JoVE Journal > Cancer Research
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Risultati
Discussion
Divulgazioni
Acknowledgements
Materials
Riferimenti
Traduzione automatica
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Ricerca sul cancro

Paramyxovirus för tumör-riktade immunmodulering: Design och utvärdering Ex Vivo

Published: January 07, 2019
doi:
10.3791/58651
,
1Department of Translational Oncology,German Cancer Research Center (DKFZ) and National Center for Tumor Diseases (NCT), 2Faculty of Biosciences,Heidelberg University, 3Department of Medical Oncology,NCT and Heidelberg University Hospital

Summary

Det här protokollet beskriver en detaljerad arbetsflöde för generering och ex vivo karakterisering av onkolytisk virus för uttryck av immunomodulatorer, med mässlingvirus kodning bispecific T cell engagers som exempel. Ansökan och anpassning till andra vektor plattformar och transgener kommer att påskynda utvecklingen av nya immunovirotherapeutics för kliniska översättning.

Abstract

Framgångsrika cancer immunoterapi har potential att uppnå långsiktig tumör kontroll. Trots senaste kliniska framgångar återstår det ett brådskande behov av säkra och effektiva behandlingar som skräddarsys individuella tumör immun profiler. Onkolytisk virus aktiverar induktion av anti-tumor immunsvar samt tumör begränsad genuttryck. Det här protokollet beskriver den generation och ex vivo analysen av immunmodulerande onkolytisk vektorer. Fokusera på mässling vaccinvirus kodning bispecific T cell engagers som ett exempel, kan allmän metod anpassas till andra virus arter och transgener. Presenterade arbetsflödet innehåller design, kloning, räddning, och förökningen av rekombinanta virus. Analyser att analysera replikering kinetik och lytisk aktivitet av vektor samt funktionaliteten i den isolerade immunmodulerande ex vivo ingår, vilket underlättar generationen av romanen agenter för vidareutveckling i prekliniska modeller och slutligen kliniska översättning.

Introduction

Onkolytisk virus (OVs) utvecklas som mot cancer therapeutics som specifikt replikera inom och döda tumörceller medan frisk vävnad intakt. Det har nu blivit vanligt förstå att onkolytisk virotherapy (ÖVT), i de flesta fall, förlitar sig inte enbart på komplett tumör lysis genom effektiv replikering och sprider viruset, men kräver ytterligare verkningsmekanismer för behandlingframgång, inklusive vaskulära och stromal inriktning och allt immun stimulering1,2,3,4. Medan många tidiga OV studier används omodifierade virus, har aktuell forskning gynnats av en förbättrad biologisk förståelse, virus biobanker som potentiellt innehåller roman OVs, och de möjligheter som erbjuds av genteknik för att skapa avancerade OV plattformar5,6,7.

Med tanke på den senaste tidens framgången immunterapi, är immunmodulerande transgener av särskilt intresse när det gäller gentekniken av OVs. Riktade uttryck för sådana genprodukter av OV-infekterad tumörceller minskar toxicitet jämfört med systemisk administrering. Inriktning uppnås antingen genom att använda virus med inneboende oncoselectivity eller genom att ändra viral tropism8. Lokala immunmodulering förbättrar OVT mångfacetterade anti-tumor mekanismer. Denna strategi är dessutom instrumental i förhör samspelet mellan virus, tumörceller och värd immunsystemet. Därför ger detta protokoll ett tillämpligt och justerbar arbetsflöde för att designa, klona, rädda, propagera och validera onkolytisk paramyxovirus (specifikt mässlingvirus) vektorer kodning sådan transgener.

