בשילוב שינויים Capsid גנטי וכימי של וקטורים המבוסס על אדנו העברה גנטית עבור הגנה ומיקוד
Summary
הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר לחוקרים במיוחד לשנות capsids אדנו-אתרים נבחרים על-ידי כימיה פשוטה. אדנו מסוככים את המומנט חלקיקים וקטורים העברת גנים retargeted יכול להיווצר ו החרקי המארח יכול להילמד.
Abstract
אדנו וקטורים הם כלי חזק virotherapy חיסון, oncolytic גנטית. עם זאת, הם נוטים אינטראקציות מרובות וקטור רצויה-מארח, במיוחד לאחר הלידה ויוו . זה קונצנזוס כי המגבלות שהוטלו על ידי אינטראקציות וקטור רצויה-המארח יכול רק להתגבר אם מתבצעים שינויים מוגדר של המשטח וקטור. שינויים אלה כוללים מיגון של החלקיקים של אינטראקציות בלתי רצויים פילוח לפי המבוא של ליגנדים חדש. המטרה של פרוטוקול המובאת כאן היא לאפשר לקורא להפיק ממוגן, אם רצונך בכך, retargeted וקטורים העברת גנים אדנו אנושי או וירוסים oncolytic. הפרוטוקול יאפשר לחוקרים לשנות את פני השטח של capsids וקטור אדנו על-ידי מצורף כימי מסוים של פולימרים סינתטיים, פחמימות, שומנים או אחרים moieties ביולוגי או כימי. היא מתארת את טכנולוגיה חדשנית של שינויים capsid גנטי וכימי משולב, אשר הוכחו כדי להקל על ההבנה, התגברות על מחסומים עבור משלוח ויוו אדנו וקטורים. תיאור מפורט של תגובות של צעדים חיוניים לביצוע תגובות כימיות ספציפיות עם וירוסים פעילים ביולוגית או וירוס-derived וקטורים מסופק. הטכנולוגיה שמתואר הפרוטוקול מבוסס על המבוא גנטי של ציסטאין (נעדר באופן טבעי) שאריות לתוך החשופים הממס לולאות של אדנו-derived וקטורים. אלה שאריות ציסטאין לספק כימיים תגובתיות ספציפי, זה יכול, לאחר הייצור של הווקטורים כדי titers גבוהה, תנוצל ספציפי מאוד ויעיל צימוד כימי קוולנטיות של מולקולות מתוך מגוון רחב של מחלקות חומר כדי וקטור חלקיקי. חשוב לציין, פרוטוקול זה ניתן בקלות להתאים לבצע מגוון רחב של שונות (שאינה תיול מבוססת) שינויים כימיים של וקטור אדנו capsids. בסופו של דבר, זה סביר וקטורים העברה הזה שאינו אפוף ג’ין מבוסס-וירוס אחר ממה אדנו ניתן לשנות מן הבסיס של פרוטוקול זה.
Introduction
Adenoviruses (Ad), בני משפחת Adenoviridae, הם שאינו אפוף וירוסי דנ א של יותר מ-70 סוגים אשר עד כה מזוהה (http://hadvwg.gmu.edu). בהתאם hemaglutination מאפיינים, מבנה הגנום ותוצאות רצף, ניתן לחלק את סוגי 70 לספירה שבעת המינים (האנושית adenoviruses A עד G)1,2. הגנום האנושי מודעה בגודל של 38 kb, כמוס icosahedral nucleocapsid3. בשל שפע שלהם, capsid חלבון קללה, זה בסיס פנטון, סיבים כל מכונים capsid הגדולות חלבונים. שופע והגדול ביותר capsid חלבון קללה, זה יוצר היבטים capsid 20, שכל אחד מהם מורכב של 12 קללה, זה homotrimers4,5. פנטון, הממוקם בקצה כל icosahedral (קודקוד), מורכב pentamers של הבסיס פנטון ומייצג את הבסיס טינה קודקוד הבנוי של glycosylated סיב trimers5,6. ערך מקורי של תא לספירה מורכב בעצם שני שלבים עיקריים. ראשית, הידית סיבים נקשר לקולטן העיקרי. המודעה סוגי זנים A, C, E ו- F, זהו הקולטן coxsackie, אדנו (מכונית). אינטראקציה זו מביא את virion לתוך קרבה מרחבית את פני השטח של התא, ובכך להקל על אינטראקציות בין הסלולר אינטגרינים מוטיב RGD פנטון הבסיס, כתוצאה מכך גרימת תגובות הסלולר. שנית, להוביל לשינויים שלד התא הפנמה של virion ושל התחבורה ביותר אנדוזום7. בעת פירוק חלקי ב אנדוזום, virion הוא שוחרר אל הציטופלסמה und בסופו של דבר עובר את הגרעין לצורך שכפול.
