Robot sistemleri kullanarak işlemek ve histolojik analizler için kolon fare örnekleri katıştır
Summary
Belirli fare doku işleme için fare histopatolojik analiz insan numuneler ile karşılaştırıldığında kalitesini azaltır. Burada, robot sistemleri işleme ve insan örnekleri katıştırma için rutin olarak kullanılan fizibilite göstermek için fare iltihaplı ve uninflamed kolon dokularında histopatolojik incelenmesi gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut.
Abstract
İnsan hastalıkları anlayış hayvan modelleri çalışma sayesinde büyük ölçüde genişletti. Yine de, deneysel modeller histopatolojik değerlendirilmesi olarak insan örnekler için uygulanan sıkı olması gerekiyor. Nitekim, güvenilir ve doğru kararınızı eleştirel doku bölümü hazırlık kalitesi ile etkilenir. Burada, biz yordam, parafin gömmenin fare örnekleri ilk hazırlanması sırasında birkaç otomatik adımları uygular histopatolojik analiz fare dokuların bir protokol tanımlamak. Metodolojik değişkenler üzerinden titiz Protokolü standardizasyon otomatik yordamlar gelen azalma artan genel güvenilirliğini fare patolojik analiz için katkıda bulunur. Özellikle, bu iletişim kuralını otomatik işleme kullanımını açıklar ve robot sistemleri, gömme rutin olarak doku işleme ve parafin insan örnekleri katıştırma için fare bağırsak iltihabı örnekleri işlemek için kullanılan. Biz standart ve otomatik teknikleri getirilmesi fare dokuların histopatolojik muayene güvenilirliğini önemli ölçüde arttığını sonucuna.
Introduction
Son yıllarda, insan hastalıkları1,2için önde gelen patojenik mekanizmaları incelemek için çeşitli modeller geliştirilmiştir. Bir hastalığın şiddetini değerlendirmek için araştırmacılar bir tedavinin etkisini değerlendirmek ve çalışma saytolojik ve histolojik mimari farklılıklar veya iltihap3miktarı. Bu modeller üzerinde gerçekleştirmek için detaylı histopatolojik analizler, fare ve insan örnekleri4,5kez karşılaştırma ihtiyaç vardır.
Ayrıca, insan örnekleri yaygın olarak işlenir ve histopatoloji çekirdek özellikleri tarafından attı ve histopatolojik kriterleri ve yöntemleri ile deneyimli insan patologlar standart. Bunun tersi olarak, fare dokular genellikle sabit, gömülü ve histopatolojik iletişim kurallarının sınırlı deneyimi olan araştırmacılar tarafından incelendi. Histopatolojik inceleme güvenilirliğini ve kalitesini yüksek kaliteli doku bölümleri hazırlanması ile başlar. Çeşitli faktörler eleştirel artmak ya da azalmak fiksasyon, makroskopik dahil olmak üzere son tahlilde kalitesini kesit, işleme, alkol gömme ve örnekleri6,7/ katıştırma için katkıda bulunur.
Manipülasyon örneği içeren bu pasajlar el ile hataları el ile gömme örnekleri de dahil olmak üzere ve daha az bir ölçüde, kesit ve boyama el ile microtome tabi tutulmaktadır. Şu anda, tüm fare doku hazırlık histolojik değerlendirme için Laboratuvar Laboratuvar farklı protokolleri ve el ile iletişim kuralları üzerinde dayanır. Bu çalışmanın amacı hatalar ve fare histopatolojik Muayene değişkenliği azaltmak için standart otomatik iletişim kuralları uygulamaktır.
Bilgimizi, burada ilk iletişim kuralları işleme ve fare dokuların histolojik değerlendirme için gömme tam otomatik dokusu için tanımlamak; Bunlar düzenli olarak insan numune analizleri için patoloji birimlerinde kullanılır. Yöntem fizibilite pratik bir örnek olarak, bağırsak iltihabı fare modeli, yani analiz edilmiştir, kronik kolit modeli tarafından neden yinelenen yönetim dextran sodyum sülfat (DSS) içme suyu8 ,9. DSS-tedavi hayvanlar Örneğin, kilo kaybı, gevşek dışkı veya ishal ve kolon gibi fibrozis kısalma bağırsak iltihabı belirtileri sergileyen bu yana bu deneysel ayarı yakından benzer insan iltihabi bağırsak hastalıkları (IBD)10 8,9,11. İnsan IBD hastalar için gözlemlediği gibi DSS tedavi karmaşık hastalık sahası oluşturur. Bu bağlamda, ayrıntılı histolojik değerlendirme doku mimari derin İLETİMLERİNİZE anlamak için gereklidir. Bu nedenle, örnek hazırlık kalitesini artırmak için açıklanan protokoller uygulanması histolojik yorumlanması güvenerek araştırmacılar yararlanabilir ve immunohistokimyasal için fare deneysel ayarları inceliyor. İnsan hastalıkları doku mimari değişiklikler içeren fare deneysel modelleri, hücresel doku sızmak ya da farklı doku ve organların (bağırsak, beyin, karaciğer, cilt) iltihabı varlığı artan kalitesini kullanabilirsiniz histopatolojik inceleme için örnek hazırlanması.