Modulering av immunsvaret kan uppnås genom ett brett utbud av transgenens produkter inriktning olika steg av cancer-immunitet cykel9, inklusive förbättra tumör antigen erkännande [t.ex. tumör-associerade antigener (TAAs) eller inducerare av stora histocompatibility komplex (MHC) klass I molekyler] över stödja dendritiska cellen mognad för effektiv antigen-presentation (cytokiner); rekrytera och aktivera önskad immunceller som cytotoxiska och helper T-celler [chemokiner, bispecific T cell engagers (bö)]; inriktning suppressiv celler regulatoriska T-celler, myeloid-derived suppressor, tumör-associerad makrofager, och cancer-associerade fibroblaster (antikroppar, bö, cytokiner); och förhindra effektor celler hämning och utmattning (checkpoint-hämmare). Således finns en uppsjö av biologiska agens. Det är nödvändigt att förbättra cancerbehandling utvärdering av sådana virus-kodade immunomodulatorer angående terapeutisk effekt och eventuella synergieffekter samt förståelse av respektive mekanismer.

Negativ bemärkelse enkelsträngat RNA-virus av familjen Paramyxoviridae kännetecknas av flera funktioner bidrar till deras användning som onkolytisk vektorer. Dessa inkluderar en naturlig oncotropism, stor genomisk kapacitet för transgener (mer än 5 kb)10,11, effektiv spridning inklusive syncytia bildning och hög immunogenicitet12. Därför OV plattformar baserade på valpsjuka virus13, påssjuka virus14, Newcastle sjukdom virus15, Sendai virus16,17, simian virus 518och Tupaia paramyxovirus19 har utvecklats. Mest framträdande, levande försvagat mässlingvirusvaccin stammar (MV) har utvecklats i preklinisk och klinisk utveckling20,21. Dessa virusstammar har använts i decennier för rutin immunisering med en utmärkt säkerhet rekord22. Dessutom finns det ingen risk för insertionsmutationer på grund av strikt cytosoliska replikering av paramyxovirus. En mångsidig omvänd genetik system baserat på anti genomisk cDNA som möjliggör införande av transgener i ytterligare transkription enheter (ATUs) är tillgängliga11,23,24. MV vektorer kodning natriumjodid symporter (MV-NIS) för imaging och strålbehandling eller lösliga carcinoembryonalt antigen (MV-CEA) som surrogatmarkör för viral genuttryck utvärderas för närvarande i kliniska prövningar (NCT02962167, NCT02068794, NCT02192775, NCT01846091, NCT02364713, NCT00450814, NCT02700230, NCT03456908, NCT00408590 och NCT00408590). Säker administration har bekräftats och anti-tumör effekt har rapporterats i tidigare studier25,26,27,28,29, 30 (granskas av Msaouel et al.31), bana väg för ytterligare onkolytisk mässlingvirus som har utvecklats och testats prekliniskt. MV kodning immunmodulerande molekyler inriktning olika steg av cancer-immunitet cykeln har visat sig fördröja tumörens tillväxt och/eller förlänga överlevnaden hos möss, med bevis för immunmedierade effekt och långsiktiga skyddande immunologiskt minne i syngena mus-modeller. Vektor-kodade transgener inkluderar granulocyt-makrofag kolonistimulerande faktor (GM-CSF)32,33, H. pylori neutrofiler-aktiverande protein34, immun checkpoint-hämmare35, interleukin-12 (IL-12)36, TAAs37och BTEs38, som tvärbinda en tumör ytantigen med CD3 och därmed framkalla antitumöraktivitet av polyklonala T-celler, oavsett T-cell receptor specificitet och samtidig stimulering ( (Se figur 1). Lovande prekliniska resultaten för dessa konstruktioner efterfrågan ytterligare translationell insatser.

Talimogen laherparepvek (T-VEC), en typ jag herpes simplex-virus kodning GM-CSF, är den enda onkolytisk terapeutiska godkänd av amerikanska Food och Drug Administration (FDA) och Europeiska läkemedelsmyndigheten (EMA). I fas III-studie som leder till godkännanden i slutet av 2015 har inte bara visat effekt på platsen för intra-tumoral injektion, men även abscopal effekter (dvs remissioner av icke-injicerade lesioner) i avancerat melanom39. T-VEC har sedan dess trätt ytterligare prövningar för tillämpning i andra tumör enheter (t.ex., icke-melanom hudcancer, NCT03458117, pankreascancer, NCT03086642) och för utvärdering av kombinationsbehandlingar, särskilt med immun checkpoint hämmare (NCT02978625, NCT03256344, NCT02509507, NCT02263508, NCT02965716, NCT02626000, NCT03069378, NCT01740297 och Ribas et al.40).

