Qui, presentiamo tre diversi esperimenti per studiare l'infezione di Aeromonas in c. elegans. Utilizzando questi metodi convenienti, è facile valutare la tossicità tra e all'interno della specie dell'Aeromonas .
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Articolo metodologico
Valutazione di virulenza e patogenesi dell'infezione da Aeromonas in un modello di Caenorhabditis elegans
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'agente patogeno umano Aeromonas ha dimostrato clinicamente di causare la gastroenterite, infezioni della ferita, setticemia e infezioni delle vie urinarie. Malattie più umane sono stati segnalati per essere associati con quattro specie di batteri: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila dell'Aeromonas veroniie Aeromonas caviae. L'organismo di modello Caenorhabditis elegans è un bacterivore che fornisce un modello di infezione eccellente da cui studiare la patogenesi batterica dell'Aeromonas. Qui, presentiamo tre diversi esperimenti per studiare Aeromonas infezione utilizzando un modello di c. elegans , compreso la sopravvivenza, liquido tossicità e le analisi di necrosi del muscolo. I risultati dei tre metodi determinare la virulenza dell'Aeromonas sono stati coerenti. A. dhakensis è stato indicato per essere la più tossica tra le 4 principali specie di Aeromonas causando infezioni cliniche. Questi metodi sono indicati per essere un modo conveniente per valutare la tossicità tra e all'interno della specie dell'Aeromonas e contribuiscono alla nostra comprensione della patogenesi dell'infezione dell'Aeromonas .
Introduzione
L'agente patogeno umano, Aeromonas, ha dimostrato clinicamente di causare la gastroenterite, infezioni della ferita, setticemia e infezioni delle vie urinarie1,2. Più associate malattie umane sono state segnalate per essere associati con quattro specie batteriche: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila dell'Aeromonas veroniie Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. tra Aeromonas malattie infettive, infezioni del morbido-tessuto possono ....
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Protocollo
1. preparazione del terreno di coltura
Nota: Vedere la tabella 1 per la preparazione di soluzione.
- Per preparare M9 medio12, sciogliere 1,5 g di KH2PO4, 5,66 g di Na2HPO4e 2,5 g di NaCl in 500 mL di acqua deionizzata. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 20 min. attendere fino a quando raffreddato a temperatura ambiente e poi aggiungere 0,5 mL di 1 M MgSO4 prima del primo utilizzo.
- Per preparare del nematode crescita medio (NGM)12, sciogliere 3 g NaCl, peptone batterica 2,5 g e 20 g di agar in 1 L di acqua deionizzat....
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Risultati
Seguendo i protocolli descritti sopra, è facile distinguere tra le tossicità da quattro ceppi di Aeromonas . L'analisi di sopravvivenza di c. elegans è illustrato nella Figura 1. I tassi di sopravvivenza di c. elegans infettati con specie dell'Aeromonas , mostrati in ordine dal più alto al più basso erano: a. caviae, a. veronii, a. hydrophila e a. dhakensis. Anche se c'è diversità in termini di tossicità t.......
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Discussione
C. elegans è un nematode bacterivorous che naturalmente i batteri le assunzioni come cibo e ha sviluppato un'immunità innata complicati ai batteri durante il suo processo evolutivo. Due dei principali organi mantenere e sostenere l'immunità sono l'epidermide e intestino9,13. Le bande del muscolo di c. elegans ed epidermide assomigliano le strutture molli in mammiferi ed esseri umani6. A causa di queste caratteristiche,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Siamo grati per l'assistenza provenienti dall'impianto di nucleo di c. elegans a Taiwan e per la microbiologia diagnostica e antimicrobica resistenza laboratorio di National Cheng Kung University Hospital per la fornitura di Aeromonas isolati. Riconosciamo anche il centro di genetica di Caenorhabditis (CGC) e il WormBase. Ringraziamo anche la Savana Moore per il manoscritto di editing.
Questo studio è stato parzialmente sostenuto da sovvenzioni dal Ministero della scienza e tecnologia di Taiwan (più 105-2628-B-006-017-MY3) e il National Cheng Kung University Hospital (NCKUH-10705001) a P.L. Chen.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Incubatrice con agitatore | YIH DER | LM-570R | Incubazione batterica |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Preparazione del terreno di coltura |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Preparazione del terreno di coltura |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Preparazione del terreno di coltura |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Preparazione del terreno di coltura |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Preparazione del terreno di coltura |
| agar | Difco | 214530 | Preparazione del terreno di coltura |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Preparazione del terreno di coltura |
| colesterolo | SIGMA | C8503 | Preparazione del terreno di coltura |
| etanolo | SIGMA | 32205 | Preparazione del terreno di coltura |
| KOH | SIGMA | P5958 | Preparazione del terreno di coltura |
| piastra di Petri da 6 cm | ALPHA PLUS | Preparazione della piastra per agar a | |
| 46 pozzetti Piastra a 96 pozzetti | FALCON | 353072 | saggio liquido |
| peptone batterico | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Preparazione del terreno di coltura |
| estratto di lievito | SIGMA | 92144 | Preparazione del terreno di coltura |
| acido citrico&toro; H2O | SIGMA | C1909 | Preparazione del terreno di coltura |
| citrato tri-potassico&toro; H2O | SIGMA | 104956 | Preparazione del terreno di coltura |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Preparazione del terreno di coltura |
| disodio EDTA | SIGMA | E1644 | Preparazione del terreno di coltura |
| FeSO4• 7 H2O | SIGMA | 215422 | Preparazione del terreno di coltura |
| MnCl2• 4 H2O | SIGMA | 221279 | Preparazione del terreno di coltura |
| ZnSO4• 7 H2O | SIGMA | 204986 | Preparazione del terreno di coltura |
| CuSO4• 5 H2O | SIGMA | C8027 | Preparazione del terreno di coltura |
| triptone | SIGMA | 16922 | Preparazione del terreno di coltura |
| Sistema di microscopio | Nikon | Eclipasi Ti invertita | imaging al microscopio |
| Telecamera CCD scientifica | QImaging | Retiga-2000R Veloce 1394 | imaging al microscopio |
Riferimenti
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.....
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Ristampe e permessi
