Aqui nós fornecemos um protocolo que inclui instruções abrangentes para o estabelecimento econômico da localização de murino objeto e objeto romance reconhecimento testes comportamentais, incluindo o custo, projeto e construção de equipamentos necessários, bem como execução de testes comportamentais, coleta de dados e análise.
Testes comportamentais ethologically relevante são um componente crítico de qualquer estudo que utiliza modelos de rato para estudar os efeitos cognitivos de várias alterações fisiológicas ou patológicas. A tarefa de localização de objeto (OLT) e a tarefa de reconhecimento de objeto romance (NORT) são duas tarefas comportamentais eficazes comumente usadas para revelar a função e saúde relativa das regiões específicas do cérebro envolvidas na memória. Enquanto ambos destes testes exploram a preferência inerente dos ratos para a novidade revelar a memória para anteriormente encontraram objetos, o OLT principalmente avalia a aprendizagem espacial, que depende muito da atividade do hipocampo. O NORT, em contraste, avalia a aprendizagem não-espaciais da identidade de objeto, que se baseia em várias regiões do cérebro. Ambas as tarefas exigem uma arena aberta–testes de campo, objetos com equivalente valor intrínseco para os ratos, pistas ambientais adequadas e equipamentos de gravação de vídeo e o software. Sistemas comercialmente disponíveis, enquanto conveniente, podem ser caros. Este manuscrito detalha um método simples e econômico para a construção das arenas e configurar o equipamento necessário para realizar o OLT e NORT. Além disso, o manuscrito descreve um protocolo de teste eficiente que incorpora tanto OLT e NORT e fornece métodos típicos para aquisição de dados e análise, bem como resultados representativos. Conclusão bem sucedida destes testes pode fornecer insights valiosos sobre a função de memória de vários sistemas de modelo de rato e avaliar as regiões neurais subjacentes que oferecem suporte a essas funções.
Testes cognitivos eficazes isolar e avaliar a função neural de regiões específicas do cérebro, examinando o comportamento em um ambiente controlado1. Em humanos, tarefas específicas foram projetadas para avaliar o desempenho das regiões alvo do cérebro, tais como o cartão de Wisconsin triagem tarefa para função pré-frontal ou os associados emparelhados aprendizagem teste da (Cambridge neuropsicológica teste automatizado da bateria CANTAB) para função hippocampal2,3. Estes testes são projetados para estudar as funções das regiões específicas do cérebro em humanos avaliando comportamentos que resultam da atividade neural dessas regiões. O objetivo final da pesquisa biomédica mais é a melhoria da saúde humana; no entanto, muitos estudos da função cerebral em saúde ou doença não podem ser eticamente executados com participantes humanos. Para estudos que não podem usar os participantes humanos, pequenos roedores como os ratos são, muitas vezes, o modelo de escolha. Usar modelos de mouse permite o controle direto sobre manipulações experimentais, incluindo alteração da expressão genética, indução de lesão ou até mesmo modulação da atividade de circuito através de técnicas de optogenetic. Teste comportamental de ratos, semelhantes à experimentação humana, tem por objetivo avaliar o efeito das variáveis experimentais na função cerebral, medindo-se comportamentos que dependem de regiões específicas.
O hipocampo é uma estrutura essencial para a formação da memória em seres humanos e roedores4. Mais especificamente, o hipocampo desempenha um papel crítico na memória declarativa, envolvendo representações relacionais, mas a memória não processual, que conta com os motor centros do cérebro4. Função de memória hipocampo tem sido um foco de estudo em muitos campos da neurociência, porque é requintadamente sensível à perturbação. Perturbações negativas variando de estresse prolongado e envelhecimento para convulsões e acidente vascular cerebral estão associadas com danos hippocampal5. Em contraste, as intervenções positivas, tais como a interação social, enriquecimento ambiental físico ou exercício, melhoram a função hippocampal6,7,8. Estudos de roedores com testes adequados de memória hipocampo podem revelar insight sobre os mediadores celulares e moleculares da memória, bem como os efeitos das diferentes intervenções ambientais em função do hipocampo.