Detta visar inte bara potentialen i onkolytisk immunterapi men också behovet av ytterligare forskning för att identifiera överlägsen kombinationer av OVT och immunmodulering. Rationell design ytterligare vektorer och utveckling för preklinisk testning är nyckeln till detta åtagande. Detta kommer också förväg förståelse för bakomliggande mekanismer och konsekvenser för utvecklingen mot mer personlig cancerbehandling. Därför presenterar denna skrift en metod för en modifiering och utveckling av paramyxovirus för riktade cancer immunoterapi och mer specifikt av onkolytisk mässlingvirus kodning T cell-engagerande antikroppar (figur 2).

Protocol

Obs: [O], [P], och [M] ange underavsnitt gäller: OVs i allmänhet, (de flesta) paramyxovirus, eller MV endast, respektive. [B] anger sektioner som är specifika för BTE transgener. 1 kloning av immunmodulerande-encoding transgener i mässling virusvektorer [O] design infoga sekvens. [O] besluta om en immunmodulerande av intresse utifrån litteraturforskning eller explorativa data såsom genetiska skärmar41 och h?…

Representative Results

Figur 1 illustrerar verkningsmekanismen av onkolytisk mässlingvirus kodning bispecific T cell engagers. Ett flödesschema som skildrar arbetsflödet i detta protokoll presenteras i figur 2. Figur 3 visar ett exempel på en modifierad onkolytisk mässling virus arvsmassa. Detta ger en visuell representation av de specifika ändringar tillämpas på mässling virus anti genomet och s…

Discussion

Onkolytisk immunterapi (i.e., OVT i kombination med immunmodulering) innehar stort löfte för cancerbehandling, kräver ytterligare utveckling och optimering av onkolytisk virus kodning immunmodulerande proteiner. Det här protokollet beskriver metoder för att generera och verifiera sådana vektorer för efterföljande testning i relevanta prekliniska modeller och potentiella framtida kliniska översättning till romanen mot cancer therapeutics.

Många olika onkolytisk virus plattfo…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dessa metoder var etablerade i gruppen Virotherapy som leds av Prof. Dr. Dr. Guy Ungerechts vid National Center för tumörsjukdomar i Heidelberg. Vi står i skuld till honom och alla medlemmar i laboratoriet laget, särskilt Dr Tobias Speck, Dr Rūta Veinalde, Judith Förster, Birgit Hoyler, och Jessica Albert. Detta arbete fick stöd av den annan Kröner-Fresenius-Stiftung (Grant 2015_A78 till C.E. Engeland) och tyska National Science Foundation (DFG, bevilja C.E. Engeland sv 1119/2-1). J.P.W. Heidbuechel får ett stipendium av Helmholtz internationella forskarskolan för cancerforskning.

