प्रलोभन और प्रायोगिक अदूरदर्शिता के एक Murine मॉडल का मूल्यांकन
Summary
इस प्रोटोकॉल में, हम नए डिजाइन चश्मा और नेत्र पैरामीटर माप में स्थिर और reproducible परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक कलाओं का उपयोग कर चूहों में प्रयोगात्मक अदूरदर्शिता प्रलोभन की पूरी प्रक्रिया का वर्णन ।
Abstract
निकट दृष्टि से Murine मॉडल क्योंकि अपेक्षाकृत आसान आनुवंशिक हेरफेर की दृष्टि अनुसंधान के लिए एक शक्तिशाली उपकरण हो सकता है । एक तरह से जानवरों में अदूरदर्शिता के लिए प्रेरित करने के लिए सप्ताह के लिए आंखों के सामने स्पष्ट ऋण लेंस रखा है (लेंस-अदूरदर्शिता, लिम) । हालांकि, प्रलोभन और मूल्यांकन के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल प्रयोगशाला से प्रयोगशाला तक बदलती हैं । यहाँ, हम नए डिजाइन चश्मा का उपयोग कर चूहों में लिम प्रेरित करने के लिए एक बेहद व्यावहारिक और reproducible विधि का वर्णन किया. विधि लेंस को हल करता है माउस आंख के सामने छुरा जबकि लेंस की सफाई या सामयिक दवा प्रशासन के लिए ले जाया जा करने के लिए अनुमति देता है । phenotype मजबूत और कुशल है, और विचरण छोटा है । यहाँ वर्णित विधि को प्रातः के ठीक बाद चूहों पर लागू किया जा सकता है जो प्रयोगों के लिए संभावित अवधि को विस्तारित करता है. हमने भी reproducible परिणाम प्राप्त करने के लिए तकनीकी सलाह दी है अपवर्तन और अक्षीय लंबाई माप । हमें उंमीद है कि कदम दर कदम प्रोटोकॉल यहां वर्णित है और विस्तृत लेख मदद कर सकता है शोधकर्ताओं ने अदूरदर्शिता के साथ अदूरदर्शिता प्रयोगों और अधिक सुचारू रूप से प्रदर्शन और प्रयोगशालाओं भर में तुलनीय डेटा बनाते हैं ।
Introduction
निकट दृष्टि की व्यापकता नाटकीय रूप से हाल ही में वृद्धि हुई है, जबकि इसकी शुरुआत और प्रगति के तंत्र अभी भी काफी हद तक पता नहीं है1। अदूरदर्शिता की सबसे विशेषता phenotype के अक्षीय लंबाई (अल) है, जो रेटिना जटिलताओं या यहां तक कि2अंधापन के लिए जोखिम बढ़ जाती है के बढ़ाव है । बेहतर दृष्टि से रोगजनन को समझने और प्रभावी उपचार विकसित करने के लिए, सुदृढ़ कमबीन पशु मॉडल और स्थिर phenotype मूल्यांकन आवश्यक हैं.
संक्षेप में, दो तरीकों जानवरों में कमबीन राज्यों उत्प्रेरण के लिए मौजूद हैं: फार्म-अभाव निकट दृष्टि (FDM) और लेंस प्रेरित अदूरदर्शिता (लिम)3। पूर्व स्थानों आंख के सामने विसारक या सीवन पलक छवि है, जो गोलक के सामांय विकास को प्रभावित करता है, एक अदूरदर्शिता phenotype में जिसके परिणामस्वरूप । बाद में जगह शूंय आंख के सामने लेंस को रेटिना के पीछे फोकल प्वाइंट ले जाने के लिए । रेटिना ध्यान की पारी का पता लगाता है और गोलक को रेटिना और फोकल प्वाइंट फिर से संगठित करने के लिए लंबी है । FDM के लिए, के बाद पलक बंद कर दिया है या विसारक आंख के सामने तय किया गया है, लगभग कोई आगे रखरखाव की जरूरत है । लिम के लिए, लेंस को साफ करने के लिए इसे पारदर्शी रखने के लिए बाहर ले जाने की जरूरत है । इस प्रकार, FDM अपेक्षाकृत आसान है तकनीकी रूप से प्रेरित किया जाना है । हालांकि, FDM और लिम के तंत्र अलग हैं, और जो विधि मानव बेहतर में अदूरदर्शिता की नकल3बहस के तहत अभी भी है । लिम की शक्तियों में से एक मजबूत phenotype FDM के साथ तुलना में है, पर कम चूहों के मामले में4.