Em roedores, vários testes foram desenvolvidos para estudar o hipocampo-dependente da aprendizagem e memória de10,9,11. Eles em geral podem ser subdivididos em tarefas que exigem um estímulo com Valência emocional para provocar uma mudança de comportamento e tarefas que desenhar sobre a preferência de roedor para investigar novos estímulos11. Por exemplo, medo contextual condicionado, pares de um estímulo desagradável (choque de pé) com um contexto ambiental e, posteriormente, testes de memória para o contexto medindo induzida por medo congelante comportamento9,11. O labirinto de água de Morris e sua contraparte seco, o labirinto de Barnes, usam reforço negativo externo para promover a aprendizagem espacial4,11. Em cada caso, roedores procuram escapar de uma situação em contrário, ser imerso em água fria ou expostos em uma plataforma bem iluminada, respectivamente. O labirinto de braço radial, em contraste, se baseia em reforço positivo como animais usam natural comportamento de forrageamento, juntamente com a memória espacial para recuperar alimentos pequenas recompensas4,11. Essas tarefas são amplamente utilizadas e produziram conhecimento fundamental sobre memória hipocampo. No entanto, negativos e positivos de reforços externos ou medo de indução estímulos como choque adicionem um componente emocional para estes comportamental testes que em alguns casos pode ser indesejável. Por exemplo, o hipocampo dorsal e ventral é associados com funções distintas, memória espacial contra Regulamento emocional, respectivamente,12. Testes que dependem de uma resposta emocional a estímulos podem não refletir com precisão memória espacial prejudicada se Regulamento emocional hipocampo ventral funções também são afetadas.
O OLT é um teste simples e eficaz que fornece uma medida de memória espacial do hipocampo-dependente13. A tarefa depende de preferência intrínseca de um animal de novidade sem reforço externo adicional e pode, portanto, normalmente evitar complicações associadas a respostas emocionais diferencial13. O presente protocolo para OLT é apresentado para os ratos, mas também é eficaz em ratos se as dimensões dos equipamentos são dimensionadas adequadamente. O protocolo consiste em aclimatar um mouse para uma arena aberta–testes de campo e em seguida, permitindo-lhe investigar 2 objetos em relação espaciais pistas ambientais. O mouse, em seguida, é removido da arena, e durante um atraso (intervalo inter julgamento ou ITI), um dos objetos é movido. Após o ITI, o mouse é reintroduzido para a arena e permissão para explorar livremente. Em geral, os ratos preferem a novidade, e se eles se lembram a localização dos objetos de sua exposição inicial, eles vão passar mais tempo investigando o objeto movido. Animais com lesões hippocampal tem comprometido o espacial aprendizagem contextual e consequentemente não demonstram nenhuma preferência por objetos na novela localização14,15.
O OLT pode ser usado independentemente ou em combinação com um ensaio adicional de memória que desenha na atividade neural de várias regiões do cérebro, a tarefa de reconhecimento de objeto romance (NORT). O NORT é idêntico do OLT até a fase de teste, quando um dos objetos é substituído por um novo objeto em vez de ser movido para um novo local. Como é o caso com o OLT, ratos com boa memória dos objetos espontaneamente preferem investigar o objeto do romance. Em contraste com a memória de localização do objeto, que se baseia fortemente em substratos hippocampal, memória de reconhecimento de objeto parece confiar em uma variedade de regiões do cérebro e o envolvimento do hipocampo é instável. Muitos estudos relatório que lesões hippocampal ou inactivação não afetam romance objeto preferência10,13,16,17, enquanto outros acham o oposto de18,19. No entanto, ainda é uma tarefa comumente usada para avaliar a função de memória geral em roedores.
O protocolo apresentado aqui delineia as etapas envolvidas no Iniciar e executar o OLT e NORT, ambos que usam uma arena aberta–testes de campo. Equipamento de teste comportamental comercialmente disponível pode ser custo proibitivo, particularmente para laboratórios menores. Este protocolo inclui a concepção e os passos simples para construir arenas in-house, a um custo mínimo e sem ferramentas especializadas. Além disso, este protocolo detalha a área de testes comportamental ideal, incluindo a colocação de arenas, pistas contextuais e sistema de gravação de vídeo que prepara o palco para a implementação dos protocolos OLT e NORT. São apresentados resultados representativos para estudos de sucesso, bem como falhos, enfatizando a importância da otimização de todos os materiais e procedimentos para cada estudo.