Materials

Rapid DNA Dephos & Ligation Kit Roche Life Science, Mannheim, Germany 4898117001
CloneJET PCR Cloning Kit Thermo Fisher Scientific, St. Leon-Rot K1231
Agarose Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany A9539-500G
QIAquick Gel Extraction Kit QIAGEN, Hilden, Germany 28704
NEB 10-beta Competent E. coli New England Biolabs (NEB), Frankfurt/Main, Germany C3019I
LB medium after Lennox Carl Roth, Karlsruhe, Germany X964.1
Ampicillin Carl Roth, Karlsruhe, Germany HP62.1
QIAquick Miniprep Kit QIAGEN, Hilden, Germany 27104
Restriction enzyme HindIII-HF New England Biolabs (NEB), Frankfurt/Main, Germany R3104S
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) Invitrogen, Darmstadt, Germany 31966-021
Fetal bovine serum (FBS) Biosera, Boussens, France FB-1280/500
FugeneHD Promega, Mannheim, Germany E2311 may be replaced by transfection reagent of choice
Kanamycin Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany K0129
Vero cells ATCC, Manassas, VA, USA CCL81
B16-CD46/ B16-CD20-CD46 J. Heidbuechel, DKFZ Heidelberg available upon request
Granta-519 DSMZ, Braunschweig, Germany ACC 342
Opti-MEM (serum-free medium) Gibco Life Technologies, Darmstadt, Germany 31985070
Colorimetric Cell Viability Kit III (XTT) PromoKine, Heidelberg, Germany PK-CA20-300-1000 includes XTT reagent
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (PBS) Gibco Life Technologies, Darmstadt, Germany 14190-094
QIAquick Ni-NTA Spin Columns QIAGEN, Hilden, Germany 31014
Sodium chloride Carl Roth, Karlsruhe, Germany 3957.3
Imidazole Carl Roth, Karlsruhe, Germany I5513-25G
Amicon Ultra-15, PLGC Ultracel-PL Membran, 10 kDa Merck, Darmstadt, Germany UFC901024
BCA Protein Assay Kit Merck Milipore 71285-3
IgG from human serum Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany I4506
Anti-HA-PE Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany 130-092-257 RRID: AB_871939
Mouse IgG1, kappa Isotype Control, Phycoerythrin Conjugated, Clone MOPC-21 antibody BD Biosciences, Heidelberg, Germany 555749 RRID: AB_396091
Anti-HA-biotin antibody, clone 3F10 Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Germany 12158167001 RRID: AB_390915
Anti-Biotin MicroBeads Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany 130-090-485
MS Columns Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany 130-042-201
MiniMACS Separator Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany 130-042-102
MACS MultiStand Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany 130-042-303
RIPA buffer Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA, USA MB-030-0050
CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay Promega, Mannheim, Germany G1780 includes 10x lysis solution, substrate solution (substrate mix and assay buffer), and stop solution
Cell lifter Corning, Reynosa, Mexico 3008
10 cm dishes Corning, Oneonta, NY, USA 430167
15 cm dishes Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany 639160
96-well plates, U-bottom TPP, Trasadingen, Switzerland 92097
96-well plates, flat bottom Neolab, Heidelberg, Germany 353072
6-well plates Neolab, Heidelberg, Germany 353046
12-well plates Neolab, Heidelberg, Germany 353043
50 mL tubes nerbe plus, Winsen/Luhe, Germany 02-572-3001
T175 cell culture flasks Thermo Fisher Scientific, St. Leon-Rot 159910
0.22 µm filters Merck, Darmstadt, Germany SLGPM33RS
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Riferimenti

