L'accesso di nutrienti, microbiota metaboliti e farmaci per la circolazione è controllata dalla barriera intestinale-sangue (GBB). Descriviamo un metodo diretto per misurare la GBB permeabilità in vivo, che, contrariamente ai metodi indiretti comunemente usati, praticamente non è interessato dalle funzioni di fegato e rene.
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Articolo metodologico
Un metodo In Vivo per valutare la Gut-barriera e metabolismo epatico del Microbiota prodotti
In questo articolo
Sommario
Abstract
La barriera intestinale-(GBB) controlla il passaggio di nutrienti, metaboliti batterici e farmaci dal lume intestinale alla circolazione sanguigna. L'integrità GBB è disturbato nelle malattie gastrointestinali, cardiovascolari e metaboliche, che potrebbero facilitare l'accesso dei composti biologicamente attivi, quali metaboliti batterica dell'intestino, alla circolazione sanguigna. Così, la permeabilità della GBB può essere un indicatore di malattie extraintestinali ed intestinale. Inoltre, l'aumento della penetrazione dei metaboliti batterici può influenzare il funzionamento dell'intero organismo.
Metodi comunemente usati per studiare la permeabilità GBB sono eseguite ex vivo. L'accuratezza di tali metodi è limitata, poiché il funzionamento della GBB dipende dal flusso sanguigno intestinale. D'altra parte, metodi comunemente utilizzati in vivo possono essere prevenuti di fegato e rene prestazioni, come tali metodi si basano sulla valutazione di urina o / e le concentrazioni nel sangue periferico di marcatori esogeni. Qui, presentiamo una misura diretta della permeabilità GBB in ratti facendo uso di un metodo in vivo basato sull'anima portale di campionamento, che conserva il flusso sanguigno intestinale e praticamente non è influenzata dalla funzione epatica e renale.
I cateteri di poliuretano sono inseriti nella vena portale e vena cava inferiore appena sopra l'epatico vene confluenza. Sangue è provato al basale e dopo somministrazione di un marcatore selezionato in una parte del tratto gastrointestinale desiderata. Qui, presentiamo diverse applicazioni del metodo inclusi (1) valutazione della permeabilità del colon TMA, un metabolita batterica dell'intestino, (2) la valutazione della clearance epatica di TMA e (3) la valutazione di una via di sangue periferico-sangue-fegato intestino-portale del budello batteri-derivati di acidi grassi a catena corta. Inoltre, il protocollo può anche essere utilizzato per tenere traccia di assorbimento intestinale e metabolismo epatico dei farmaci o per misure di pressione sanguigna portale.
Introduzione
La barriera sangue-gut (GBB), noto anche come la barriera intestinale, è un complesso sistema multistrato che separa il lume intestinale dal flusso sanguigno al fine di limitare il passaggio di composti nocivi, consentendo l'assorbimento di sostanze nutritive1. Si compone di tre strati principali: la strato di muco, epitelio e lamina propria.
Numerosi fattori possono influenzare l' integrità e la funzione GBB2. È stato dimostrato che GBB è disturbato nelle malattie extraintestinali e gastrointestinali, tra cui malattie cardiovascolari e metaboliche3, che può portare a u....
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Protocollo
Gli esperimenti sono stati effettuati su ratti maschi Wistar Kyoto secondo direttiva 2010/63 UE sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici e sono stati approvati da I Comitato di bioetica locale a Varsavia.
1. inserimento della linea per l'amministrazione Intraintestinal
Nota: Qui vi proponiamo amministrazione intracolonic di un marcatore utilizzando un catetere. Può essere modificato da somministrazione orale o sonda gastrica a vari livelli del tratto digestivo per esempio dello stomaco o del duodeno. Ricordatevi di usare indumenti chirurgici monouso, compresi camice chi....
