Orthotopique l’Injection de cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de souris
Summary
Ici, nous présentons un protocole visant à implanter des cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de manière simple, façon invasive et facile à manipuler, moins et ce modèle murin orthotopique breast cancer avec un environnement approprié coussinets adipeux mammaire peut être utilisé pour étudier divers aspects de la cancer.
Abstract
Un modèle animal approprié est essentiel pour une meilleure compréhension des maladies. Animaux modèles établis par différentes méthodes (injections sous-cutanées, xénogreffes, manipulation génétique, induction de réactifs chimiques, etc.) ont des caractères pathologiques diverses et jouent un rôle important dans l’enquête sur certains aspects du maladies. Bien qu’aucun modèle ne peut imiter totalement la progression de la maladie humaine entière, modèles de maladies orthotopique organes avec un bon environnement stromal jouent un rôle irremplaçable dans la compréhension des maladies et de dépistage de médicaments potentiels. Dans cet article, nous décrivons comment implanter des cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de manière simple, de manière moins invasive et facile à manipuler et suivez la métastase à des organes éloignés. Avec les fonctionnalités appropriées de croissance de la tumeur primitive, du sein et des changements pathologiques de mamelon et une fréquence élevée de métastases des autres organes, ce modèle maximumly imite la progression du cancer du sein humain. Tumeur primitive croissance in situ, métastases à longue-distance et le microenvironnement tumoral du cancer du sein peuvent être étudiées à l’aide de ce modèle.
Introduction
Le cancer est la principale cause de mortalité féminine dans le monde entier. Avec son incidence augmentant progressivement, le cancer du sein est devenu un défi sérieux pour la santé publique1. Modèles murins de cancer sont de bonnes passerelles entre les études précliniques et cliniques, et un modèle de bonne maladie murine mimic va augmenter la précision de la recherche sur la maladie et la médecine.
Croissance de la tumeur primaire commence la progression de la maladie maligne, tandis que les métastases et les complications sont les principales causes de décès et les qualités de vie pauvre dans la plupart des patients de cancer. Plusieurs modèles murins sont utilisées pour imiter la pathologie du sein cancer2,3,4. Des modèles de xénogreffes sont largement utilisés pour l’étude sur le cancer comprendre les caractères pathologiques et à des médicaments de l’écran pour la sécurité et l’efficacité de6,5,7. Des souris génétiquement modifiées (GEM) sont générés pour imiter le cancer du sein humain en ciblant certains oncogènes ou tumeur de gènes suppresseurs8. GEM ont un fond relativement simple et uniforme, de comprendre le rôle des gènes en cours cancéreuses ; Toutefois, le milieu artificiel et l’arrière-plan sont limitées pour enquêter sur la pathologie de la métastase et associés à des thérapies9. Les cellules cancéreuses humaines, mais avec des caractéristiques pathologiques humains, peuvent seulement être implantés chez des souris immunodéficientes, et l’insuffisance de l’interaction immunitaire de tumeur-hôte peut conduire à des résultats biaisés10.
Où la tumeur solide initie a une influence directe sur les caractères biologiques et pathologiques de la maladie de12,11,13. Cancéreuses progrès étant le résultat complexe d’interactions entre les cellules tumorales, les cellules du stroma, cellules d’immunologie, des cellules inflammatoires, facteurs de croissance et des protéases, tumeurs primaires implantés in situ sera donner meilleure idée et imiter les processus cancéreux ont plus de précision que les tumeurs induites par des agents chimiques ou une injection sous-cutanée de tumeur cellules. Agents chimiques utilisés pour induire des tumeurs peuvent être nocives pour l’environnement et des chercheurs et sont même interdits dans certains pays. En raison de l’absence d’un environnement de coussinets adipeux mammaire, la progression pathologique d’une injection sous-cutanée peut-être différer avec que dans le véritable cancer, dont le cancer est originaire et irrite depuis les coussinets adipeux mammaire. Les inconvénients des injections sous-cutanées encouragent l’utilisation de modèles orthotopiques pour étudier la croissance tumorale. Dans des recherches antérieures, fortement métastatiques tumeurs MDA-MB-231, mis au point après la transplantation orthotopique sept, a indiqué l’importance de l’injection emplacement14. Récemment, l’implantation orthotopique de cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire par la chirurgie a été signalée15,16. Avec l’environnement pad mammaires, la croissance de la tumeur et la migration vers des organes éloignés de la couverture de l’ensemble du processus du cancer du sein sur sites pathologiquement concernés, qui en fait modèle miniature de la progression des maladies humaines. Cependant, après la chirurgie, la peau se tente automatiquement de se guérir lui-même, qui peut apporter le risque potentiel de porter atteinte à l’origine du cancer du sein normal et biaiser les résultats.
Nous avons comparé à certains modèles de cancer du sein et établi un modèle orthotopique minimalement invasive pour étudier l’effet potentiel des médicaments breast cancer progression17,18. Dans cette étude, un protocole vidéo sur la façon d’orthotopically injecter des cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de manière simple, manière moins invasive est présenté. Cette méthode d’injection orthotopique sans chirurgie est avantageuse à bien des égards. Tout d’abord, l’opération est simple et rapide, environ 1 minute de chaque souris. En second lieu, avec des foyers de tumeur primitive à partir des droite pathologiques sites, elle couvre le processus tumorigène ensemble de la progression du cancer du sein de la croissance de la tumeur à autres métastases d’organes, qui fournit un bon modèle animal expérimental pour l’étude de la interaction des cellules tumorales et microenvironnement tumoral. En outre, il peut être un modèle précieux pour évaluer les effets de traitement à tous les stades du cancer du sein. L’objectif de cette méthode est de fournir un modèle animal pour la progression du cancer maximumly maternel mimic.
Protocol
Representative Results
Discussion
Les cellules utilisées dans cette étude sont 4 t 1-luc2, murin triple négatif cellules cancéreuses avec luciférase d’étiquetage, qui constituent un outil utile pour investir les effets antitumoraux et antimétastatique des médicaments en raison de leur caractère très invasif2,19 . Luciférases, stables à la prochaine génération de cellule, sont utilisés pour indiquer la tumeur de la vie des cellules, à la glande mammaire, ainsi que chez les autres…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subvention No 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), la Fondation des sciences naturelles de Pékin (subvention No 7172095, 7162084, 7162083) et la Xu Xia fondation de l’hôpital de Beijing de La médecine traditionnelle chinoise (subvention no, xx201701). Nous remercions le professeur Chang-Zhen Liu, du centre de recherche expérimental, China Academy of Sciences médicales chinoises, pour images bioluminescents.
Materials
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | – | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | – | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | – | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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