  1. Lichty, B. D., Breitbach, C. J., Stojdl, D. F., Bell, J. C. Going viral with cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer. 14 (8), 559-567 (2014).
  2. Cassady, K. A., Haworth, K. B., Jackson, J., Markert, J. M., Cripe, T. P. To Infection and Beyond: The Multi-Pronged Anti-Cancer Mechanisms of Oncolytic Viruses. Viruses. 8 (2), (2016).
  3. Twumasi-Boateng, K., Pettigrew, J. L., Kwok, Y. Y. E., Bell, J. C. Oncolytic viruses as engineering platforms for combination immunotherapy. Nature Reviews Cancer. , (2018).
  4. Achard, C., et al. Lighting a Fire in the Tumor Microenvironment Using Oncolytic Immunotherapy. EBioMedicine. 31, 17-24 (2018).
  5. Kelly, E., Russell, S. J. History of oncolytic viruses: genesis to genetic engineering. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 15 (4), 651-659 (2007).
  6. Russell, S. J., Peng, K. W., Bell, J. C. Oncolytic virotherapy. Nature Biotechnology. 30 (7), 658-670 (2012).
  7. Russell, S. J., Peng, K. W. Oncolytic Virotherapy: A Contest between Apples and Oranges. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 25 (5), 1107-1116 (2017).
  8. Seymour, L. W., Fisher, K. D. Oncolytic viruses: finally delivering. British Journal of Cancer. 114 (4), 357-361 (2016).
  9. Chen, D. S., Mellman, I. Oncology meets immunology: the cancer-immunity cycle. Immunity. 39 (1), 1-10 (2013).
  10. Gao, Q., Park, M. S., Palese, P. Expression of transgenes from newcastle disease virus with a segmented genome. Journal of Virology. 82 (6), 2692-2698 (2008).
  11. Billeter, M. A., Naim, H. Y., Udem, S. A. Reverse genetics of measles virus and resulting multivalent recombinant vaccines: applications of recombinant measles viruses. Current Topics in Microbiology and Immunology. 329, 129-162 (2009).
  12. Matveeva, O. V., Guo, Z. S., Shabalina, S. A., Chumakov, P. M. Oncolysis by paramyxoviruses: multiple mechanisms contribute to therapeutic efficiency. Molecular Therapy Oncolytics. 2, (2015).
  13. Suter, S. E., et al. In vitro canine distemper virus infection of canine lymphoid cells: a prelude to oncolytic therapy for lymphoma. Clinical Cancer Research. 11 (4), 1579-1587 (2005).
  14. Ammayappan, A., Russell, S. J., Federspiel, M. J. Recombinant mumps virus as a cancer therapeutic agent. Molecular Therapy Oncolytics. 3, 16019 (2016).
  15. Schirrmacher, V. Oncolytic Newcastle disease virus as a prospective anti-cancer therapy. A biologic agent with potential to break therapy resistance. Expert Opinion on Biological Therapy. 15 (12), 1757-1771 (2015).
  16. Saga, K., Kaneda, Y. Oncolytic Sendai virus-based virotherapy for cancer: recent advances. Oncolytic Virotherapy. 4, 141-147 (2015).
  17. Matveeva, O. V., Kochneva, G. V., Netesov, S. V., Onikienko, S. B., Chumakov, P. M. Mechanisms of Oncolysis by Paramyxovirus Sendai. Acta Naturae. 7 (2), 6-16 (2015).
  18. Gainey, M. D., Manuse, M. J., Parks, G. D. A hyperfusogenic F protein enhances the oncolytic potency of a paramyxovirus simian virus 5 P/V mutant without compromising sensitivity to type I interferon. Journal of Virology. 82 (19), 9369-9380 (2008).
  19. Engeland, C. E., et al. A Tupaia paramyxovirus vector system for targeting and transgene expression. The Journal of General Virology. 98 (9), 2248-2257 (2017).
  20. Russell, S. J., Peng, K. W. Measles virus for cancer therapy. Current Topics in Microbiology and Immunology. 330, 213-241 (2009).
  21. Aref, S., Bailey, K., Fielding, A. Measles to the Rescue: A Review of Oncolytic Measles Virus. Viruses. 8 (10), (2016).
  22. Demicheli, V., Rivetti, A., Debalini, M. G., Di Pietrantonj, C. Vaccines for measles, mumps and rubella in children. The Cochrane Database of Systematic Reviews. (2), 004407 (2012).
  23. Radecke, F., et al. Rescue of measles viruses from cloned DNA. The EMBO Journal. 14 (23), 5773-5784 (1995).
  24. Martin, A., Staeheli, P., Schneider, U. RNA polymerase II-controlled expression of antigenomic RNA enhances the rescue efficacies of two different members of the Mononegavirales independently of the site of viral genome replication. Journal of Virology. 80 (12), 5708-5715 (2006).