בעוד המודעה יכולה להיות מועברת באופן מקומי (למשל., לקבלת חיסון גנטי), מערכתי משלוח דרך מחזור הדם כנדרש על onco-virotherapy פונה מספר מחסומים. בעוד במחזור הדם, virions מוזרק נתקלים מערכת ההגנה של מערכת החיסון של המחשב המארח, שמוביל נטרול מהיר של הווקטורים מבוסס-וירוס ובעיבוד וקטורים המבוסס על המודעה יעיל מאוד ביישומים מערכתית. יתר על כן, hepatotropism הטבעית של Ad מפריע משלוח מערכתית, חייבות להיפתר לנתב מחדש המודעה שלה התאים היעד החדש.
מקודד Germline נוגדנים IgM הטבעית של מערכת החיסון המולדת במהירות מזהה, לאגד מבנים מאוד חוזרות על פני8,virion9. אלה מכלולי המערכת החיסונית ואז להפעיל את המסלולים קלאסית וקלאסי של מערכת המשלים, שמוביל מהר המשלים בתיווך ניטרול של חלק גדול virions8. שביל השנייה וכתוצאה מכך הסרת העיקריים של Ad virions מתווכת על-ידי מקרופאגים10 , המשויך חריפה ולא הקרדיאלי תופעות לוואי11,12. במקרה של המודעה בפרט, Kupffer תאים המתגוררים הכבד לאגד ולהתחיל phagocytically Ad virions ויה נבלות ספציפי הקולטנים, ובכך לחסל אותם מן הדם13,14,15 . קולטנים ספציפיים נבלות גם זוהו תאי אנדותל sinusoidal הכבד (LSE תאים)16, ונראה LSE תאים גם תורמת וקטורית חיסול17, אלא באיזו מידה עדיין צריך הבהרה. יתר על כן, חלק מסוגי לספירה ווקטורים נגזר שלהם הם ביעילות מבודדות על ידי האדם אריתרוציטים18 שאליו הם לוחצים באמצעות מכונית או הקולטן המשלים CR119. ראוי לציין, מנגנון sequestering זה לא ניתן לחקור במערכת מודל העכבר כמו בניגוד אריתרוציטים אנושי, אריתרוציטים העכבר לא מבטא את המכונית.
נוגדנים ספציפיים נגד לספירה שנוצר על ידי מערכת החיסון מסתגלת לאחר חשיפה לספירה עקב זיהומים הקודם עם המודעה או או לאחר המשלוח הראשון ביישומים מערכתית הרימו מכשול נוסף לשימוש יעיל של וקטורים לספירה, הם צריכים להיות התחמק ב משלוח מערכתית יעילה.
לבסוף, hepatotropism חזק המודעה בסוגים מסוימים (כולל Ad5) קשות מעכבת היישום של המודעה בטיפול מערכתי. זה tropism וכתוצאה מכך hepatocyte התמרה חושית הוא בזיקה גבוהה של virion המודעה כדי דם קרישה פקטור X (FX), מתווכת על ידי האינטראקציה של FX עם Ad קללה, זה חלבון20,21,22. FX מגשרת את virion כדי הפרין סולפאט glycans (HSPGs) על פני hepatocytes20,23,24,25. גורם מכריע עבור אינטראקציה זו נראה במידה מסוימת של N -, O-sulfation של HSPGs תאי כבד24, אשר היא נבדלת HSPGs על סוגי תאים אחרים. בנוסף מסלול זה בתיווך FX, מחקרים שנעשו לאחרונה מראים עוד יותר מסלולים עדיין לא זיהו כי התוצאה ב- Ad התמרה חושית של hepatocytes26,27,28.
לאחרונה, הוכח כי FX לא רק מעורב hepatocyte התמרה חושית של Ad, אך גם על-ידי איגוד, שילדס virion החלקיק וירוס נגד ניטרול על ידי מערכת המשלים26. הפחתה של התמרה חושית hepatocyte על-ידי מניעת איגוד FX, לכן, ליצור תופעת לוואי בלתי רצויות של הגדלת לספירה ניטרול באמצעות מערכת החיסון המולדת.