जानवरों कि अदूरदर्शिता उत्प्रेरण के लिए इस्तेमाल किया गया है लड़कियों5, बंदरों6, ट्री shrews7, गिनी सूअरों8, और चूहों4शामिल हैं । आनुवंशिक हेरफेर की संभावना को ध्यान में रखते हुए, प्रचुर मात्रा में उपलब्ध एंटीबॉडी, और प्रजनन के लिए कम लागत, चूहों अदूरदर्शिता के पशु मॉडल के रूप में पहली पसंद किया गया हो सकता है. हालांकि, अन्य बड़े जानवरों के साथ तुलना में, माउस आंख के सामने लेंस या विसारक फिक्सिंग, विशेष रूप से युवा चूहों के लिए अपेक्षाकृत मुश्किल है जैसे प्रातः के बाद ठीक है । प्रयोगों है कि सामयिक दवा प्रशासन या एकाधिक अंतरिम आंख माप की जरूरत के लिए, यह भी फ्रेम हटाने योग्य होने के लिए आवश्यक है । एक अंय चुनौती माउस गोलक, जो परिष्कृत टेकनीक और उपकरणों के मूल्यांकन की जरूरत के छोटे रूपात्मक परिवर्तन है । तिथि करने के लिए विभिन्न अनुसंधान टीमों में इस्तेमाल अलग उत्प्रेरण और मापने प्रोटोकॉल यह प्रयोगशालाओं में परिणाम की तुलना और दोहराने के लिए कठिन बना. विवरण के साथ एक मानक प्रोटोकॉल की जरूरत है ।
पिछले काम करता है कई तरीकों का वर्णन करने के लिए लेंस या इस तरह के gluing9के रूप में माउस आंख, के सामने विसारक ठीक,10 सिलाई और सिर पर रखा आंख मारना फ्रेम11,12। हम संयुक्त मौजूद सिर आंख मारना टेकनीक11,12,13 हमारे नए डिजाइन फ्रेम के साथ घुड़सवार चूहों में मजबूत और कुशल प्रयोगात्मक अदूरदर्शिता उत्प्रेरण के लिए एक उन्नत प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए । प्रोटोकॉल जन्मोत्तर दिवस 21 (p21) में प्रातः के बाद जल्द ही युवा चूहों के लिए लागू किया जा सकता है । हम भी phenotypes के स्थिर और सटीक मूल्यांकन के लिए प्रक्रियाओं को अनुकूलित सहित अपवर्तन और अल । हमें उंमीद है कि इस मानकीकृत प्रोटोकॉल कमबीन चूहों निकट दृष्टि अनुसंधान के लिए एक और अधिक आसानी से सुलभ मॉडल बनाने में मदद कर सकते हैं ।
Protocol
Representative Results
Discussion
सुनिश्चित करें कि चश्मा माउस सिर पर छुरा तय किया जा करने के लिए, इस प्रोटोकॉल में कई कदम बहुत ध्यान दिया जाना चाहिए । periosteum पूरी तरह से दंत चिपकने वाला प्रणाली का उपयोग करने से पहले हटा दिया जाना चाहिए । खो?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम M.T. परड़े पर सलाह के लिए SDOCT, F. Schaeffel पर सलाह के लिए धंयवाद अपवर्तन और corneal वक्रता के मापन के लिए, श्री Sanshouo तीन आयामी फ्रेम डेटा, M. Miyauchi पुनः बनाने के लिए; K. Tsubota; Y. तनाका; एस. कोंदो; C. ्ोडा; M. Ibuki; Y. Miwa; Y. Hagiwara; A. Ishida; Y. Tomita; Y. Katada; ड. Yotsukura; K. ताकाहाशी; और महत्वपूर्ण चर्चाओं के लिए वाई. वांग. यह काम शिक्षा, संस्कृति, खेल, विज्ञान और प्रौद्योगिकी (MEXT) टी के मंत्रालय से वैज्ञानिक अनुसंधान (KAKENHI, संख्या 15K10881) के लिए अनुदान inAid द्वारा समर्थित किया गया था । यह काम भी Tsubota प्रयोगशाला, Inc (टोक्यो जापान) से निकट दृष्टि अनुसंधान के लिए अनुदान द्वारा समर्थित है ।
Materials
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
Riferimenti
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