Rüşvet ve deneysel miyopi fare modelinin değerlendirilmesi
Summary
Bu protokol için deneysel miyopi yeni tasarlanmış teşvik kullanarak farelerde gözlük ve oküler parametre ölçümlerde istikrarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde edilmesi için gerekli teknik tam işlemi açıklar.
Abstract
Miyopi fare modeli nispeten kolay genetik manipülasyon nedeniyle miyopi araştırma için güçlü bir araç olabilir. Miyopi hayvanlarda ikna etmek için bir yolu açık lensler gözlerinin önünde eksi hafta (miyopi, objektif kaynaklı LIM) koymaktır. Ancak, teşvik ve değerlendirme için kaybolmamış protokolleri Laboratuvar Laboratuvar değişiklik gösterir. Burada, yeni tasarlanmış LIM kullanarak farelerde gözlük ikna etmek için son derece pratik ve tekrarlanabilir bir yöntemi açıklanmıştır. Stabil fare göz önünde objektif lens temizleme veya topikal alınan sağlar yöntemi düzeltmeleri yönetim uyuşturucu. Fenotip sağlam ve verimli ve varyans küçüktür. Burada açıklanan yöntemi fareler için doğru olan deneyler için olası süresini uzatır sütten sonra uygulanabilir. Biz de verdi teknik danışmanlık kırılma ve Aksiyel uzunluk ölçüleri tekrarlanabilir sonuçlar elde edilmesi için. Biz burada anlatılan adım adım Protokolü umut ve ayrıntılı makale araştırmacı miyopi deneyler miyopi ile daha düzgün gerçekleştirmek ve verileri laboratuvarlar arasında karşılaştırılabilir yapmak yardımcı olabilir.
Introduction
Miyopi yaygınlığı son zamanlarda önemli ölçüde artmıştır, onun başlangıçlı ve ilerleme mekanizması iken hala büyük ölçüde1bilinmeyen. Miyopi en karakteristik fenotip Retina komplikasyonları veya bile körlüğü2riskini artırır Aksiyel uzunluğu (AL), uzama var. Daha iyi anlamak miyopi patogenezi ve etkili tedavileri geliştirmek için sağlam miyop hayvan modelleri ve istikrarlı fenotip değerlendirme gereklidir.
Kısaca, hayvanlarda miyop Birleşik inducing için iki yöntem var: form-yoksunluğu miyopi (FDM) ve objektif kaynaklı miyopi (LIM)3. Eski difüzörler göz önünde yerleştirir veya bir miyop fenotip kaynaklanan göz küresi, normal gelişimini etkiler görüntü gizlemek için göz kapağı tasarlamak. Lensler odak noktasının retinanın arkasında taşımak için göz önünde eksi ikinci yerler. Retina odak kayması algılar ve retina ve odak noktası yeniden hizalamak için göz küresi uzatıyor. FDM için göz kapağı kapalı veya difüzör göz önünde sabit sonra daha da neredeyse hiç bakım gereklidir. LIM için lens şeffaf tutmak için temizlik için alınması gerekir. Böylece, FDM Teknik olarak indüklenen nispeten kolaydır. Ancak, FDM ve LIM mekanizmaları farklıdır ve hangi yöntemi taklit eden insan miyopi daha iyi hala tartışma3altında. FDM ile en az olması durumunda fareler4kıyasla daha güçlü fenotip LIM güçlerinden biri.
