות צריך אפשרות לפתור כמה שיותר להפחית את הנטל הכלכלי1,2.
מכרסמים הדגם הנפוץ ביותר של אוטם מוחי הוא הדגם סגר (MCAO) בעורק האמצעי (MCA), שבו MCA הוא occluded עם מצופה סיליקון כירורגי הפתולוגיים פילמנט לחסום את זרימת הדם, גורם שבץ איסכמי3, 4. שימוש נימה של החומר סגר מאפשר השליטה של קביעות וזמן סגר על-ידי מניפולציה משך ההוספה פילמנט אינטרה-luminal.
מחקרים קודמים הראו כי גם כאשר נעשה שימוש באותו דגם MCAO מכרסם, הנפח הכולל של אוטם מוחי משתנה בין ניסויים, גורם הפארמצבטית נמוכה של המחקרים. כדי לשפר את הפארמצבטית, אנחנו אופטימיזציה העובי של המטבעות פילמנט המשמשים את הניסוי. התוצאות של מחקר ראשוני של תקופת איסכמי מוחי, אוטם המושרה הראה כי תקופה איסכמי יותר מ 60 דקות מותר האזור הנפחי של נזק לרקמת המוח ניתן להקליט ולצפות במעשיהם לכמת.
בסיס Glycyrrhizae et Rhizoma (גר), הידוע גם בשם שוש מורכב של שורשים מיובשים, המלבלבים של שוש uralensis , קרח ג. זה שימש ברפואה המסורתית סינית וקוריאנית למטרות שונות, כולל תוסף מזון, מסיבות בריאותיות5,6,7.
ב הקודם לימוד8, טיפול קדם עם תמצית מתנול גרם (GRex) הראה אפקט אנטי-מוות בעכברים MCAO, לרבות מניעה משמעותי של הירידה בביטוי חלבונים של B-cell לימפומה 2 (Bcl-2) Bcl גדולים במיוחד (Bcl-xL). מחקר זה נערך כדי לשפר את הפארמצבטית של דגם העכבר MCAO המקובלת על-ידי הערכת היעילות שלה בקביעת אם לאוטם שלאחר הטיפול עם GRex ביעילות מופחת לאוטם האחסון ב- MCAO-induced נזק מוחי.
Protocol
Representative Results
Discussion
עם השכיחות הגוברת של מחלות מטבוליות כגון יתר לחץ דם כרוני, סוכרת, היפרליפידמיה, המהווים גורמי סיכון עיקריים עבור קו, קו מניעה וטיפול הפכו אזור חשוב של המחקר הרפואי12, 13. לגירעונות שפה ותנועה לאחר שבץ חזק נמצאים בקורלציה עם מידת הנזק במוח רקמות14 , ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
לא ישים.
Materials
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
| Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
| Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
| Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
| Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
| Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
| Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
| Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
| Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
| Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
| Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
| Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
| Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
| Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
| Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
| Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
| Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
| Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
| Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
| Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
| Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
| Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
| Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
| Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
| Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
| #4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
| #5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
| #6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
| #7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
| Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
| Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |
Riferimenti
- Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).
- Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).
- Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
- Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).
- Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
- Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).
- Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).
- Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).
- Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
- Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
- Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).
- Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).
- Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).
- Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads – where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
- Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).
- Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).
- Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
- O’Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).
- Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).
- Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).
- Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).