  25. Russell, S. J., et al. Remission of disseminated cancer after systemic oncolytic virotherapy. Mayo Clinic Proceedings. 89 (7), 926-933 (2014).
  26. Hardcastle, J., et al. Immunovirotherapy with measles virus strains in combination with anti-PD-1 antibody blockade enhances antitumor activity in glioblastoma treatment. Neuro-Oncology. 19 (4), 493-502 (2017).
  27. Dispenzieri, A., et al. Phase I trial of systemic administration of Edmonston strain of measles virus genetically engineered to express the sodium iodide symporter in patients with recurrent or refractory multiple myeloma. Leukemia. 31 (12), 2791-2798 (2017).
  28. Galanis, E., et al. Phase I trial of intraperitoneal administration of an oncolytic measles virus strain engineered to express carcinoembryonic antigen for recurrent ovarian cancer. Ricerca sul cancro. 70 (3), 875-882 (2010).
  29. Galanis, E., et al. Oncolytic measles virus expressing the sodium iodide symporter to treat drug-resistant ovarian cancer. Ricerca sul cancro. 75 (1), 22-30 (2015).
  30. Kurokawa, C., et al. Constitutive Interferon Pathway Activation in Tumors as an Efficacy Determinant Following Oncolytic Virotherapy. Journal of the National Cancer Institute. , (2018).
  31. Msaouel, P., et al. Clinical Trials with Oncolytic Measles Virus: Current Status and Future Prospects. Current Cancer Drug Targets. 18 (2), 177-187 (2018).
  32. Grote, D., Cattaneo, R., Fielding, A. K. Neutrophils contribute to the measles virus-induced antitumor effect: enhancement by granulocyte macrophage colony-stimulating factor expression. Ricerca sul cancro. 63 (19), 6463-6468 (2003).
  33. Grossardt, C., et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-armed oncolytic measles virus is an effective therapeutic cancer vaccine. Human Gene Therapy. 24 (7), 644-654 (2013).
  34. Iankov, I. D., et al. Expression of immunomodulatory neutrophil-activating protein of Helicobacter pylori enhances the antitumor activity of oncolytic measles virus. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 20 (6), 1139-1147 (2012).
  35. Engeland, C. E., et al. CTLA-4 and PD-L1 Checkpoint Blockade Enhances Oncolytic Measles Virus Therapy. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 22 (11), 1949-1959 (2014).
  36. Veinalde, R., et al. Oncolytic measles virus encoding interleukin-12 mediates potent antitumor effects through T cell activation. Oncoimmunology. 6 (4), 1285992 (2017).
  37. Hutzler, S., et al. Antigen-specific oncolytic MV-based tumor vaccines through presentation of selected tumor-associated antigens on infected cells or virus-like particles. Scientific Reports. 7 (1), 16892 (2017).
  38. Speck, T., et al. Targeted BiTE expression by an oncolytic vector augments therapeutic efficacy against solid tumors. Clinical Cancer Research. , (2018).
  39. Andtbacka, R. H., et al. Talimogene Laherparepvec Improves Durable Response Rate in Patients With Advanced Melanoma. Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 33 (25), 2780-2788 (2015).
  40. Ribas, A., et al. Oncolytic Virotherapy Promotes Intratumoral T Cell Infiltration and Improves Anti-PD-1 Immunotherapy. Cell. 170 (6), 1109-1119 (2017).
  41. Patel, S. J., et al. Identification of essential genes for cancer immunotherapy. Nature. 548 (7669), 537-542 (2017).
  42. Kimple, M. E., Brill, A. L., Pasker, R. L. Overview of affinity tags for protein purification. Current Protocols in Protein Science. 73, (2013).
  43. Cattaneo, R., Rebmann, G., Baczko, K., ter Meulen, V., Billeter, M. A. Altered ratios of measles virus transcripts in diseased human brains. Virology. 160 (2), 523-526 (1987).
  44. Gutsche, I., et al. Structural virology. Near-atomic cryo-EM structure of the helical measles virus nucleocapsid. Science. 348 (6235), 704-707 (2015).
  45. Kolakofsky, D., et al. Paramyxovirus RNA synthesis and the requirement for hexamer genome length: the rule of six revisited. Journal of Virology. 72 (2), 891-899 (1998).
