一种快速的疾病抑制初步评估的板块竞争分析法
Summary
介绍了一种平板竞争试验的协议, 以确定特定堆肥是否可能含有抑制纹枯病菌生长的细菌和真菌。
Abstract
其目的是开发和优化一个简单, 负担得起和有效的生物测定, 以检测特定堆肥对土传真菌纹枯病菌的疾病抑制能力。R. 病菌是全球范围内各种植物宿主的病原体。真菌在土壤中存活为腐生植物, 在简单的水琼脂培养基上迅速生长。钢板法是一种快速的方法来比较堆肥的能力, 以减缓病菌的生长。该检测还与其他土传真菌病原体的抑制有很好的相关性, 如链孢早期摧残、枯萎病菌、霉菌根腐病和腐霉根腐病等土壤中腐生生物。
Introduction
纹枯代表了真菌的一个广泛的复杂, 其中Thanatephorus 螨(弗兰克) 反主动 (无性型 =纹枯病菌库恩) 是导致根腐病和阻尼1。纹枯病菌是一种积极的病原体和腐生植物, 可以作为菌核在恶劣环境条件下存活1。因此, 它有一个全球性的分布, 并可能导致广泛的工厂主机的疾病, 包括茄科, 豆科, 菊科, 和十字花科造成严重的经济损失。
堆肥有能力为某些植物病原体提供2的生物防治剂。然而, 并非所有的堆肥都一样, 也不影响所有病原体同样3。木质碳的木质素比干草或稻草碳基堆肥的纤维素比例高。R. 病菌更喜欢在稻草中找到的容易获得的碳。相比之下, 生物控制真菌, 如木霉菌, 更有效时, 碳是不太容易得到。有益真菌和细菌进入堆肥可以通过竞争、对抗或调节植物生长3来抑制植物疾病。所建议的检测方法主要检测抗生素、ecoenzymes 或螯合剂的产生对病原体有害的拮抗作用。
植物生物鉴定是确定堆肥有利于或阻止植物生长4的黄金标准。然而, 植物生物鉴定是耗时的 (几周到几个月) 完成这可能是长于预期的, 需要更多的劳动力, 以提取植物根系, 以量化的严重程度的根系统。相对稳健, 但更快 (天) 的检测将是质量控制计划的理想选择。本文的目的是对堆肥的抑制电位进行比较快速、准确的试验。该方法阿尔法诺等。5除两种例外外, 堆肥提取物被稀释, 水琼脂用于代替马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)。R. 病菌在简单的水琼脂培养基上生长迅速, 而 PDA 促进细菌和其他真菌的生长, 污染了文化6。
此板块测定是一种抑制指标, 适用于土壤中存活的一系列植物病原体, 如腐生生物病菌7、链孢摧残、枯萎病、疫霉根腐、腐霉根腐病。板块竞争检测是有用的筛选一系列堆肥产品的包含微生物群落作为土壤病原体的生物控制剂。该检测是商业堆肥产品中最一致的疾病抑制指标之一6,8。产品在配方、成熟度和生产过程中的差异被选择。
Protocol
Representative Results
Discussion
我们从以前的研究中知道, 某些堆肥是有效的抑制病菌和抑制作用是由于微生物生活在堆肥, 而不是非生物性质的堆肥6,8。使用高压灭菌作为一种手段, “杀死” 微生物群已被批评, 因为它影响碳化学的媒体10。我们通过 Whatman 1 号纸将高压灭菌与真空过滤进行了比较。既不过滤也不蒸压的治疗显示病菌生长的最大抑制<sup class=…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
佛蒙特州农业实验站竞争孵化计划 VT-HO1609 资助了这项研究。林恩在佛蒙特大学6的硕士论文中使用了这个方法。
Materials
| autoclavable narrow-neck glass conical flask | Fisher Scientific | 10-040D | 125-mL |
| dehydrated granulated agar | Fisher Scientific | DF0145-17-0 | 500 g quantity |
| heat resistant gloves | Fisher Scientific | MEMGG1314WL | several brands available |
| Parafilm (strips of 2-3 cm wide) | Fisher Scientific | PM992 13-374-16 | 5 or 10 cm widths work |
| disposable polystyrene petri dishes | Fisher Scientific | R80116 | comes in sleeves of 20/ea or cases of 500 |
| dehydrated potato dextrose agar | Fisher Scientific | DF0013-15-8 | comes in quantities of 100, 500 and 2000 grams |
| benchtop reciprocal shaker | Thomas Scientific | 1227Y31 | other models will work |
| water bath | ThermoScientific | S37363 | 5L general purpose |
| clear ruler, flat, at least 10 cm | Any | use metric rule | |
| ATCC culture | American Type Culture Collection | ATCC 10154 | teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) or MYA 4031; |
| lab tape | Fisher Scientific | 15935 | autoclavable and removable, 1" wide preferred |
| water resistant marker | office or scientific supply | Sharpie fine tip | write sample number on tape |
Riferimenti
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