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Risultati
Con successo abbiamo misurato la clearance dei permeabilità e fegato GBB di TMA in ratti. Abbiamo dimostrato che i ratti ipertesi hanno una permeabilità aumentata del colon per TMA rispetto ai ratti normotesi (Figura 2)4. In un altro studio abbiamo trovato che l'assunzione di sale alta non influenzare la clearance di permeabilità e fegato GBB della TMA (Figura 3)14.
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Discussione
Descritto, diretto in vivo, metodo per misurare la permeabilità GBB mantiene condizioni di closetophysiological nell'apparato gastrointestinale (mantiene il flusso sanguigno intestinale) e praticamente non è influenzata dalla funzionalità epatica e renale.
Il passaggio fondamentale di questa tecnica è l'inserimento del catetere portale. Questo deve essere fatto delicatamente e in modo decisivo allo stesso tempo. Un breve, lieve sanguinamento può verificarsi dalla puntura la corretta e.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Il lavoro è supportato dal Ministero della scienza e dell'istruzione superiore Repubblica di Polonia, Diamond concedere no: DI2017 009247.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Diametro esterno dell'ago: 9 mm | Becton Dickinson S.A. | 301300 | |
| Catetere in polietilene ID: 0,025", OD: 0,040" | Materie prime scientifiche, Inc. | #BB520-40 | |
| Catetere in polietilene ID: 0,012", OD: 0,025" | Materie prime scientifiche, Inc. | #BB520-25 | |
| C-Flex Tubo, bianco opaco 1/50 "ID x 1/12" OD | Cole-Parmer Instrument Co. | 06424-59 | |
| Catetere di Foley pediatrico (misura 10F o 8F) | Sigmed | 0000 80305 | |
| Legature chirurgiche 3/0 | Yavo Sp. Z o.o. | P48JE | |
| Suture chirurgiche riassorbibili - Polyglactine 910 4/0 | KRUUSE Polska Sp. Zo.o. | ||
| Colla per tessuti - Loctite 454Cianoacrilato adesivo | Loctite | ||
| iodio povidone | EGIS Pharmaceuticals PLC | 4449 11 | |
| eparina - Heparinium WZF | WZF Polfa S.A. | 02BK0417 | Diluire 10 volte con soluzione fisiologica |
| Glicerina 86% | Laboratorium Farmaceutyczne Avena | 5.90999E+12 | Serve come lubrificante nel cateterismo del colon |
| Xilocaina 2% | AstraZenca | ||
| Uretano | Sigma-Aldrich (Merck) | U2500-500G | |
| Soluzione di trimetilammina 45% | Sigma-Aldrich (Merck) | 92262-1L | |
| Siringhe 2 mL | B.Braun Melsungen AG | 4606027V | |
| Soluzione salina 250 mL | Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o. | 15LL707WL | |
| Forbici chirurgiche, dritte, lunghezza 115 mm, 4 1/2" estremità smussate | Braun | NS-010-115-PKM | |
| Pinza arteriosa tipo Micro-Adson piegato, lunghezza 140 mm 5 1/2 " | Braun | KN-008-140-ZMK | |
| Pinza anatomica, lunghezza 95 mm, 3 3/4" affilata 0,7x0,55 | Braun | PO-001-007-ZMK | |
| Micro forbici tipo Vannas, dritto, lunghezza 85 mm, 3 3/8 " la lunghezza delle lame 6 mm | Braun | NO-010-085-PMK | |
| Morsetti per asciugamani tipo Backhouse, lunghezza 130 mm, 5 1/8" | Braun | HO-128-130-PMK | |
| Porta-aghi, lunghezza 150 mm, 6" t=0.4 1/2 | Braun | IM-927-150-PZMK | |
| Forbici delicate, lunghezza 110 mm, dritte, 4 3/8" affilate | Braun | NO-052-110-PMK | |
| Pinza anatomica, lunghezza 95 mm, affilata 3 3/4" | Braun | PO-022-001-PMK |
Riferimenti
- Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease. Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).
- Keita, A. V., Soderholm, J. D.
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Ristampe e permessi