Descrição | Opção | Quantidade |
Parte r: folha acrílica – branco opaco (0,635 cm x 40 cm x 40,64 cm) | Roteado bordas | 2 |
Parte b: folha acrílica – branco opaco (0,635 cm x 40 cm x 41.91 cm) | Roteado bordas | 2 |
Parte c: folha acrílica – branco opaco (0,635 cm x 41,91 cm x 41.91 cm) | Roteado bordas | 1 |
Acryllic cimento (1 pt). | AT | 1 |
Aplicador de hipo calibre 16 | AT | 1 |
Praça de combinação | AT | 1 |
Webcam HD | AT | 1 |
Software de captura de vídeo | AT | 1 |
Cabo de extensão 2.0 USB | AT | 1 |
Cabo condutor | AT | 1 |
Tabela 1: Lista detalhada de materiais e equipamentos necessários para os testes comportamentais.
Este protocolo fornece um método econômico para realizar a localização de objeto e objeto romance reconhecimento comportamental testes em ratos. Estes testes permitem a avaliação da função do hipocampo, bem como a função de outras regiões corticais, tais como o córtex pré-frontal, envolvido no reconhecimento de objeto10. A OLT e NORT têm a vantagem de evitar estímulos com Valência emocional forte que são necessários para o labirinto de água Morris, medo contextual condicionado, labirinto de Barnes ou labirinto de braço radial. Eles também evitam a necessidade de privação de alimentos necessários para o labirinto de braço radial. Além disso, este protocolo descreve um procedimento simples de teste de dois dias que não requer equipamentos extensos ou complicados para execução ou análise. Uma desvantagem dessas tarefas é que eles não permitem medidas de aprendizagem ou aquisição. Uma diferença na investigação de novidade pode ser devido a aprendizagem mais pobre sobre objetos durante o treinamento, memória para o que foi aprendido mais pobres ou ambos. Tempo total gasto investigando objetos é uma medida importante para descartar quaisquer diferenças inerentes na unidade de exploração, mas não é uma medida de aprendizagem. Se as medidas de aprendizagem são importantes para uma pergunta experimental, um labirinto de água, o labirinto de Barnes, ou labirinto radial braço provavelmente seria preferível.
Construção personalizada de arenas comportamentais tem potencial para salvar centenas de dólares e trazer o objeto dentro do alcance financeiro de uma grande variedade de laboratórios de teste. Este protocolo elimina muitos obstáculos e simplifica o processo de fabricação, a construção da arena in-house mais acessíveis aos cientistas sem formação especializada em acrílicos. É importante notar que compra folhas de acrílico coloridas que vão contrastar com os ratos, tais como o acrílico branco para ratos pretos e preto para ratos brancos, facilitará a aquisição de dados e análise, especialmente quando se utiliza comercialmente disponível software de análise. Ordenação de cut-to-size folhas com “roteados bordas” elimina a necessidade de uma tabela vi (tabela 1), e o uso de cimento acrílico remove a necessidade de perfurar e rebaixe os furos piloto. Enroscando em acrílico corte, perfuração e fixadores frequentemente faz com que ele quebra, chip e rachadura devido à sua natureza frágil. Porque o cimento é um solvente, que vai fluir para a área, juntou-se, dissolvendo e amaciamento qualquer acrílico encontra. Assim, ela deve não ser aplicada a cada parte separadamente como se fosse uma colagem tradicional. Ao contrário de cola, o cimento não vai preencher espaços negativos ou aderir às superfícies. Este é o principal motivo para o fim de “bordas roteadas” pois isso garantirá uma borda lisa e plana, criando um vínculo muito melhor. Quando o cimento seca, ele irá se fundiram as duas folhas de acrílico em uma única parte em um processo chamado “solvente de solda”. Muito parecido com metal de solda, o produto acabado é uma única peça, mas a área soldada será sempre o local mais fraco. Como tal, uma vez que as arenas estão em uso, deve ter cuidado para evitar o impacto direto ou estresse extremo em desses momentos.
