Evaluación de efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria Cerebral Media
Summary
En este estudio, modificamos un método experimental existente para obtener resultados reproducibles más, mediante el establecimiento de un modelo de ratón de arteria cerebral media oclusión (MCAO). La administración oral de Glycyrrhizae Radix et Extracto de metanol de rizoma (GR) (GRex), tras la inducción de la carrera, redujo significativamente el volumen de infarto total en relación con el grupo control no tratado.
Abstract
Isquemia seguida de reperfusión del flujo sanguíneo cerebral después de un derrame cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. El modelo animal más utilizado para el estudio de tiempos es el modelo de oclusión (MCAO) de la arteria cerebral media. Estudios anteriores han reportado tamaños diferentes infarto incluso cuando la misma especie animal experimental se utilizó en condiciones similares de MCAO. Por lo tanto, hemos desarrollado un método experimental mejorado para hacer frente a esta discrepancia. Ratones fueron sometidos a MCAO usando un filamento como el material de la obstrucción para imitar las condiciones de movimiento humano y grueso filamento fue optimizado para crear más volumen de infarto reproducible. Extracción de ratones tratados con un metanol de Glycyrrhizae Radix et rizoma (GRex) tras inducción de movimiento mostró un volumen de infarto total significativamente disminuida y aumento en el número de supervivientes de las células en relación con el grupo control no tratado. Esto modificó el protocolo experimental con éxito y reproducible había demostrado el efecto beneficioso de GRex en accidente cerebrovascular isquémico.
Introduction
Daño cerebral causado por isquemia y reperfusión del flujo sanguíneo cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. Este tipo de daño cerebral continúa aumentando con la creciente prevalencia de enfermedades cerebrovasculares debido a la propagación de enfermedades metabólicas como obesidad, hipertensión y diabetes mellitus1,2. El número absoluto de pacientes mayores con ictus ha aumentado en todo el mundo, y el costo de la atención médica de estos pacientes, que a menudo se quedan con discapacidades a largo plazo, es una carga social importante. Por lo tanto, discapacidad secundaria debe mitigarse lo más posible para reducir la carga económica1,2.
El modelo más utilizado de roedor del infarto cerebral es el modelo de oclusión (MCAO) de arteria cerebral media (MCA), en el que el MCA se ocluye con un filamento de sutura quirúrgico silicio para bloquear el flujo sanguíneo, causando accidente cerebrovascular isquémico3, 4. usando un filamento como el material de la obstrucción permite el control del tiempo de oclusión y permanencia mediante la manipulación de la duración de la inserción del filamento intra-luminales.
Estudios anteriores han demostrado que incluso cuando se utiliza el mismo modelo MCAO roedor, el volumen total del infarto cerebral varía entre experimentos, causando baja reproducibilidad de los estudios. Para mejorar la reproducibilidad, hemos optimizado el grueso de la menta de filamentos utilizado en el experimento. Los resultados de un estudio preliminar del período isquémico cerebral y el infarto inducido demostrada que un período isquémico de más de 60 min permitió la región volumétrica del dañan tejido cerebral para ser observados y cuantificados.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), también conocido como regaliz, consiste en el secado raíces y rizomas de Glycyrrhiza uralensis y g. glabra. Se ha utilizado en la medicina tradicional China y coreana para los varios propósitos incluyendo como un aditivo alimenticio y medicinal5,6,7.
En un anterior estudio8, pre-tratamiento con el extracto de metanol GR (GRex) demostrado un efecto anti-apoptotic en ratones MCAO, incluyendo prevención significativa de la disminución en la expresión de la proteína de linfoma de células B 2 (Bcl-2) y Bcl extra grande (Bcl-xL). Este estudio se llevó a cabo para mejorar la reproducibilidad del modelo de ratón MCAO convencional evaluando su eficiencia en la determinación de si el tratamiento postinfarto con GRex efectivamente reduce el volumen de infarto en daño cerebral inducido por MCAO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Con la creciente prevalencia de enfermedades metabólicas como la hipertensión crónica, diabetes e hiperlipidemia, que son factores de riesgo para el accidente cerebrovascular, el tratamiento y prevención de accidentes cerebrovasculares han convertido en una importante área de investigación médica12, 13. los déficits en el lenguaje y el movimiento después de un accidente cerebrovascular se correlacionan fuertemente con el grado de daño cerebral de tejido…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
No es aplicable.
Materials
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
| Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
| Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
| Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
| Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
| Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
| Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
| Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
| Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
| Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
| Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
| Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
| Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
| Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
| Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
| Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
| Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
| Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
| Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
| Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
| Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
| Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
| Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
| Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
| Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
| #4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
| #5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
| #6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
| #7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
| Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
| Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |
Riferimenti
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