Avaliação da interação entre o complemento protéico-de-n-n e ácido hialurônico na promoção da adesão celular
Summary
O componente complementar de-de-de-a é uma molécula pró-inflamatória altamente expressa no microambiente tecidual que pode interagir com a matriz extracelular. Aqui, nós descrevemos um método para testar como o-de-de-ácido hialurônico afeta a adesão celular.
Abstract
Tem sido demonstrado cada vez mais que o microambiente tumoral desempenha um papel ativo no crescimento e metástase da neoplasia. Através de diferentes vias, as células tumorais podem eficientemente recrutar células estromal, imunológicas e endoteliais secretando fatores estimulatórios, quimiocinas e citocinas. Por sua vez, essas células podem alterar as propriedades de sinalização do microambiente, liberando sinais de promoção de crescimento, metabólitos e componentes da matriz extracelular para sustentar alta proliferação e competência metastática. Neste contexto, identifica-se que o componente complementar-de-n, altamente expresso localmente por uma gama de tumores malignos humanos, ao interagir com o ácido hialurônico da matriz extracelular, afeta fortemente o comportamento das células primárias isoladas do tumor humano Espécimes. Aqui, nós descrevemos um método para testar como o-de-de-aço para o ácido hialurônico (HA) impacta a adesão de células tumorais, subjacente ao fato de que as propriedades biológicas dos principais componentes da matriz extracelular (neste caso HA) podem ser moldadas por sinais bioativos em direção ao tumor Progressão.
Introduction
O microambiente do tumor (TME) influencia o desenvolvimento e a progressão do cancro desde que pode fornecer um Niche permissiva para a sobrevivência, o crescimento e a invasão da pilha. A identificação de novos atores-chave na TME pode ser útil para a descoberta de novas ferramentas moleculares para a terapia alvo. A TME inclui uma rede complexa e dinâmica de células não malignas, como células endoteliais, fibroblastos e células do sistema imunológico, encaixadas nos componentes da matriz extracelular circundante (ECM), incluindo colágenos, lamininas, fibronectinas, proteoglicanos e hyaluronans. Ambas as células tumorais e não-tumorais sintetizam e secretam componentes de ECM em conjunto com citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento e enzimas de remodelação inflamatória e matricial que alteram globalmente as propriedades físicas, químicas e de sinalização da TME. Entre esses constituintes, o ácido hialurônico (HA) surgiu para exercer um papel crucial na biologia tumoral. Apesar de sua simples composição química, a HA, juntamente com suas moléculas de ligação à HA (hialaderinas), pode modular a angiogênese, a responsividade do sistema imunológico e a remodelação do ECM de forma dependente de tamanho e concentração1.
O sistema complementar (C) também faz parte do TME local, que recentemente recebeu uma atenção crescente. O sistema C engloba um conjunto de proteínas solúveis e ligadas à membrana envolvidas na primeira linha de defesa contra não-células-auto, elementos hospedeiros indesejados e patógenos. Funcionalmente, o C vincula os braços de dois efetores de sistemas inatos e adaptativos para promover a matança direta de células ou a montagem de uma resposta inflamatória2. A ativação de C pode suprimir o crescimento do tumor, destruindo as células cancerosas ou inibindo seu crescimento, mas tornou-se cada vez mais claro que ele pode possuir uma atividade que promove o tumor, sustentando a inflamação crônica, promovendo o estabelecimento de um meio imunossupressor, induzindo a angiogênese e ativando as vias de sinalização relacionadas ao câncer3. Neste contexto, foi a primeira molécula de reconhecimento da via clássica do sistema C que tem emergido para exercer funções importantes no microambiente tumoral, independentemente da ativação do C4. Foi demonstrado que a r. 5 foi expressa localmente por uma série de tumores malignos humanos, onde pode favorecer a adesão, a migração e a proliferação de células cancerosas, além da angiogênese e metástasecinco. Curiosamente, a-n interage com um dos principais constituintes do ECM, como HA.
Nós desenvolvemos uma técnica para isolar as pilhas de cancro preliminares da massa de tumor. Além disso, nós criamos a matriz, que pode estimular o microambiente do tumor, particular a interação entre o de-o e o ácido hialurónico do peso molecular elevado. A capacidade para a HA foi capaz de induzir a adesão das células tumorais.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nós descrevemos um método fácil para investigar como o componente do complemento, que interage com o ácido hialurônico, é capaz de modular o comportamento de células primárias isoladas de tecidos tumorais humanos. Tanto o HA quanto o n. º n estão presentes no microambiente tecidual em condições fisiológicas e patológicas, participando de diversos processos biológicos celulares. Por exemplo, foi demonstrado que o n. º-8 está presente no microambiente da placenta, onde favorece a invasão de trofoblastos t…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a Ivan Donati pelo fornecimento de HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (departamento de Ginecologia da IRCCS “burlo Garofolo”, Trieste, Itália) e Andrea Romano (unidade clínica operatória de anatomia e histologia patológica, hospital Cattinara, Trieste, Itália ) para a coleta de amostras de tecido. Agradecemos também Nicolò Morosini pela ajuda na preparação de vídeo e Alex Coppola, a voz. Este trabalho foi apoiado por subsídios do Instituto de saúde materna e infantil, IRCCS “burlo Garofolo”, Trieste, Itália (RC20/16) e Fondazione Cassa di risparmio Trieste para R. Bulla.
Materials
| 100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
| Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
| Flask for cell culture | Corning | 430639 | Sterile, vented |
| Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone |
| High molecular weight hyaluronic acid | Kind gift by Prof. Ivan Donati | ||
| Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplemented with EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), and 1% penicillin–streptomycin (Sigma-Aldrich) |
| Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
Riferimenti
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