Este protocolo também mostra como configurar 4 arenas para teste simultâneo de até 4 ratos (Figura 1 e Figura 2). As paredes opacas das arenas de impedem que ratos vendo um ao outro durante o teste, mas ainda há uma possibilidade que tendo outros ratos na sala causa odor ou distrações de ruído que podem afectar o teste. Ensaios de habituação, como detalhada aqui pode ajudam a atenuar esta preocupação, como os ratos são expostos para as condições do quarto de vários animais antes do teste comportamental. No entanto, se as distrações de outros ratos ou experimentador ruído associado com a manipulação de outros ratos é uma forte preocupação, uma arena com um mouse pode ser usado, também, embora ele aumentará o tempo necessário para completar a OLT e NORT com vários mouses. Mais de 4 arenas teoricamente poderiam ser usados também, mas a maioria das câmeras não têm um largo campo de visão para mostrar que muitas arenas com boa resolução.
As dimensões e as distâncias fornecidas aqui são orientações gerais para o teste comportamental do mouse em um quarto típico de teste que é 16 x 16 x 16 m3 , em dimensões (figura 1B e 1C). Inicia-se a sinais ambientais adequadas, arenas e equipamento de gravação de vídeo devem ser otimizada para cada ambiente. As sugestões podem consistir de grandes formas ou padrões (geralmente em preto e branco) que permitem que ratos para orientar-se espacialmente durante o OLT. Em vez de colocar pistas em diferentes locais em frente um do outro, as sugestões também podem ser montadas nas paredes da área de teste. Este protocolo recomenda dividindo o quarto com uma cortina para esconder o pesquisador e o computador durante o teste comportamental de teste. Durante toda a habituação, intervalos inter trial e ativos ensaios, pesquisadores devem fechar a cortina para separar-se da área de teste. Se isto não é prático, o computador pode permanecer tendo em conta os ratos, mas o pesquisador deve mover-se fora de vista durante a tarefa. Se o pesquisador estiver presente, os ratos podem tentar contar com ela ou a ele como uma sugestão espacial.
Todos os testes comportamentais devem ser concluídas em um ambiente controlado de temperatura e umidade com iluminação fraca, mas mesmo no mínimo estranhas som ou forte odor ambiental tacos, tais como perfumes na experimentadores e cerca de 310 lux. Entre cada dia de julgamento e teste, todas as arenas e objetos devem ser limpos com facilidade animal recomendada métodos de esterilização como limpando com etanol 70% ou água sanitária sem perfume toalhetes para minimizar as sugestões olfactory. Se desinfectantes químicos são usados, um enxágue final com etanol a 70% é recomendado porque muitos desinfectantes químicos podem ser irritantes para os pés dos animais. Tal como acontece com qualquer tarefa comportamental, tratamento de ratos para vários dias antes do teste é necessário para familiarizá-los com os indivíduos que estará realizando o OLT e NORT e reduzir o stress durante o teste de20,22. Como os ratos podem experimentar estresse agudo devido a indivíduos desconhecidos nas proximidades da área de testes, também é recomendável que todos os testes comportamentais devem ser concluído, o mesmo indivíduo (s). Os parâmetros de ensaio e condições detalhadas no presente protocolo foram otimizadas para 6 a 9 semanas de idade adulta C57Bl/6 os ratos e seriam muito útil em revelar deficiências de memória devido a lesão neste grupo etário ou deficiências de memória devido idade própria em ratos mais velhos. Se o objetivo é testar para melhorias de memória em ratos jovens, um mais longo ITI variando de 1 hora a 1 dia seria mais adequado para evitar efeitos de teto no desempenho na versão mais fácil de ITI 20 min. Com efeito, ITIs podem variar de 5 min. (para retirada imediata) a várias horas ou dias (para memórias remotas), consoante as necessidades específicas do experimento e as tensões e as idades dos ratos. Importante, independentemente da duração, ITIs todas devem ser consistentes entre as sessões em um experimento. Como diferentes variedades e idades de camundongos apresentam diferenças no comportamento e na aprendizagem, o tempo para cada julgamento e intervalo, testando o arranjo da área, e objetos usados podem ser modificados de acordo com a estirpe de ratos, sua idade e a lesão específica / doença/intervenção modelo sendo testados9,21,23,25.
