Vi tilbyr protokoller for evaluering av mesenchymal stamceller isolert fra tannlegekontoret masse og prostata kreft cellen interaksjoner basert på direkte og indirekte co kultur metoder. Tilstand medium og trans-vel membraner er egnet til å analysere indirekte paracrine aktivitet. Såing ulikt er farget celler sammen en passende modell for direkte celle-celle interaksjon.
Kreft som må og innviklet sykdommen er ikke bare av personlige celle spredning og vekst, men også kontrollert av svulst miljø og celle-celle interaksjoner. Identifikasjon av kreft og stamcelleforskningen interaksjoner, inkludert endringer i ekstracellulære miljø, fysisk interaksjon og utskilles faktorer, kan aktivere oppdagelsen av nye terapi alternativer. Vi kombinerer kjente co kultur teknikker for å lage et modellsystem for stamceller (MSCs) og kreft cellen interaksjoner. I denne studien, ble tannlegekontoret masse stamceller (DPSCs) og PC-3 prostatakreft celle interaksjoner undersøkt av direkte og indirekte co kultur teknikker. Tilstand medium (CM) innhentet fra DPSCs og 0,4 µm pore størrelse trans-vel membraner ble brukt til å studere paracrine aktivitet. Co kultur av forskjellige celletyper ble sammen utført for å studere direkte celle-celle interaksjon. Resultatene viste at CM økt celle spredning og redusert apoptose i prostatakreft cellekulturer. Både CM og trans-brønnen systemet økt celle migrasjon kapasiteten på PC-3 celler. Celler med forskjellige membran fargestoffer var frø i samme kultur båtene DPSCs deltok i en Self-organisert struktur med PC-3 celler under problemet direkte co kultur. Samlet indikerte resultatene at co kultur teknikker kan være nyttig for kreft og MSC interaksjoner som modellsystem.
Mesenchymal stamceller (MSCs), med mulighet til differensiering og bidrag til regenerering av mesenchymal vev som bein, brusk, muskel, leddbånd, sene og liggende under adipose, har vært isolert fra nesten alle vev i den voksne kropp1 , 2. utenom vev homeostase av produserende bosatt celler ved kronisk betennelse eller en skade, de produserer viktig cytokiner og vekst faktorer for å organisere angiogenese, immunsystemet og vev remodeling3. Samspillet av MSCs med kreft vev er ikke godt forstått, men samler bevis antyder at MSCs kan fremme svulst innvielsen, progresjon og metastasering4.
Homing evne til MSCs til skadde eller kronisk betent gjør dem en verdifull kandidat for stilk cellen-basert behandling. Men frigi kreft vev, “aldri healing sår”, også inflammatoriske cytokiner og pro-angiogenic molekyler avgjørende vekstfaktorer, som tiltrekker MSCs til cancerogenous området5. Mens det er begrenset rapportert rapporter viser hemmende effekten av MSCs på kreft vekst6,7, kreft progresjon og metastasering fremme effekter har blitt mye8. MSCs påvirke direkte eller indirekte kreft på ulike måter, inkludert undertrykke immunceller, sekresjon vekstfaktorer/cytokiner som støtter kreft celle spredning og migrasjon, forbedring angiogenic aktivitet og regulere epitel-mesenchymal overgang (EMT)9,10. Svulst miljøet består av flere celletyper, inkludert kreft-assosiert fibroblaster (CAFs) og/eller myofibroblasts, endotelceller, adipocytter og immunceller11. Av disse er CAFs den mest tallrike celle i svulst området som skiller ulike chemokines fremme kreft vekst og metastasering8. Det har vist at Ben margtransplantasjon-avledet MSCs kan skille ut CAFs i svulst stroma12.
Tannlegekontoret masse stamceller (DPSCs), karakterisert som de første dental vev-avledet MSCs av Gronthos et al. 13 i 2000 mye undersøkt av andre14,15, uttrykke pluripotency markører som Oct4, Sox2og Nanog16 og kan differensiere i ulike celle linages17. Gene og protein uttrykk analyse viste at DPSCs gi sammenlignbare nivåer av vekstfaktorer/cytokiner med andre MSCs som vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF), angiogenin, fibroblast vekstfaktor 2 (FGF2), interleukin-4 (IL-4), IL-6, IL-10, Stamcelle faktor (SCF), samt fms-lignende tyrosin kinase-3 ligand (Flt – 3L) som kan fremme angiogenese modulerer immunceller og støtte kreft celle spredning og migrasjon18,19,20 . Mens MSCs samhandling med kreft miljøet har vært godt dokumentert i litteraturen, er forholdet mellom DPSCs og kreftceller ikke evaluert ennå. Studien etablert vi co kultur og tilstand middels behandling strategier for en svært metastatisk prostatakreft cellen linje, PC-3 og DPSCs å foreslå potensielle tiltak av mekanismen av dental MSCs i kreft progresjon og metastasering.
Bidrag av MSCs svulst miljøet er regulert av flere interaksjoner inkludert hybrid celle generasjon via cellen fusjoner, entosis eller cytokin og chemokine aktiviteter mellom stamceller og kreft celler28. Strukturelle organisasjon, celle-celle interaksjoner og utskilles faktorer bestemmer kreft cellen virkemåte svulst forfremmelse, progresjon og metastasering til omkringliggende vev. Riktig ex vivo modellsystemer undersøke mekanismene bak samhandling bosatt celle populasjoner m…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble støttet av Yeditepe University. Alle data og tall brukes i denne artikkelen ble tidligere publisert34.
DMEM | Invitrogen | 11885084 | For cell culture |
FBS | Invitrogen | 16000044 | For cell culture |
PSA | Lonza | 17-745E | For cell culture |
Trypsin | Invitrogen | 25200056 | For cell dissociation |
PBS | Invitrogen | 10010023 | For washes |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | Component of differentiation media |
β-Glycerophosphate | Sigma | G9422 | Component of osteogenic differentiation medium |
Ascorbic acid | Sigma | A4544 | Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium |
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS −G) | Invitrogen | 41400045 | Component of chondrogenic differentiation medium |
TGF-β | Sigma | SRP3171 | Component of chondrogenic differentiation medium |
Insulin | Sigma | I6634 | Component of adipogenic differentiation medium |
Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) | Sigma | I7018 | Component of adipogenic differentiation medium |
Indomethacin | Sigma | I7378 | Component of adipogenic differentiation medium |
MTS Reagent | Promega | G3582 | Cell viability analyses |
TUNEL Assay | Sigma | 11684795910 | Apoptotic analyses |
24-well plate inserts | Corning | 3396 | For trans-well migration assay |
PKH67 | Sigma | PKH67GL | For co-culture cell staining |
PKH26 | Sigma | PKH26GL | For co-culture cell staining |
Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | For cell fixation |
von Kossa Kit | BioOptica | 04-170801.A | For cell staining (differentiation) |
Alcian blue | Sigma | A2899 | For cell staining (differentiation) |