La proteina interagenti della W10 partecipa al checkpoint del mandrino mitotico e alla patogenesi del carcinoma. Qui, introduciamo una metodologia dell'immunostaining della WINT nei tessuti del cancro del polmone umano, seguita dalla scansione digitale di interi diapositive e analisi delle immagini. Questa metodologia può fornire immagini digitali di alta qualità e risultati affidabili.
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Articolo metodologico
Analisi digitale dell'immunostaining delle proteine che interagiscono con la W10 nei tessuti polmonari umani
In questo articolo
Sommario
Abstract
Lo scopo di questo studio è quello di introdurre una metodologia di immunostaining dei tessuti polmonari umani, seguita da scansione digitale e analisi delle immagini di inter-slide. La scansione digitale è un modo veloce per eseguire la scansione di una pila di diapositive e produrre immagini digitali di alta qualità. Può produrre risultati concordanti con microscopia leggera convenzionale (CLM) dai patologi. Inoltre, la disponibilità di immagini digitali rende possibile che la stessa diapositiva possa essere osservata contemporaneamente da più persone. Inoltre, le immagini digitali delle diapositive possono essere memorizzate in un database, il che significa che si evita il deterioramento a lungo termine dei vetrini di vetro. Le limitazioni di questa tecnica sono le seguenti. In primo luogo, ha bisogno di tessuto preparato di alta qualità e dei vetrini originali dell'immunosofia (IHC) senza danni o residui di sigillanti in eccesso. In secondo luogo, le aree tumorali o non tumorali devono essere specificate da patologi esperti prima dell'analisi utilizzando un software, al fine di evitare qualsiasi confusione sulle aree tumorali o non tumorali durante il punteggio. In terzo luogo, l'operatore deve controllare la riproduzione del colore durante tutto il processo di digitalizzazione nell'imaging a tutta la diapositiva.
Introduzione
La proteina interagenti w10 è una componente necessaria del complesso cinetochore che è coinvolto nel checkpoint del mandrino mitotico1,2,3. È stato riferito che l'esaurimento della WINT porta ad una segregazione aberrante del cromosoma precoce1,2,3. Recenti studi hanno suggerito che la WINT è coinvolta nella patogenesi di tumori multipli promuovendo la proliferazione delle cellule tumorali4,5. In precedenza abbiamo riportato....
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Protocollo
Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dal Comitato Etico dell'Ospedale di Hongnan dell'Università di Wuhan e dall'Ospedale Renmin dell'Università di Wuhan.
1. Preparazione dei vetrini IHC
- Fissare il campione di tessuto polmonare immergendo il frammento di tessuto polmonare umano (circa 3 x 3 cm) nel 4% di paraformaldeide nella salina con buffer fosfato (PBS) per 24 h a temperatura ambiente (RT).
- Disidratare il tessuto in 80%, 95%, e 100% etanolo per 15 min, 20 min, e 20 min, rispettivamente, a temperatura ambiente. Infine, immergere il tessuto in 100% xilene 3x per 20 min ciascuno a temperatura ambiente. ....
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Risultati
Abbiamo misurato i livelli di espressione di .WINT in 28 coppie di campioni di cancro del polmone non a piccole cellule (NSCLC) (tessuti tumorali e non tumorali adiacenti), tra cui 14 carcinomi a cellule squamose (SCC) e 14 adenocarcinomi (ADC), di IHC. La scansione digitale delle diapositive ha fornito immagini digitali di alta qualità (Figura 1A). I risultati hanno mostrato che il punteggio H del cancro del polmone era significativamente superiore a quello .......
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Discussione
La scansione a scorrimento intero sta diventando un argomento caldo per la sua robusta scansione e produzione di immagini di alta qualità per scopi clinici e di ricerca11,12,13. Le immagini possono essere prodotte da microscopi a scansione a scorrimento in pochi minuti11,12,13. Applicando questa metodologia, abbiamo ottenuto immagini di.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo progetto è stato sostenuto dalla National Natural Foundation of China (n. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 e 81501352) e dalla Natural Foundation of Hubei Province (Cina) (N. 2017CFB631). Gli autori esprimono il loro apprezzamento a Guo Qin, Chang Min, Li Hui e ai loro colleghi di Wuhan Google Biological Technology Co., LTD per il loro supporto tecnico. Gli autori ringraziano anche Muhammad Jamal per il montaggio del linguaggio.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | Uno scanner digitale automatizzato per vetrini con un notevole set di funzioni: capacità di 12 vetrini, scansione a fluorescenza e molti altri. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Scaricato dal sito ufficiale dell'azienda | Il framework per le applicazioni di analisi delle immagini di 3DHISTCH. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | La maggiore precisione dei nuovi accessori aggiungerà comodità all'avvicinamento del blocco al coltello e all'orientamento del campione. |
| Anticorpo anti-ZWINT anti-ZWINT di coniglio | Abcam | Cat: ab197794 | Analisi immunoistochimica di ZWINT nel tessuto polmonare umano. |
| Anticorpo secondario anti-coniglio | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Anticorpo secondario per la colorazione IHC. |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | Una soluzione contenente un tampone fosfato. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscopio per il rilevamento di H & E o diapositive IHC. |
| Dimetilbenzene | Shanghai Lingfeng Reagente chimico | Cat: 1330-20-7 | Un fluido incolore e infiammabile utilizzato come solvente e agente chiarificante nella preparazione di sezioni di tessuto per lo studio microscopico. |
| Soluzione colorante con ematossilina | Wuhan Servicebio technology | Cat: G1039 | È comunemente usato per studi istologici, spesso colora i nuclei delle cellule di blu. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | È un tensioattivo non ionico di tipo polisorbato formato dall'etossilazione del sorbitano prima dell'aggiunta di acido laurico. Viene utilizzato come deterrente ed emulsionante in applicazioni farmacologiche. |
| Il liquido di riparazione dell'acido citrico | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1202 | viene utilizzato per riparare l'antigene dopo la fissazione durante la procedura IHC. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | È stato progettato per l'istopatologia di routine e di ricerca fino a 200 cassette. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | È una stazione di inclusione di paraffina riscaldata e consente un funzionamento semplice e un controllo preciso, con conseguente miglioramento della qualità, un flusso di lavoro regolare e affidabilità. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | Si tratta di una piastra fredda che contiene più di 60/65 cassette sulla sua ampia superficie di lavoro. È stato progettato con un modulo di controllo adattivo all'ambiente per garantire che la temperatura di esercizio sia sempre stabilizzata a -6 °C. |
| Software CaseViewer | 3DHISTECH |
Riferimenti
- Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation. The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).
- Wang, H., et al.
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Ristampe e permessi