Enquanto a hipocampo dependência das funções de memória espacial testado no OLT são bem estabelecida, o NORT pode ou não pode depender do hipocampo. Interpretação dos dados a partir do NORT deve levar esta ressalva conta. As variáveis determinantes, para se o hipocampo está envolvido, em memória de reconhecimento de objeto não são acordadas ainda, mas poderiam incluir comprimento ITI ou saliency de pistas espaciais18. Notavelmente, o protocolo apresentado usa espacial OLT antes do NORT, que pode influenciar os ratos para a utilização de processos hippocampal no NORT. Assim, é importante notar que a ordem pode ser invertida, ou cada tarefa pode ser executada de forma independente, dependendo dos experimentadores os dúvidas e necessidades.
Seleção de objetos é um aspecto crítico de ambas as OLT e NORT22,24. Objetos ideais são pesados o suficiente para não ser facilmente deslocada por um rato e feitos de material, como o vidro ou metal, que um rato não pode danificar por mastigar ou coçar. De madeira, espuma, ou objetos de plástico macios não são apropriados como eles são facilmente deformados e são difíceis de manter livre de odor. Além disso, os objetos usados nos julgamentos de todos devem ser relativamente semelhantes em tamanho, textura, odor e material. Figura 1 dá um exemplo de um objeto apropriado que pode ser usado. Esta estatueta de plástico laranja de uma gaja é preenchida com areia para dar-lhe peso suficiente e selada para evitar escapamento de limpeza reagentes ou outros agentes causadores de odor. Por causa da forma da parte superior, os ratos são incapazes de subir em cima de ou sentar nesse objeto. Para a OLT ou NORT, este objeto é melhor emparelhado com outro objeto de tamanho semelhante, peso, material, cor e complexidade, como um boneco de plástico semelhante de um coelho. Para garantir que a investigação objeto verdadeiramente reflete a preferência por novidade, todos os objetos devem ser validados para equivalente valor intrínseco com um mínimo de 8 ratos na mesma linhagem, sexo e idade do grupo experimental como descreveram na seção 2.9 do protocolo. Além disso, os objetos devem ser randomizados em termos de qual objeto é o objeto de romance ou movido entre ratos no mesmo estudo para continuar a garantir que as características intrínsecas dos objetos não influencia a preferência. Colocação de objeto pode afetar também muito o sucesso ou fracasso da OLT e NORT. Objetos devem ser contrabalançadas nas arenas e não ser muito perto das paredes. Um canto cheio de um objeto é um lugar atraente para os ratos para se esconder e isto irá confundir medidas de investigação.
Um requisito importante para coleta de dados é a definição “investigação”, que é quando um rato se envolve um objeto com o nariz apontado para o objeto não mais de 2 cm de distância. Um mouse, movendo-se por cima do objeto ou olhando para além do objeto não se qualifica como investigação ativa. Além disso, desde a OLT e NORT dependem um rato lembrando a localização espacial ou características reais do objeto, deve haver suficiente estudo destes durante os julgamentos de treinamento. Assim, o pesquisador deve definir um tempo mínimo de investigação e excluir quaisquer assuntos que não atendem a esse nível de linha de base de investigação, tradicionalmente fixada em 20 segundos21.
Quantificação do tempo de investigação do objeto pode ser realizada de várias formas, com ou sem o software de análise de caro. Se marcar manual é usado, como descrito aqui, a mais completa coleção de dados pode ser conseguida gravar os selos de tempo no vídeo quando o mouse está a investigar o objeto. Os tempos de start e stop de investigação do objeto durante os três ensaios individuais de gravação cria um registro permanente de carimbos tempo imparcial e facilita o cálculo manual preciso de dados em vez de métodos alternativos como o uso de um cronômetro para aditivamente Registre o tempo total que um rato investiga cada objeto.