  46. Kolakofsky, D., Roux, L., Garcin, D., Ruigrok, R. W. Paramyxovirus mRNA editing, the “rule of six” and error catastrophe: a hypothesis. The Journal of General Virology. 86, 1869-1877 (2005).
  47. Parks, C. L., et al. Analysis of the noncoding regions of measles virus strains in the Edmonston vaccine lineage. Journal of Virology. 75 (2), 921-933 (2001).
  48. JoVE Science Education Database. Molecular Cloning. JoVE Science Education Database. , (2018).
  49. JoVE Science Education Database. Bacterial Transformation: The Heat Shock Method. JoVE Science Education Database. , (2018).
  50. Bergkessel, M., Guthrie, C. Colony PCR. Methods in Enzymology. 529, 299-309 (2013).
  51. Rota, J. S., Wang, Z. D., Rota, P. A., Bellini, W. J. Comparison of sequences of the H, F, and N coding genes of measles virus vaccine strains. Virus Research. 31 (3), 317-330 (1994).
  52. Bankamp, B., Takeda, M., Zhang, Y., Xu, W., Rota, P. A. Genetic characterization of measles vaccine strains. The Journal of Infectious Diseases. 204, 533-548 (2011).
  53. Dulbecco, R., Vogt, M. Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses. The Journal of Experimental Medicine. 99 (2), 167-182 (1954).
  54. Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).
  55. Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72, 248-254 (1976).
  56. JoVE Science Education Database. Separating Protein with SDS-PAGE. JoVE Science Education Database. , (2018).
  57. JoVE Science Education Database. The Western Blot. JoVE Science Education Database. , (2018).
  58. Menck, K., et al. Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated cell culture bags. Journal of Visualized Experiments. (91), e51554 (2014).
  59. Quah, B. J., Parish, C. R. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. Journal of Visualized Experiments. (44), (2010).
  60. Gerdes, J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies. Seminars in Cancer Biology. 1 (3), 199-206 (1990).
  61. JoVE Science Education Database. The Transwell Migration Assay. JoVE Science Education Database. , (2018).
  62. Lim, J. F., Berger, H., Su, I. H. Isolation and Activation of Murine Lymphocytes. Journal of Visualized Experiments. (116), e54596 (2016).
  63. Ungerechts, G., et al. Moving oncolytic viruses into the clinic: clinical-grade production, purification, and characterization of diverse oncolytic viruses. Molecular Therapy Methods & Clinical Development. 3, 16018 (2016).
  64. Fridman, W. H., Zitvogel, L., Sautes-Fridman, C., Kroemer, G. The immune contexture in cancer prognosis and treatment. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (12), 717-734 (2017).
  65. Yu, F., et al. T-cell engager-armed oncolytic vaccinia virus significantly enhances antitumor therapy. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 22 (1), 102-111 (2014).
  66. Fajardo, C. A., et al. Oncolytic Adenoviral Delivery of an EGFR-Targeting T-cell Engager Improves Antitumor Efficacy. Ricerca sul cancro. 77 (8), 2052-2063 (2017).
  67. Freedman, J. D., et al. Oncolytic adenovirus expressing bispecific antibody targets T-cell cytotoxicity in cancer biopsies. EMBO Molecular Medicine. 9 (8), 1067-1087 (2017).
  68. Wing, A., et al. Improving CART-Cell Therapy of Solid Tumors with Oncolytic Virus-Driven Production of a Bispecific T-cell Engager. Cancer Immunology Research. 6 (5), 605-616 (2018).
  69. Myers, R. M., et al. Preclinical pharmacology and toxicology of intravenous MV-NIS, an oncolytic measles virus administered with or without cyclophosphamide. Clinical Pharmacology and Therapeutics. 82 (6), 700-710 (2007).
  70. Rittner, K., Schreiber, V., Erbs, P., Lusky, M. Targeting of adenovirus vectors carrying a tumor cell-specific peptide: in vitro and in vivo studies. Cancer Gene Therapy. 14 (5), 509-518 (2007).
  71. Nakamura, T., et al. Rescue and propagation of fully retargeted oncolytic measles viruses. Nature Biotechnology. 23 (2), 209-214 (2005).
