L’incitation et l’évaluation d’un modèle murin de la myopie expérimentale

Summary

Dans ce protocole, nous décrivons le processus complet de lunettes de vue myopie expérimentale chez la souris à l’aide de l’incitation nouvellement conçue et la technique nécessaire pour la réalisation des résultats stables et reproductibles dans la mesure des paramètres oculaire.

Abstract

Modèle murin de la myopie peut être un outil puissant pour la recherche de la myopie à cause de la manipulation génétique relativement facile. Une façon d’inciter la myopie chez les animaux est de mettre clairement moins les verres devant les yeux pendant des semaines (induite par la lentille myope, LIM). Cependant, les protocoles existants d’incitation et d’évaluation varient d’un laboratoire à. Ici, nous avons décrit une méthode très pratique et reproductible pour induire des lunettes LIM chez la souris à l’aide nouvellement conçu. Les correctifs de méthode permet à la lentille stablement en face de l’oeil de la souris tout en la lentille à être enlevé pour le nettoyage ou topique drug administration. Le phénotype est robuste et efficace, et la variance est faible. La méthode décrite ici peut être appliquée à des souris juste après le sevrage qui prolonge la durée possible des expériences. Nous avons également donné technique conseille d’obtenir des résultats reproductibles en réfraction et mesure la longueur axiale. Nous espérons que le protocole étape par étape décrit ici et l’article détaillé peut aider les chercheurs à réaliser des expériences de myopie avec une myopie plus fluide et rendre les données comparables dans l’ensemble de laboratoires.

Introduction

La prévalence de la myopie a considérablement augmenté récemment, alors que le mécanisme de son apparition et la progression sont encore largement inconnu¹. Le phénotype le plus caractéristique de la myopie est l’allongement de la longueur axiale (AL), ce qui augmente le risque de complications rétiniennes ou même cécité². Pour mieux comprendre la pathogénie de la myopie et de développer des traitements efficaces, des modèles animaux robustes et myopes et évaluation de phénotype stable sont nécessaires.

En bref, deux méthodes existent pour induire des États myopes chez les animaux : forme-privation myopie (FDM) et myopie induite par l’objectif (LIM)³. Les premiers diffuseurs devant le œil des endroits ou sutures la paupière pour obscurcir l’image, ce qui influe sur le développement normal de le œil, ce qui entraîne un phénotype myopie. Les derniers endroits moins lentilles devant le œil pour déplacer le point focal derrière la rétine. La rétine détecte le déplacement de l’accent et s’allonge le globe oculaire pour réaligner la rétine et le point focal. Pour FDM, après que la paupière est fermée ou le diffuseur a été fixé devant le œil, presque aucun entretien supplémentaire n’est nécessaire. Pour LIM, la lentille doit être enlevé pour le nettoyage afin du pour maintenir transparent. Ainsi, FDM est relativement facile d’être induit sur le plan technique. Cependant, les mécanismes de FDM et LIM sont différents, et quelle méthode imite la myopie chez l’homme est mieux encore en débat³. Un des points forts de LIM est le phénotype plus fort comparé à FDM, au moins dans le cas des souris⁴.

Les animaux qui ont été utilisées pour induire la myopie incluent poussins⁵singes⁶, musaraignes d’arbre⁷, cochons d’Inde⁸et souris⁴. Compte tenu de la possibilité de manipulation génétique, des anticorps disponibles abondantes et faible coût d’élevage, souris aurait pu être le premier choix comme le modèle animal de la myopie. Toutefois, par rapport aux autres grands animaux, fixation des lentilles ou diffuseurs devant le œil de la souris est relativement difficile, surtout pour les jeunes souris tels que droit après le sevrage. Pour les expériences nécessitant l’administration de médicaments topiques ou mesures provisoires yeux multiples, il faut aussi de l’image soient amovibles. Un autre défi est le petit changement morphologique du globe oculaire de souris, qui a besoin de techniques sophistiquées et dispositifs à évaluer. A ce jour, différents induisant et mesurer les protocoles utilisés dans les équipes de recherche différentes rendent difficile de comparer et de répéter les résultats à travers des laboratoires. Un protocole standard avec précision est nécessaire.

Des travaux précédents décrit plusieurs méthodes pour résoudre les lentilles ou les diffuseurs devant le œil de souris, tels que collage⁹, couture¹⁰ et lunette visiocasques cadre^11,12. Nous avons combiné l’exist visiocasques jumelles technics^11,12,13 avec notre cadre nouvellement conçu pour élaborer un protocole d’induire pour induire une myopie expérimentale robuste et efficace chez les souris. Le protocole peut être appliqué à des souris jeunes peu après le sevrage au 21e jour (p21). Nous avons également optimisé les processus d’évaluation stable et précise des phénotypes, y compris la réfraction et AL. Nous espérons que ce protocole normalisé peut aider à faire les souris myopes un modèle plus facilement accessible pour la recherche de la myopie.

Protocol

Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité d’éthique sur la recherche d’Animal de la Keio University School of Medicine ont adhéré à la déclaration de l’ARVO pour l’utilisation des animaux en ophtalmique et Vision Research, les lignes directrices sur l’expérimentation animale à Keio L’université et la recherche de l’Animal : Reporting de In Vivo des expériences (arrivée) lignes directrices pour l’utilisation des animaux en recherche. 1. assembler les l…

Representative Results

At a tout d’abord, vérifiez si toutes les pièces nécessaires sont préparés (Figure 1 a). Un exemple d’un morceau de lunettes assemblés est illustré dans la Figure 1 b. À l’exception de la partie principale des cadres et l’écrou, toutes les autres pièces sont jetables pour chaque souris. Un ensemble de lunettes dûment remplis est montré dans la Figure 1C. Changer l’angle entre le…

Discussion

Pour s’assurer que les lunettes à fixer solidement sur la tête de la souris, plusieurs étapes dans le présent protocole doivent être accordé une grande attention. Le périoste doit être retiré complètement avant d’utiliser le système adhésif dentaire. Le sang sur le crâne doivent également être nettoyé avec soin. Un peu fine tuning est acceptable tout de suite après l’application de l’adhésif, ne déplacez pas le bâton fréquemment avant le système adhésif sèche vers le haut. Suivez les instr…

Materials

screw	NBK	SNZS-M1.4-10
washer	MonotaRO	42166397
nut	MonotaRO	42214243
stick	DMM Make	none	designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
frame	DMM Make	none	designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
lenses	RAINBOW CONTACT LENS	none	customized for mice use by the company
cyanoacrylate glue	OK MODEL	MP 20g
dental adhesive resin cement	SUN MEDICAL	super bond	contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull
infrared photorefractor	Steinbeis Transfer Center	none	designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen
Spectral domain OCT	Leica	R4310
Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution	Santen	Mydrin-P
midazolam	Sandoz K.K.	SANDOZ	components for the anesthetic
medetomidine	Orion Corporation	Domitor	components for the anesthetic
butorphanol tartrate	Meiji Seika Pharma	Vetorphale	components for the anesthetic
0.1 % purified sodium hyaluronate	Santen	Hyalein
atipamezole hydrochloride	Zenoaq	antisedan