ידיעה עמוקה של אינטראקציות מורכבות בין וקטורים ואורגניזמים מארח ולכן יש צורך לפתח וקטורים יעיל יותר עבור יישומים מערכתית לעקוף את המכשולים שהוטלו על ידי האורגניזם של המחשב המארח.
אסטרטגיה אחת שבה השתמשו במקור חלבונים טיפולית כבר מותאם לספירה וקטורים לפחות חלקית להתגבר על המחסומים שתואר לעיל. Antigenicity ו- immunogenicity של תרכובות טיפולית חלבון יכול להיות מופחת על ידי צימוד כדי פוליאתילן גליקול (PEG)29,30. לפיכך, המושבים קוולנטיות של פולימרים כגון פג או פולי [N-(2-hydroxypropyl) methacrylamid] (pHPMA) כדי capsid השטח ומגנים הווקטור של אינטראקציות וקטור לא רצויים-המארח. בדרך כלל, פולימר צימוד מטרות חדוה-אמין קבוצות מכל שאריות בצד ליזין המופצים באופן אקראי על פני capsid. וקטור חלקיקים בתמיסה, בשל אופיו הידרופילית משושמים המצורפת, מוקפים פגז מים יציבים זה מפחית את הסיכון של תאים חיסוניים הכרה או השפלה אנזימטיות. יתר על כן, וקטורים PEGylated לספירה הוצגו להתחמק ניטרול באמצעות אנטי-קללה, זה נוגדנים במבחנה , עכברים מראש לחסן ויוו31. בניגוד שינויים גנטיים capsid, צימוד כימי של פולימרים מתבצע לאחר ייצור, טיהור, ומאפשר לא רק לשימוש של מפיק קונבנציונאלי תאים וייצור של מניות וקטור כייל נוגדנים גבוה, אלא גם עבור בו זמנית שינוי של אלפי חומצות אמינו על פני capsid. עם זאת, מכוון amine מיגון מתרחשת באופן אקראי לאורך כל השטח capsid כולו, וכתוצאה מכך heterogeneities גבוהה, לא מאפשר שינוי של capsomers ספציפיים. יתר על כן, moieties פולימר גדול הדרושים עבור השפעות מועילות לפגום וירוס אתריים32.
כדי להתגבר על מגבלות אלה, Kreppel et al. 33 הציג תפיסה geneti-כימית עבור וקטור re – ואני מבטל את המיקוד. Cysteines שהוכנסו גנטית capsid וירוס החשופים הממס ומעמדות כמו סיבים HI-לולאה33, חלבון התשיעי34, קללה, זה35,36. אמנם יכול להיות מיוצר לא-טבעי, ציסטאין מניבי וקטורים Ad-titers גבוהה בתאים נורמליים הפקה. חשוב, החדרת cysteines capsomers מסוימים, עמדות שונות בתוך capsomer יחיד מאפשר שינויים ספציפי מאוד של תיול moieties קבוצה ראקטיבית. גישה geneti-כימית זו הוכח כדי להתגבר על מכשולים רבים בעיצוב וקטור לספירה. השילוב של מבוסס-אמין PEGylation detargeting, המבוסס על תיול זיווג transferrin על הידית סיבים ש-HI-לולאה הוכח כדי בהצלחה ייעד מחדש ששינה לספירה וקטורים חשוכת-הרכב התאים33. מאז קללה, זה מעורב אינטראקציות בלתי רצויה ביותר (נטרול נוגדנים, הגורם דם FX), המבוסס על תיול שינוי אסטרטגיות הוחלו גם על קללה, זה. צימוד moieties פג קטן כדי HVR5 של קללה, זה מנע חלקיקי וקטור לספירה מגלי SKOV-3 תאים בנוכחות FX, ואילו moieties פג גדול גדל hepatocyte-התמרה חושית-14,–35. המודעה וקטור חלקיקים נשיאת מוטציות בהידית סיבים עיכוב רכב מחייב וב -HVR7 מעכבים קשירה של FX (ו cysteines ברינג שנוספו ב- HVR1 עבור מיקום ספציפי PEGylation) הראו להם להתחמק נוגדן, המשלים-בתיווך ניטרול, כמו גם נבלות קולטן בתיווך ספיגת ללא הפסד של infectivity. מעניין, למרות חוסר המגן FX טבעי, PEGylation שוב שיפור התמרה חושית של hepatocytes כפונקציה של גודל פג36. עם זאת, זה הוצג כי מיגון קוולנטיות יש השפעה על תהליכים תאיים לסחר בבני אדם. Prill et al. לעומת בלתי הפיכות נגד bioresponsive מגינים על סמך pHPMA והפגינו כי גם את מצב תשלום מיגון ולא שותף פולימר הייתה השפעה על כניסת התא אך השפיעה חלקיקים סחר את הגרעין. העסקת מגן bioresponsive עם pHPMA הטעון חיובית פולימרים שיתוף המותר עבור חלקיקים סחר את הגרעין, שמירה על חיסכון התמרה חושית גבוהה של המודעה המומנט במבחנה , ויוו37.