  72. Campadelli-Fiume, G., et al. Retargeting Strategies for Oncolytic Herpes Simplex Viruses. Viruses. 8 (3), 63 (2016).
  73. Leber, M. F., et al. MicroRNA-sensitive oncolytic measles viruses for cancer-specific vector tropism. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19 (6), 1097-1106 (2011).
  74. Baertsch, M. A., et al. MicroRNA-mediated multi-tissue detargeting of oncolytic measles virus. Cancer Gene Therapy. 21 (9), 373-380 (2014).
  75. Ruiz, A. J., Russell, S. J. MicroRNAs and oncolytic viruses. Current Opinion in Virology. 13, 40-48 (2015).
  76. Miest, T. S., Cattaneo, R. New viruses for cancer therapy: meeting clinical needs. Nature Reviews Microbiology. 12 (1), 23-34 (2014).
  77. Phuong, L. K., et al. Use of a vaccine strain of measles virus genetically engineered to produce carcinoembryonic antigen as a novel therapeutic agent against glioblastoma multiforme. Ricerca sul cancro. 63 (10), 2462-2469 (2003).
  78. Dingli, D., et al. Image-guided radiovirotherapy for multiple myeloma using a recombinant measles virus expressing the thyroidal sodium iodide symporter. Blood. 103 (5), 1641-1646 (2004).
  79. Abate-Daga, D., et al. Oncolytic adenoviruses armed with thymidine kinase can be traced by PET imaging and show potent antitumoural effects by ganciclovir dosing. PLoS One. 6 (10), 26142 (2011).
  80. Ungerechts, G., et al. Lymphoma chemovirotherapy: CD20-targeted and convertase-armed measles virus can synergize with fludarabine. Ricerca sul cancro. 67 (22), 10939-10947 (2007).
  81. Ketzer, P., et al. Artificial riboswitches for gene expression and replication control of DNA and RNA viruses. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (5), 554-562 (2014).
  82. Freedman, J., et al. Targeting T-cells to human cancer associated fibroblasts using an oncolytic virus expressing a FAP-specific T-cell engager. Keystone Symposia & Digitell, Inc. , (2018).
  83. Nishio, N., et al. Armed oncolytic virus enhances immune functions of chimeric antigen receptor-modified T cells in solid tumors. Ricerca sul cancro. 74 (18), 5195-5205 (2014).
  84. Bressy, C., Benihoud, K. Association of oncolytic adenoviruses with chemotherapies: an overview and future directions. Biochemical Pharmacology. 90 (2), 97-106 (2014).
  85. Wennier, S. T., Liu, J., McFadden, G. Bugs and drugs: oncolytic virotherapy in combination with chemotherapy. Current Pharmaceutical Biotechnology. 13 (9), 1817-1833 (2012).
  86. Fillat, C., Maliandi, M. V., Mato-Berciano, A., Alemany, R. Combining oncolytic virotherapy and cytotoxic therapies to fight cancer. Current Pharmaceutical Design. 20 (42), 6513-6521 (2014).
  87. Li, H., Peng, K. W., Russell, S. J. Oncolytic measles virus encoding thyroidal sodium iodide symporter for squamous cell cancer of the head and neck radiovirotherapy. Human Gene Therapy. 23 (3), 295-301 (2012).
  88. Opyrchal, M., et al. Effective radiovirotherapy for malignant gliomas by using oncolytic measles virus strains encoding the sodium iodide symporter (MV-NIS). Human Gene Therapy. 23 (4), 419-427 (2012).
  89. Mansfield, D., et al. Oncolytic Vaccinia virus and radiotherapy in head and neck cancer. Oral Oncology. 49 (2), 108-118 (2013).
  90. Miest, T. S., et al. Envelope-chimeric entry-targeted measles virus escapes neutralization and achieves oncolysis. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19 (10), 1813-1820 (2011).
  91. Santiago, D. N., et al. Fighting Cancer with Mathematics and Viruses. Viruses. 9 (9), (2017).

Tags

ParamyxovirusesTumor-targeted ImmunomodulationOncolytic VectorsReverse Genetic SystemMeasles VirusBispecific T Cell EngagerVirus PropagationSyncytia FormationVirus RescueTransfectionMV Producer CellsReporter Gene ExpressionVirus Harvest

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citazione di questo articolo
Heidbuechel, J. P., Engeland, C. E. Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo. J. Vis. Exp. (143), e58651, doi:10.3791/58651 (2019).
Scarica citazione
Ristampe e autorizzazioni

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image