Оценка влияния нейропротекторной Glycyrrhizae Radix et корневище извлечь с помощью переходных средней мозговой артерии окклюзии мыши модели
Summary
В этом исследовании мы изменить существующий экспериментальный метод для получения более воспроизводимые результаты, путем создания модели мыши средней мозговой артерии окклюзии (СМАо). Пероральное введение Glycyrrhizae Radix et корневища (GR) метанола экстракт (GRex), после инсульта индукции, значительно сократили объем всего миокарда по сравнению с необработанными контрольной группы.
Abstract
Ишемии, следуют реперфузии мозгового кровообращения после инсульта приводит к смерти нервных клеток и потере ткани головного мозга. Наиболее часто используемых животных модель для изучения инсульта является средней мозговой артерии окклюзии (СМАо). Предыдущих исследований сообщили различные инфаркте размеры даже когда же экспериментальных животных был использован в аналогичных СМАо условиях. Поэтому мы разработали более экспериментальный метод для устранения этого несоответствия. Мышей были подвергнуты СМАо с помощью нити как непроходимость материал для имитации условий человека инсульта и накаливания толщину был оптимизирован для создать более громкости воспроизводимый миокарда. Мышей, получавших с метанолом экстракт Glycyrrhizae Radix et корневища (GRex) после инсульта индукции показан объем значительно снизилась общая миокарда и увеличение количества живых клеток по отношению к группе управления необработанными. Это изменение экспериментальный протокол успешно и можно воспроизвести продемонстрировано благотворное влияние GRex на ишемического инсульта.
Introduction
Повреждения головного мозга, вызванные ишемии и реперфузии мозгового кровотока приводит к смерти клетки нерва и потере ткани головного мозга. Этот тип повреждения головного мозга продолжает увеличиваться с распространением цереброваскулярных заболеваний из-за распространения таких метаболических заболеваний, как ожирение, гипертензия и сахарный диабет1,2. Абсолютное количество пожилых больных с инсультом резко возросло во всем мире, и стоимость медицинского обслуживания для этих пациентов, которые часто остаются с долгосрочной инвалидности, является тяжелым бременем общества. Таким образом вторичной инвалидности должны быть смягчены как можно больше уменьшить экономическое бремя1,2.
Наиболее часто используемые грызунов модель ишемии миокарда является средней мозговой артерии (MCA) окклюзии (СМАо), в котором MCA закрыта с силиконовой оболочкой хирургические сшивающие накаливания блокировать поток крови, вызывая ишемического инсульта3, 4. с помощью нити как непроходимость материал позволяет контролировать время окклюзии и постоянство, манипулируя продолжительность интра просветный накаливания вставки.
Предыдущие исследования показали, что даже когда же грызунов СМАо модель используется, общий объем ишемии миокарда колеблется от экспериментов, вызывая низкая воспроизводимость результатов исследований. Чтобы улучшить воспроизводимости, мы оптимизировали Толщина нити мяты, используемых в эксперименте. Результаты предварительного исследования церебрального ишемического периода и индуцированных миокарда, показал ишемического период дольше, чем 60 мин позволила регионе объемные повреждения ткани мозга наблюдается и количественно.
Glycyrrhizae Radix et корневище (GR), также известный как солодка, состоит из сушеных корней и корневищ солодки uralensis и glabra г. Он был использован в китайских и корейских традиционной медицины для различных целей, включая в качестве пищевой добавки и лечебных5,6,7.
В предыдущем исследовании8, предварительной обработки с GR метанола экстракт (GRex) показан эффект анти apoptotic СМАо мышей в том числе значительные предотвращения снижения экспрессии белков B-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2) и Bcl очень большой (Bcl-xL). Это исследование было проведено для улучшения воспроизводимость традиционной модели мыши СМАо путем оценки ее эффективности в определении, если после инфаркта лечение с GRex эффективно сократить объем инфаркте СМАо индуцированной мозгового повреждения.
Protocol
Representative Results
Discussion
С распространением метаболических заболеваний, таких как хронические гипертония, сахарный диабет, гиперлипидемия, которые являются основными факторами риска развития инсульта инсульта профилактики и лечения стали важной областью медицинских исследований12, <sup class=…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Не применимо.
Materials
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
| Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
| Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
| Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
| Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
| Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
| Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
| Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
| Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
| Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
| Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
| Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
| Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
| Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
| Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
| Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
| Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
| Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
| Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
| Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
| Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
| Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
| Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
| Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
| Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
| #4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
| #5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
| #6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
| #7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
| Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
| Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |
Riferimenti
- Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).
- Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).
- Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
- Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).
- Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
- Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).
- Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).
- Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).
- Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
- Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
- Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).
- Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).
- Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).
- Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads – where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
- Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).
- Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).
- Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
- O’Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).
- Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).
- Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).
- Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).