לסיכום, נתונים אלה מציינים כי, אפילו תחת ההנחה כי כל וקטור-מארח-האינטראקציות היו ידועים ונחשבים, שינויים משטח capsid מופרז חיוניים להתגבר על המכשולים הקשורים עם משלוח וקטור מערכתית.
כאן אנו מספקים פרוטוקול כדי לבצע שינויים כימיים בייעודי לאתר של capsids וקטור אדנו מיגון ו/או retargeting של חלקיקים וקטור אדנו ווירוסים oncolytic המבוסס על אדנו. הרעיון של טכנולוגיה זו מחולקת לרמות באיור1. היא מאפשרת מיגון של אזורים מסוימים capsid של אינטראקציות בלתי רצויות על ידי קוולנטיות מצורף של פולימרים סינתטיים. באותו, הוא גם מספק אמצעי כדי לצרף ליגנדים ולשלב הגנה ומיקוד. באמצעות כימיה פשוטה, ניסויים תהיה אפשרות לשינוי covalently משטח וקטור אדנו עם מגוון רחב של מולקולות כולל פפטידים/חלבונים, פחמימות, שומנים, ומולקולות קטנות אחרות. יתר על כן, הפרוטוקול מספק קונספט כללי שינוי כימי של וקטורים נגזר וירוס פעילים ביולוגית תחזוקה של שלמות הביולוגי שלהם פעילות.
Protocol
Representative Results
Discussion
היעילות שבה cysteines גנטית הציג יכול להיות מבחינה כימית שונה בדרך כלל 80-99%, משתנים מסוימים להשפיע על יעילות זו. קודם כל, זה בעל חשיבות עליונה כי cysteines גנטית הציג אינם עוברים חמצון מוקדמת. בעת היותו מוגן בסביבה תוך צמצום של התאים מפיק, זה חובה לספק סביבה שאינם חמצוני לאחר שחרור חלקיקים וקטור מתאי …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Vector purification and chemical modification | |||
| Argon gas | Air liquide | local gas dealer | |
| Liquid Nitrogen | Air liquide | local gas dealer | |
| 500 mL centrifuge tubes | Corning | 431123 | |
| Stericup Express Plus 0.22 µm | Millipore | SCGPU02RE | |
| Tris(2-carboxyethyl) phosphine (TCEP) | Sigma-Aldrich | C4706-10g | |
| 2 mL (3mL) Norm Ject (syringes) | Henke Sass Wolf | 4020.000V0 | |
| Fine-Ject needles for single use (yellow 0.9 x 40 mm) | Henke Sass Wolf | 4710009040 | |
| Caesium chloride 99.999% Ultra Quality | Roth | 8627.1 | |
| Silica gel beads | Applichem | A4569.2500 | |
| Methoxypolyethylene glycol maleimide – 750 (PEG mal-750) | Iris Biotech | store in silica gel beads at -80 °C | |
| 13.2 mL Ultra Clear Ultracentrifuge Tubes | Beckman Coulter | 344059 | only open in hood |
| PD-10 size exclusion chromatography column | GE Healthcare | 17-0851-01 | store at 4 °C |
| Hepes | AppliChem | A1069.1000 | |
| SDS Ultrapure | AppliChem | A1112,0500 | |
| Glycerol | AppliChem | A1123.1000 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material for cell-culture | |||
| DPBS | PAN Biotech | P04-36500 | |
| DMEM | PAN Biotech | P04-03590 | |
| Trypsin/EDTA | PAN Biotech | P10-0231SP | |
| FBS Good | PAN Biotech | P40-37500 | |
| Penicillin/Streptomycin | PAN Biotech | P06-07100 | |
| Biosphere Filter Tips (various sizes) | Sarstedt | ||
| Serological Pipettes (various sizes) | Sarstedt | ||
| reaction tubes (various sizes) | Sarstedt | ||
| TC plates 15cm | Sarstedt | 83.3903 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material for silver staining protocol | |||
| Methanol | J.T.Baker | 8045 | |
| Ethanol absolute | AppliChem | 1613,2500PE | |
| Acetic Acid | AppliChem | A0820,2500PE | |
| Formaldehyde 37% | AppliChem | A0877,0250 | |
| Ethanol absolute | AppliChem | A1613,2500PE | |
| Sodium thiosulfate | AppliChem | 1,418,791,210 | |
| Silver nitrate | AppliChem | A3944.0025 | |
| Sodium carbonate | AppliChem | A3900,0500 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Special Lab Equipment | |||