Miyopi inducing için kullanılan hayvan kızlar5, maymunlar6, ağaç shrews7, eskiden şiling şimdi pigs8ve fareler4içerir. Genetik manipülasyon, bol kullanılabilir antikorlar ve ıslahı için düşük maliyet olasılığı göz önüne alındığında, fareler miyopi hayvan modeli olarak ilk seçenek olabilirdi. Ancak, diğer daha büyük hayvanlar ile karşılaştırıldığında, lens veya fare göz önünde difüzörler sabitleme sütten sonra nispeten hakkı gibi genç fareler için özellikle zordur. Topikal ilaç idaresi ya da birden fazla geçici göz ölçümleri ihtiyacınız deneyler için çerçeve çıkarılabilir olmak için de gereklidir. Başka bir sorun sofistike teknik ve değerlendirmek için aygıtları ihtiyacı fare göz küresi küçük morfolojik değişimdir. Bugüne kadar farklı inducing ve farklı araştırma ekipleri içinde kullanılan iletişim kurallarını ölçme karşılaştırmak ve sonuçları laboratuvarlar arasında yinelemek zorlaştırıyorsun. Detayları ile standart bir protokol gereklidir.
Önceki çalışır lens veya difüzörler910 ve başa takılan koruyucu gözlük çerçeve11,12dikiş, yapıştırma gibi fare göz önünde düzeltmek için birden çok yöntem nitelendirdi. EXIST başa takılan gözlüğü teknikleri11,12,13 sağlam ve verimli deneysel miyopi farelerde inducing için ameliorated bir protokol geliştirmek için bizim yeni tasarlanmış çerçeve ile birlikte. Protokol yakında Doğum sonrası gün 21 (p21) sütten sonra genç fareler için uygulanabilir. Biz de işlemleri kırılma ve AL dahil fenotipleri kararlı ve hassas değerlendirilmesi için optimize. Umarız bu standart protokolü miyop fareler miyopi araştırma için daha kolay erişilebilir bir model yapmak için yardımcı olabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Stabil fare kafasına düzeltilmesi için gözlük emin olmak için bu iletişim kuralı birkaç adımda büyük ilgi ödenmesi gerekir. Diş yapışkanlı sistemi kullanmadan önce kapaklarini tamamen kaldırılması gerekir. Kafatası kan da özenle temizlenmesi gerekiyor. Biraz ince ayar şu yapışkan uygulama sonra kabul edilebilir olsa da, sopa Kapa çeneni yapışkanlı sistem önce sık sık hareket ettirmeyin. İzlemek belgili tanımlık öğretim yapışkanlı sisteminin dikkatle, özellikle oranı her bileşen…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
M.T. Pardue SDOCT, F. Schaeffel kırılma ve kornea eğriliği, Bay Sanshouo üç boyutlu çerçeve veri, M. Miyauchi eğlence için tedavinin tavsiye için tavsiye için teşekkürler; K. Tsubota; Y. Tanaka; S. Kondo; C. Shoda; M. Ibuki; Y. Miwa; Y. Hagiwara; A. Ishida; Y. Tomita; Y. Katada; E. Yotsukura; K. Takahashi; ve Y. Wang kritik tartışmalar için. Bu eser için bilimsel araştırmalara (KAKENHI, sayı 15 K 10881) Milli Eğitim Bakanlığı, kültür, spor, bilim ve teknoloji (MEXT) TK. hibe inAid tarafından desteklenmiştir Bu eser grant miyopi araştırma Tsubota Laboratuvarı, Inc (Tokyo Japonya) tarafından da desteklenir.
Materials
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
Riferimenti
- Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
- Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. Form deprivation and lens-induced myopia: are they different. Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).
- Jiang, X., et al. A highly efficient murine model of experimental myopia. Scientific Reports. 8 (1), 2026 (2018).
- Torii, H., et al. Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression. EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).
- Smith, E. L., et al. Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).
- Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews. Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).
- Wu, Y., et al. Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis. Molecular Medicine Reports. , (2018).
- Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice. Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).
- Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. Mouse experimental myopia has features of primate myopia. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).
- Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia. Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).
- Gu, Y., et al. A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia. Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278 (2016).
- Siegwart, J. T., Norton, T. T. Goggles for controlling the visual environment of small animals. Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).
- Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice. Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).
- Chou, T. H., et al. Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).
- Park, H., et al. Assessment of axial length measurements in mouse eyes. Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).