Pacotes de software comerciais também estão disponíveis para a investigação do objeto de pontuação. Software disponível comercialmente pode fornecer uma riqueza de dados, além da mão marcando dados aqui descritos, incluindo a distância total percorrida, tempo gasto em certas áreas da arena e a velocidade de movimento16,23. Software, depois de devidamente calibrado e confirmado para detectar confiantemente a investigação do objeto, pode também produzir dados muito mais rápidos que o manual de pontuação. Este rendimento de dados mais rápido, a longo prazo, produzir economias líquidas, em comparação com os humanos-horas necessárias para marcar manual. No entanto, a maioria dos pacotes de software para análise comportamental têm altos custos adiantados que podem ser proibitivos para muitos laboratórios e marcando manual muitas vezes pode ser realizado por pesquisadores do estudante, fazendo com que os custos por hora de marcar um gol comportamental mínima. Software comercial também frequentemente vem com restrições sobre quantos usuários podem acessar o software ao mesmo tempo, limitando a poupança de tempo e o throughput de dados. Embora haja muitas vantagens para esses pacotes de software, eles não são necessários para coletar as informações essenciais de tempo investigando objetos da OLT e NORT. A capacidade de adquirir manualmente esses dados torna tarefas objeto romance financeiramente mais acessível a uma ampla variedade de pesquisadores.
Uma característica adicional do presente protocolo é que a primeira sessão de habituação é essencialmente uma experimentação em campo aberto, que pode produzir dados sobre a atividade e os níveis de ansiedade. Níveis de atividade podem ser quantificados usando a distância total percorrida ou média velocidade, se o software de rastreamento está disponível. Da mesma forma, com software de monitoramento, medidas de ansiedade podem ser derivadas de tempo gasto no centro da arena ou distância percorrida no centro. Estes dados também podem ser adquiridos manualmente por sobrepondo o vídeo da arena com uma grade e quantificação dos cruzamentos. Este dados de campo aberto podem ajudar a descartar déficits motor brutos ou ansiedade excessiva que pode interferir com a investigação do objeto mais tarde.
Os testes estatísticos utilizados neste protocolo são representativos dos métodos tradicionais de análise. Quando comparando 2 grupos de ratos, um teste t de duas amostras, bicaudal é recomendado para testar a significância da diferença em porcentagem tempo investigando o objeto movido ou romance entre grupos. Se os tamanhos de amostra são irregulares, têm excepcionalmente alta variabilidade, ou mostrar variabilidade desigual entre os grupos, que um teste não-paramétrico é recomendado em vez disso, como muitos dos pressupostos subjacentes do t-teste violação nestas condições. Comparando-se 3 ou mais grupos de ratos, ANOVAs são recomendados para testar se o grupo tem um efeito significativo na porcentagem tempo investigando o objeto movido ou romance. Corrigido erro post-hoc testes, como teste de Tukey ou correção de Bonferroni comparações emparelhadas, pode então ser aplicado para testar a diferença de tempo de investigação por cento entre cada par de grupos. Com o OLT, uma maneira adicional para analisar os dados é testar para uma mudança significativa na porcentagem tempo investigando o objeto movido de formação para ensaios de OLT. Com apenas um grupo de ratos, este teste assumiria a forma de um emparelhados, bicaudal t-teste, teste para mudanças significativas no tempo por cento com o objeto movido de treinamento para OLT em cada rato (tendo em mente que estas são emparelhados análises e não independente medições, desde que cada rato rende dois pontos de dados). Com dois grupos de ratos, um medidas repetidas ANOVA de duas vias seria usado, com a medida repetida sendo o julgamento (treinamento contra OLT) e atribuição de grupo, sendo o segundo fator. Post-hoc de testes para as diferenças entre os grupos de tratamento devem comparar os grupos uns aos outros dentro de ensaios.