| Desiccator | Nalgene | 5311-0250 | |
| Megafuge 40 | Heraeus | ||
| Roter for Megafuge TX750 + Adapter andLlids for 500 mL tubes | Heraeus | ||
| Water bath | Conventional | ||
| Ultracentrifuge e.g. Optima XPN-80 | Beckman Coulter | ||
| suitable Ultrazentrifuge Rotor e.g. SW41 | Beckman Coulter | ||
| pH -Meter | Conventional | ||
| Stand with clamps | Conventional | ||
| Goose neck lamp | Conventional | ||
| Over-head rotor | Conventional | ||
| Thermal Block | Conventional | ||
| Photometer (OD 260) | Conventional |
Riferimenti
- Benko, M., Harrach, B. Molecular evolution of adenoviruses. Current Topics in Microbiology and Immunology. , 3-35 (2003).
- Davison, A. J., Benko, M., Harrach, B. Genetic content and evolution of adenoviruses. Journal of Genetic Virology. 84, 2895-2908 (2003).
- Rowe, W. P., Huebner, R. J., Gilmore, L. K., Parrott, R. H., Ward, T. G. Isolation of a cytopathogenic agent from human adenoids undergoing spontaneous degeneration in tissue culture. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 84, 570-573 (1953).
- van Oostrum, J., Burnett, R. M. Molecular composition of the adenovirus type 2 virion. Journal of Virology. 56, 439-448 (1985).
- Stewart, P. L., Fuller, S. D., Burnett, R. M. Difference imaging of adenovirus: bridging the resolution gap between X-ray crystallography and electron microscopy. TheEMBO Journal. 12, 2589-2599 (1993).
- Stewart, P. L., Burnett, R. M., Cyrklaff, M., Fuller, S. D. Image reconstruction reveals the complex molecular organization of adenovirus. Cell. 67, 145-154 (1991).
- Meier, O., et al. Adenovirus triggers macropinocytosis and endosomal leakage together with its clathrin-mediated uptake. Journal of Cellular Biology. 158, 1119-1131 (2002).
- Xu, Z., et al. Coagulation factor X shields adenovirus type 5 from attack by natural antibodies and complement. Nature Medicine. 19, 452-457 (2013).
- Qiu, Q., et al. Impact of natural IgM concentration on gene therapy with adenovirus type 5 vectors. Journal of Virology. 89, 3412-3416 (2015).
- Alemany, R., Suzuki, K., Curiel, D. T. Blood clearance rates of adenovirus type 5 in mice. Journal of Genetic Virology. 81, 2605-2609 (2000).
- Smith, J. S., Xu, Z., Tian, J., Stevenson, S. C., Byrnes, A. P. Interaction of systemically delivered adenovirus vectors with Kupffer cells in mouse liver. Human Gene Therapy. 19, 547-554 (2008).
- Schiedner, G., et al. A hemodynamic response to intravenous adenovirus vector particles is caused by systemic Kupffer cell-mediated activation of endothelial cells. Human Gene Therapy. 14, 1631-1641 (2003).
- Xu, Z., Tian, J., Smith, J. S., Byrnes, A. P. Clearance of adenovirus by Kupffer cells is mediated by scavenger receptors, natural antibodies, and complement. Journal of Virology. 82, 11705-11713 (2008).
- Khare, R., Reddy, V. S., Nemerow, G. R., Barry, M. A. Identification of adenovirus serotype 5 hexon regions that interact with scavenger receptors. Journal of Virology. 86, 2293-2301 (2012).
- Piccolo, P., Annunziata, P., Mithbaokar, P., Brunetti-Pierri, N. SR-A and SREC-I binding peptides increase HDAd-mediated liver transduction. Gene Therapy. 21, 950-957 (2014).
- Plüddemann, A., Neyen, C., Gordon, S. Macrophage scavenger receptors and host-derived ligands. Methods (San Diego, Calif). 43, 207-217 (2007).