Protocol
Representative Results
Discussion
Histopatolojik analiz için fare doku hazırlanması sırasında farklı otomatik adımları kullanmak. Bu iletişim kuralı tekrarlanabilirlik ve böylece son histopatolojik değerlendirme genel kalitesini arttırmak tüm süreç standardizasyonu artırmak için teknik ipuçları sunmayı amaçlamaktadır. Biz otomatik aletler ve hazırlık ve rutin olarak insan örneklerin incelenmesi için patoloji çekirdek tesislerinde kullanılan dokuların katıştırma yöntemleri hayata.
Bu yöntemin …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz IRCCS Policlinico hastane, Milan için teknik destek ve yardım için IEO hayvan tesisi patoloji bölümü Hayvancılık içinde teşekkür ederim.
Materials
| Absolute Ethanol anhydrous | Carlo Erba | 414605 | reagent |
| Absolute ETOH | Honeywell | 02860-1L | reagent |
| Aluminium Potassium Sulfate | SIGMA | A6435 | reagent |
| Aniline Blue | SIGMA | 415049 | reagent |
| carbol Fuchsin | SIGMA | C4165 | reagent |
| CD11b (clone M1/70) | TONBO biosciences | 35-0112-U100 | antibody |
| CD20 IHC (clone SA275A11) | Biolegend | 150403 | antibody |
| CD3 (17A2) | TONBO biosciences | 35-0032-U100 | antibody |
| CD4 (GK1.5) | BD Biosciences | 552051 | antibody |
| CD45.2 (clone 104) | BioLegend | 109837 | antibody |
| CD8 (53-6.7) | BD Biosciences | 553031 | antibody |
| Citrate Buffer pH 6 10X | SIGMA | C9999 | reagent |
| Dab | Vector Laboratories | SK-4100 | reagent |
| DPBS 1X | Microgem | L0615-500 | reagent |
| DSS | TdB Consultancy | DB001 | reagent |
| EDTA | SIGMA | E9884 | reagent |
| EnVision Flex Peroxidase-Blocking Reagent | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
| EnVision Flex Substrate | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
| EnVision Flex/HRP | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
| EnVision Flex+ Rat Linker | DAKO | compreso in GV80011-2 | |
| Eosin | VWR | 1.09844 | reagent |
| F4/80 (clone BM8) | BioLegend | 123108 | antibody |
| Formalin | PanReac | 2,529,311,215 | reagent |
| glacial acetic acid | SIGMA | 71251 | reagent |
| Goat-anti-Rat-HRP | Agilent DAKO | P0448 | antibody |
| Haematoxylin | DIAPATH | C0303 | reagent |
| LEICA Rotary microtome (RM2255) | Leica | RM2255 | equipment |
| Ly6g (clone 1A8) | BD Biosciences | 551459 | antibody |
| Mercury II Oxide | SIGMA | 203793 | reagent |
| Omnis Clearify Clearing Agent | DAKO | CACLEGAL | reagent |
| Omnis EnVision Flex TRS | DAKO | GV80011-2 | reagent |
| Orange G | SIGMA | O3756 | reagent |
| Paraffin | Sakura | 7052 | reagent |
| Peloris | LEICA | equipment | |
| Percoll | SIGMA | P4937 | reagent |
| RPMI 1640 without L-Glutamine | Microgem | L0501-500 | reagent |
| STS020 | Leica | equipment | |
| Tissue-Teck Paraform Sectionable Cassette | SAKURA | 7022 | equipment |
| Tissue-Tek Automated paraffin embedder | Sakura | equipment | |
| Xylene | J.T.Baker | 8080.1000 | reagent |
Riferimenti
- Gibson-Corley, K. N., et al. Successful Integration of the Histology Core Laboratory in Translational Research. Journal of histotechnology. 35, 17-21 (2012).
- Olivier, A. K., et al. Genetically modified species in research: Opportunities and challenges for the histology core laboratory. Journal of histotechnology. 35, 63-67 (2012).
- Gibson-Corley, K. N., Olivier, A. K., Meyerholz, D. K. Principles for valid histopathologic scoring in research. Veterinary pathology. 50, 1007-1015 (2013).
- Stolfi, C., et al. Involvement of interleukin-21 in the regulation of colitis-associated colon cancer. The Journal of experimental medicine. 208, 2279-2290 (2011).
- Begley, C. G., Ellis, L. M. Drug development: Raise standards for preclinical cancer research. Nature. 483, 531-533 (2012).
- Peters, S. R. . A Practical Guide to Frozen Section Technique. , (2010).
- Rosai, J. . Rosai and Ackerman’s Surgical Pathology. , (2011).
- Blumberg, R. S., Saubermann, L. J., Strober, W. Animal models of mucosal inflammation and their relation to human inflammatory bowel disease. Current opinion in immunology. 11, 648-656 (1999).
- Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nature. 2, 541-546 (2007).
- Kaser, A., Zeissig, S., Blumberg, R. S. Inflammatory bowel disease. Annual review of immunology. 28, 573-621 (2010).
- Cribiù, F. M., Burrello, C., et al. Implementation of an automated inclusion system for the histological analysis of murine tissue samples: A feasibility study in DSS-induced chronic colitis. European Journal of Inflammation. 16, 1-12 (2018).