Como alternativa, se a evidência de memória no NORT ou OLT é tudo o que está sendo testado, um t-teste uma amostra por cento tempo investigando um objeto contra o valor fixo de 50% pode ser usado. Um porcentagem significativamente maior do que 50% de tempo sugere a memória para o objeto. Um tempo percentual significativamente inferior a 50% sugere aversão (por algum motivo), e escolhas de objeto devem ser reavaliadas. No entanto, o teste-t de uma amostra não pode revelar se dois ou mais grupos diferem entre si. Por exemplo, em um experimento com dois grupos de ratos, se o grupo A gastou 60% do tempo com o novo objeto para p = 0.049 por uma amostra de teste t de comparação para 50% e o grupo B, apenas passou de 59% do tempo com o novo objeto para p = 0,051 , O grupo A é significativamente diferente de 50% (e não é grupo B). No entanto, é errôneo concluir que estes dois grupos são significativamente diferentes uns dos outros. Um teste t de duas amostras comparando A e a B podem facilmente revelar que estes dois grupos são estatisticamente indistinguíveis. Se o objetivo final é para comparar o desempenho de memória de dois ou mais grupos, esses grupos devem ser comparados estatisticamente uns aos outros, não só em comparação com um padrão externo. Uma diretriz similar aplica-se para uma comparação de tempo gasto com um objeto movido entre formação e OLT. Neste caso, encontrar uma diferença significativa no tempo por cento com um objeto movido entre formação e OLT em um grupo e não em outro que não mostra que estes grupos são estatisticamente diferentes. Grupos devem ser post-hoc comparado uns contra os outros dentro de cada julgamento, não só através de ensaios dentro do grupo.
É importante ter em mente que o tempo de investigação de qualquer rato individual não pode ser usado como evidência a favor ou contra a memória. Em vez disso, memória para localização do objeto ou identidade nestas tarefas pode apenas concluir com base em dados agregados que estatisticamente são comparados com os níveis de hipótese fixa (50% por tempo, 0 para a relação entre discriminação) ou dados agregados do outro grupo. O tamanho da amostra necessária dependerá fortemente do tamanho do efeito de uma manipulação específica e a variabilidade no comportamento, os quais por sua vez dependerá os ratos sendo usados. Idade, sexo e manipulações causam impacto variabilidade. Nos dados de exemplo apresentados na Figura 3A e 3B, n = 14 temas foram usados, rendendo um tamanho de efeito de 0,68 e poder de 0,65 para um teste t pareado com α = 0,05. Se uma potência de 0.8 foram desejada para esta comparação, um tamanho de amostra de 18 seria necessário.
Esta discussão está enquadrada em torno de p-valores e cortes de significado porque estas são as medidas e análises mais tipicamente relataram para dados OLT e NORT e, portanto, são prováveis que familiar para experimentadores e revisores. Essa dependência do p-valores tem sido fortemente criticada como estatisticamente inválido26. No entanto, apesar de métodos de análise alternativos existem e são endossados em algumas revistas27, nenhum foram amplamente adotados pelos campos biomédicos e comportamentais como padrão26.
Em resumo, este protocolo efetivamente testes de memória em camundongos com custos mínimos. Recomendações de modificações apropriadas no protocolo são incluídas para assegurar a implementação bem sucedida com qualquer modelo de pequeno roedor. Aplicação do presente protocolo específico ferimentos ou modelos de intervenção terapêutica pode revelar valiosa relevância funcional que complementa os mecanismos celulares e moleculares em estudo.
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pelo NS089938 R00 de NIH e financiamento de sementes de lesão cerebral crônica e temas de descoberta no The Ohio State University para EDK.
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 15.75" with Routed Edges |
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 16.5" with Routed Edges |
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 16.5" x 16.5" with Routed Edges |
TAP Acryllic Cement (1 pt.) | TAP Plastics | NA | |
16 Gauge Hypo Applicator | TAP Plastics | NA | |
Debut Video Capture Software Pro Edition | NCH Software | NA | |
Stanely SAE/Metric Comb Square | Grainger | 6R171 | |
Logitech Pro Stream Webcam C922x | CDW | 4429927 | |
Belkin 16' USB 2.0 Active Extension Cable | CDW | 570691 | |
Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8') | CDW | 300902 | |
Spatial/Environmental Cues | Variable | NA | |
Objects for testing | Variable | NA | |
70% ethanol | Variable | NA | |
Double-sided tape | Variable | NA |