- Ganesan, L. P., et al. Rapid and efficient clearance of blood-borne virus by liver sinusoidal endothelium. PLoS Pathogen. 7, e1002281 (2011).
- Cichon, G., et al. Titer determination of Ad5 in blood: a cautionary note. Gene Therapy. 10, 1012-1017 (2003).
- Carlisle, R. C., et al. Human erythrocytes bind and inactivate type 5 adenovirus by presenting Coxsackie virus-adenovirus receptor and complement receptor 1. Blood. 113, 1909-1918 (2009).
- Waddington, S. N., et al. Adenovirus serotype 5 hexon mediates liver gene transfer. Cell. 132, 397-409 (2008).
- Kalyuzhniy, O., et al. Adenovirus serotype 5 hexon is critical for virus infection of hepatocytes in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 105, 5483-5488 (2008).
- Vigant, F., et al. Substitution of hexon hypervariable region 5 of adenovirus serotype 5 abrogates blood factor binding and limits gene transfer to liver. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16, 1474-1480 (2008).
- Jonsson, M. I., et al. Coagulation factors IX and X enhance binding and infection of adenovirus types 5 and 31 in human epithelial cells. Journal of Virology. 83, 3816-3825 (2009).
- Bradshaw, A. C., et al. Requirements for receptor engagement during infection by adenovirus complexed with blood coagulation factor X. PLoS Pathogen. 6, e1001142 (2010).
- Duffy, M. R., Bradshaw, A. C., Parker, A. L., McVey, J. H., Baker, A. H. A cluster of basic amino acids in the factor X serine protease mediates surface attachment of adenovirus/FX complexes. Journal of Virology. 85, 10914-10919 (2011).
- Xu, Z., et al. Coagulation factor X shields adenovirus type 5 from attack by natural antibodies and complement. Nature Medicine. 19, 452-457 (2013).
- Prill, J. -. M., et al. Modifications of adenovirus hexon allow for either hepatocyte detargeting or targeting with potential evasion from Kupffer cells. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19, 83-92 (2011).
- Zaiss, A. K., et al. Hepatocyte Heparan Sulfate Is Required for Adeno-Associated Virus 2 but Dispensable for Adenovirus 5 Liver Transduction In Vivo. Journal of Virology. 90, 412-420 (2015).
- Delgado, C., Francis, G. E., Fisher, D. The uses and properties of PEG-linked proteins. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems. 9, 249-304 (1992).
- Parveen, S., Sahoo, S. K. Nanomedicine: clinical applications of polyethylene glycol conjugated proteins and drugs. Clin. Pharmacokinet. 45, 965-988 (2006).
- O’Riordan, C. R., et al. PEGylation of adenovirus with retention of infectivity and protection from neutralizing antibody in vitro and in vivo. Human Gene Therapy. 10, 1349-1358 (1999).
- Subr, V., et al. Coating of adenovirus type 5 with polymers containing quaternary amines prevents binding to blood components. Journal of Controlled Release. 135, 152-158 (2009).
- Kreppel, F., Gackowski, J., Schmidt, E., Kochanek, S. Combined genetic and chemical capsid modifications enable flexible and efficient de- and retargeting of adenovirus vectors. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 12, 107-117 (2005).
- Corjon, S., et al. Targeting of adenovirus vectors to the LRP receptor family with the high-affinity ligand RAP via combined genetic and chemical modification of the pIX capsomere. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16 (11), 1813-1824 (2008).
- Prill, J. -. M., et al. Modifications of adenovirus hexon allow for either hepatocyte detargeting or targeting with potential evasion from Kupffer cells. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19, 83-92 (2011).
- Krutzke, L., et al. Substitution of blood coagulation factor X-binding to Ad5 by position-specific PEGylation: Preventing vector clearance and preserving infectivity. Journal of Controlled Release. 235, 379-392 (2016).
- Prill, J. -. M., et al. Traceless bioresponsive shielding of adenovirus hexon with HPMA copolymers maintains transduction capacity in vitro and in vivo. PloS One. 9, e82716 (2014).
- Kratzer, R. F., Kreppel, F. Production, Purification, and Titration of First-Generation Adenovirus Vectors. Methods in Molecular Biology. , 377-388 (2017).
- Blum, H., Beier, H., Gross, H. J. Improved silver staining of plant proteins, RNA and DNA in polyacrylamide gels. ELECTROPHORESIS. 8, 93-99 (1987).
