Summary

病原性と線虫モデルにおけるアエロモナス感染症の病態の評価

Published: December 20, 2018
doi:

Summary

線虫におけるアエロモナス感染症を研究する 3 つの実験を紹介します。これらの便利なメソッドを使用して、間とAeromonas種内の毒性を評価するために簡単です。

Abstract

ヒトの病原体アエロモナスは胃腸炎、創傷感染、敗血症、尿路感染症を引き起こす臨床的に示されています。最も人間の病気は、細菌の種に関連する報告されている:アエロモナス ポリエステルアエロモナスよりアエロモナス サルモニシダアエロモナス dhakensis。モデル生物線虫は、アエロモナスの病原細菌を研究する優れた感染モデルを提供する bacterivore です。生存、液体毒性、筋壊死アッセイなど線虫モデルを用いたアエロモナス感染症を研究する 3 つの実験を紹介します。アエロモナスの病原性を決定する 3 つの方法の結果は安定していた。A. dhakensisは、臨床感染症の原因 4 主要アエロモナス種の中で最も毒性の高いことが示されました。これらのメソッドは、アエロモナス種内の中で毒性を評価し、アエロモナス感染症の病態の理解に貢献する便利な方法に表示されます。

Introduction

ヒトの病原体、アエロモナスは、胃腸炎や創傷感染、敗血症、尿路感染症1,2を引き起こす臨床的に示されています。最も関連する疾患は、4 つの細菌種に関連する報告されている:アエロモナス ポリエステルアエロモナスよりアエロモナス サルモニシダアエロモナス dhakensis 2,3,4,5.アエロモナス感染症の中で軟部組織感染症を引き起こす可能性が罹患率と死亡率の人間で。注、筋壊死軟部組織感染症6の最も深刻な形です。生存の観察、感染後線虫の筋肉壊死アエロモナスの毒性を推測する便利な方法です。

科学者は、細菌感染症を研究する多くのモデル生物を既に開発しました。従来、マウス、zebrafishes、および線虫アエロモナス6,7,8の病原性と病因を研究する動物モデルとして使用されました。すべての動物のモデルには、その ‘ 利点と用途。モデル生物、線虫、bacterivorous 線虫は、摂取量の細菌が foodnaturally として。線虫はその進化の過程で細菌感染に対する複雑な生得の免疫組織を開発しました。細菌感染症のストレスの下でc. の elegansは、アエロモナス6,7,9および他の病原体の病原細菌を研究する優れた感染モデルであること実証されていますのような菌10と出血性大腸菌o157: h711。ただし、アエロモナスの病原性を研究するためのモデルとして線虫を使用して方法論に焦点を当てた出版物はまだありません。

動物モデルとして線虫を用いたアエロモナス感染症を研究する 3 つの実験をご紹介: 生存、液体毒性と筋壊死のための試金。これらのメソッドは、アエロモナス種内の中で毒性を評価し、アエロモナスの病因の理解を改善する便利な方法です。

Protocol

1. 培地の準備 注: ソリューションの準備のための表 1 を参照してください。 M9 中12を準備するには、KH2PO41.5 g、Na2HPO4、5.66 g と 500 mL の脱イオン水で塩化ナトリウム 2.5 g を溶かします。121 ° C、20 分でのオートクレーブは室温に冷却されるまで待つし、最初に使用する前に 1 M MgSO4の 0.5 mL を追加します。</li…

Representative Results

上記で説明したプロトコルに従うことによって 4アエロモナス系統から毒性を区別するために簡単です。図 1にc. の elegansの生存分析を示します。フエレット、高から低の順に示すように感染している線虫の生存率: A. ポリエステル、A. より、A. サルモニシダ、 A. dhakensis。毒性の間で、アエロモナス?…

Discussion

線虫は bacterivorous 線虫、自然食品として摂取菌し、その進化のプロセスの中に細菌を複雑な免疫を開発しました。表皮および腸の9,13主要な臓器を維持し、免疫力をサポートします。表皮と線虫の筋肉のバンドでは哺乳類と人間6軟部組織の構造に似ています。これらの特性により、線虫アエロモナス感…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

線虫中核施設診断微生物学、台湾からの支援に感謝しており、抗菌抵抗研究所の国立チェン Kung 大学病院アエロモナスを提供するための分離します。また、線虫の遺伝学センター (CGC) や、WormBase を認めます。我々 はまた、原稿を編集 Savana ムーアを感謝します。

本研究はパ陳に科学省と台湾の技術 (最も 105-2628-B-006-017-MY3) 国立チェン Kung 大学病院 (NCKUH-10705001) からの助成金によって部分的に支えられました。

Materials

Shaker incubator YIH DER LM-570R Bacteria incubation
K2HPO4 J.T.Baker MP021519455 Culture medium preparation 
KH2PO4 J.T.Baker 3246-05 Culture medium preparation 
Na2HPO4 J.T.Baker MP021914405 Culture medium preparation 
NaCl SIGMA 31434 Culture medium preparation 
MgSO4 SIGMA M7506 Culture medium preparation 
agar Difco 214530 Culture medium preparation 
CaCl2 SIGMA C1016 Culture medium preparation 
cholesterol SIGMA C8503 Culture medium preparation 
ethanol SIGMA 32205 Culture medium preparation 
KOH SIGMA P5958 Culture medium preparation 
6 cm petri plate ALPHA PLUS 46 agar plate preparation
96-well plate FALCON 353072 liquid assay
bacterial peptone Affymetrix/USB AAJ20048P2 Culture medium preparation 
yeast extract SIGMA 92144 Culture medium preparation 
citric acid•H2O SIGMA C1909 Culture medium preparation 
tri-potassium citrate•H2O SIGMA 104956 Culture medium preparation 
FudR  SIGMA 1271008 Culture medium preparation 
disodium EDTA SIGMA E1644 Culture medium preparation 
FeSO4•7 H2O SIGMA 215422 Culture medium preparation 
MnCl2•4 H2O SIGMA 221279 Culture medium preparation 
ZnSO4•7 H2O SIGMA 204986 Culture medium preparation 
CuSO4•5 H2O SIGMA C8027 Culture medium preparation 
tryptone SIGMA 16922 Culture medium preparation 
Microscope system Nikon  Eclipase Ti inverted  microscope imaging
Scientific CCD Camera QImaging  Retiga-2000R Fast 1394  microscope imaging

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Cite This Article
Chen, Y., Ko, W., Chen, C., Chen, P. Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model. J. Vis. Exp. (142), e58768, doi:10.3791/58768 (2018).

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