Neste estudo, nós modificamos um método experimental existente para obter resultados mais reprodutíveis, estabelecendo um modelo do rato (MCAO) de oclusão de artéria cerebral média. A administração oral de Glycyrrhizae Radix et extrato de metanol de rizoma (GR) (GRex), após indução de acidente vascular cerebral, diminuiu significativamente o volume de infarto total em relação ao grupo controle não tratado.
Isquemia seguida de reperfusão do fluxo sanguíneo cerebral após um acidente vascular cerebral leva à morte das células nervosas e perda de tecido cerebral. O modelo animal mais comumente usado para estudar o curso é o modelo de oclusão (MCAO) da artéria cerebral média. Estudos anteriores relataram tamanhos diferentes de infarto mesmo quando a mesma espécie de animal experimental foi utilizada em condições similares MCAO. Portanto, nós desenvolvemos um método experimental melhorado para resolver esta discrepância. Os ratos foram submetidos a MCAO usando um filamento como o material de oclusão para imitar as condições do acidente vascular cerebral humano e espessura do filamento foi otimizada para estabelecer mais volume de infarto pode ser reproduzido. Camundongos tratados com um metanol extrair do Glycyrrhizae Radix et rizoma (GRex) após a indução de acidente vascular cerebral mostrou um volume de infarto total significativamente diminuída e aumento do número de sobreviventes de células em relação ao grupo controle não tratado. Este modificado com êxito o protocolo experimental e reproducibly demonstrado o efeito benéfico de GRex sobre acidente vascular cerebral isquêmico.
Danos cerebrais causados por isquemia e reperfusão do fluxo sanguíneo cerebral leva à morte das células nervosas e perda de tecido cerebral. Este tipo de dano cerebral continua a aumentar com o aumento da prevalência de doenças cerebrovasculares, devido à propagação de doenças metabólicas como obesidade, hipertensão arterial e diabetes mellitus1,2. O número absoluto de pacientes idosos com acidente vascular cerebral tem aumentado drasticamente em todo o mundo, e o custo da assistência médica para estes pacientes, que muitas vezes são deixados com deficiência a longo prazo, é um grande fardo societal. Portanto, a deficiência secundária deve ser atenuada tanto quanto possível para reduzir o encargo económico1,2.
O modelo de roedor mais comumente usado de infarto cerebral é o modelo de oclusão (MCAO) de artéria cerebral média (MCA), no qual o MCA é obstruído com um filamento de silicone revestido cirúrgico sutura para bloquear o fluxo sanguíneo, causando acidente vascular cerebral isquêmico3, 4. usando um filamento, como o material de oclusão permite o controle do tempo de oclusão e permanência manipulando-se a duração da inserção do filamento intra-luminal.
Estudos anteriores mostraram que, mesmo quando é usado o mesmo modelo MCAO de roedores, o volume total de infarto cerebral varia entre experimentos, causando baixa reprodutibilidade dos estudos. Para melhorar a reprodutibilidade, nós aperfeiçoamos a espessura do filamento mint utilizado no experimento. Os resultados de um estudo preliminar sobre o período de isquemia cerebral e infarto induzido mostrou que mais de 60 min e um período isquêmico permitido região volumétrica de danificado tecido cerebral para ser observada e quantificada.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), também conhecida como alcaçuz, consiste nas raízes secas e rizomas de Glycyrrhiza uralensis e g. glabra. Ela tem sido usada na medicina tradicional chinesa e coreana para diversos fins, inclusive como um aditivo alimentar e medicinalmente5,6,7.
Em um anterior estudo8, pré-tratamento com GR extrato de metanol (GRex) mostrou um efeito antiapoptose em ratos MCAO, incluindo significativa prevenção da diminuição na expressão de proteínas de linfoma de célula B 2 (Bcl-2) e Bcl extra-grande (Bcl-xL). Este estudo foi realizado para melhorar a reprodutibilidade do modelo convencional de rato MCAO avaliando sua eficiência em determinar se o tratamento pós-infarto com GRex efetivamente reduziu o volume de infarto em dano cerebral induzida por MCAO.
Com o aumento da prevalência de doenças metabólicas como hipertensão crônica, diabetes e hiperlipidemia, quais são os principais fatores de risco para AVC, tratamento e prevenção de acidente vascular cerebral tornaram-se uma importante área de pesquisa médica12, 13. déficits na linguagem e movimento após um acidente vascular cerebral estão fortemente correlacionados com o grau de dano ao tecido14 no cérebro e resultar em uma …
The authors have nothing to disclose.
Não aplicável.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
#4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
#5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
#6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
#7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |