इस प्रोटोकॉल में मूत्र पथ के संक्रमण के एक म्यूरिन मॉडल से एकल, संक्रमित मूत्राशय उपकला कोशिकाओं अलग करने की एक सरल विधि का वर्णन है ।
इस लेख में, हम एक प्रक्रिया है कि मूत्र पथ में प्रयोगात्मक संक्रमित किया गया है एक चूहे से व्यक्तिगत intracellular जीवाणु समुदायों को अलग करने के लिए इस्तेमाल की रूपरेखा । प्रोटोकॉल मोटे तौर पर तीन वर्गों में विभाजित किया जा सकता है: संक्रमण, मूत्राशय उपकला कोशिका संचयन, और मुंह micropipetting व्यक्तिगत संक्रमित उपकला कोशिकाओं को अलग करने के लिए । पृथक उपकला कोशिका में व्यवहार्य जीवाणु कोशिकाएँ होती हैं और यह बाह्य-कोशिका विश्लेषण के लिए आदर्श बनाते हुए, extracellular बैक्टीरिया को दूषित करने से लगभग मुक्त होती है । संक्रमण की शुरुआत से एक एकल intracellular जीवाणु समुदाय प्राप्त करने के लिए लिया गया समय के बारे में 8 ज है । इस प्रोटोकॉल को तैनात करने और व्यापक रूप से उपलब्ध सामग्री का उपयोग करता है सस्ती है, और हम आशा है कि यह भी अंय संक्रमण मॉडल में उपयोग किया जा सकता है कोशिका मिश्रण से एकल संक्रमित कोशिकाओं को अलग भले ही उन संक्रमित कोशिकाओं दुर्लभ हैं । हालांकि, मुंह micropipetting में एक संभावित जोखिम के कारण, इस प्रक्रिया अत्यधिक संक्रामक एजेंटों के लिए अनुशंसित नहीं है ।
मूत्र पथ के संक्रमण (यूटिस) सबसे आम जीवाणु संक्रमण में से एक हैं । एक अनुमान के अनुसार महिलाओं के 40-50% अपने जीवनकाल1के दौरान एक मूत्र पथ के संक्रमण (यूटीआई) का अनुभव होने की उंमीद कर रहे हैं । यूटीआई के मुख्य एजेंटों में से एक यूरोपैजेनिक ई. कोलाई (यूपीईसी) है, जो ७०% से अधिक सीधी ऊटिस2के लिए खाता है । इसके अलावा, जो एक यूटीआई है की लगभग एक चौथाई आवर्तक संक्रमण होगा, अक्सर एक ही तनाव के कारण, उचित एंटीबायोटिक उपचार के बावजूद3। यूटीआई की उच्च घटना हेल्थकेयर सिस्टम पर भारी बोझ का प्रतिनिधित्व करती है, जिसकी लागत यूएस4में $२,०००,०००,००० से अधिक है । इसके अलावा, एंटीबायोटिक्स का उपयोग करने के लिए उतीस भी बढ़ती एंटीबायोटिक प्रतिरोध दरों की ओर जाता है, जो एक प्रमुख सार्वजनिक स्वास्थ्य चिंता का विषय है5।
इसलिए, एक बड़े प्रयास के तंत्र को समझने में रखा गया है जिसके द्वारा यूपीसी मूत्र पथ को संक्रमित करता है, साथ ही साथ उसके आवर्तक संक्रमण के कारण की क्षमता6,7,8। विशेष रूप से, संक्रमण के एक माउस मॉडल के लिए इस्तेमाल किया गया है बैक्टीरियल और मेजबान विशेषताओं है कि यूटीआई8में योगदान की जांच । इस माउस मॉडल को मानव रोगियों से अलग असंशोधित नैदानिक उपभेदों के लिए लागू होने का लाभ है । इस मॉडल ने यूटीआई की स्थापना के लिए संभावित druggable जीवाणु मार्ग की खोज को भी प्रेरित किया है, जैसे कि 1 पिल्स9 और आयरन अधिग्रहण सिस्टम10।
यूटीआई में प्रारंभिक घटनाओं के अध्ययन में इन सफलताओं की तुलना में, आवर्तक यूटीआई अंतर्निहित तंत्र का ज्ञान अभी भी11कमी है । एक परिकल्पना यह है कि उपेक एंटीबायोटिक चिकित्सा evades और मूत्राशय उपकला कोशिकाओं के भीतर intracellular जीवाणु समुदायों (IBCs) के गठन से मूत्राशय में आवर्तक संक्रमण का कारण बनता है । आईबीसी को संक्रमण के म्यूरिन मॉडलों में और मानव यूटीआई रोगियों में12,13दोनों की पहचान की गई है । बाल रोग यूटीआई रोगियों से मूत्र के नमूनों में आईबीसी की उपस्थिति14,15की पुनरावृत्ति की उच्च दरों के साथ संबद्ध किया गया है । हालांकि, IBCs अलग करना और उनके भीतर बैक्टीरिया का अध्ययन करने के लिए तकनीकी रूप से उनकी दुर्लभ वस्तु के कारण चुनौतीपूर्ण साबित हो गया है; यह अनुमान है कि एक संक्रमित म्यूरीन ब्लैडर आमतौर पर केवल 10-100 IBCs16है । इसके अलावा, मूत्राशय उपकला कोशिकाओं अपेक्षाकृत बड़े (50-120 μm)17, यह प्रतिदीप्ति सहायता सेल छंटाई (facs) कि ठेठ facs नलिका ७० μm या १०० μm के व्यास के साथ डिजाइन किए है दिया तैनात करने के लिए चुनौतीपूर्ण बना रही है । इस प्रकार, मूत्राशय उपकला कोशिकाओं के रूप में बड़े के रूप में कोशिकाओं अक्सर छानने का पहलू से पहले से हटा रहे है fluidics कॉलेस्ट्रॉल से बचने के लिए ।
हमारी प्रयोगशाला ने हाल ही में एक सामांय और किफायती विधि के मिश्रण से दुर्लभ संक्रमित कोशिकाओं को अलग करने के लिए इस तरह के स्क्रैप के उपकला कोशिकाओं18मूत्राशय के रूप में वर्णित है । IBCs को प्रभावी ढंग से अलग करने के लिए, हम पारंपरिक मुंह पिख्ता इस्तेमाल किया । मुंह micropipetting एक तकनीक है कि लंबे समय तक एकल कोशिकाओं और भ्रूण के लिए डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए माइक्रोनिपुलेशन के लिए इस्तेमाल कियागया है19,20,21,22,23, 24 , 25. पारंपरिक मुंह बड़ी तरल मात्रा (milliliters में) के pipetting अक्सर प्रयोगशाला से संबंधित दुर्घटनाओं का कारण रहा है, और तकनीक सही पारंपरिक भ्रूणविज्ञान के बाहर अनुसंधान समुदाय के बहुत से त्याग दिया गया है और एकल सेल अनुप्रयोगों । हमारे प्रोटोकॉल इस तकनीक के एकल सेल संस्करण से प्रेरित है19,20, जो शोधकर्ता और नमूने के बीच हवा के एक बड़े बफर (> 2 एमएल) प्रदान करने के तरल की मात्रा की तुलना में स्थानांतरित (< 1 μL) । इस विधि भी ठीक नियंत्रण का लाभ लेता है कि मुंह micropipetting प्रदान करता है, जो आसपास के समाधान हस्तांतरित और अलग कोशिकाओं की उच्च शुद्धता के एक कम अंतिम मात्रा में अनुवाद । तकनीक सस्ती सामग्री (< $50) का उपयोग करता है, और इस प्रकार सभी प्रयोगशालाओं में लागू करने के लिए व्यवहार्य होना चाहिए ।
इस दृश्य प्रोटोकॉल हमारे IBC अलगाव तकनीक का वर्णन, एक संदर्भ प्रदान करने के लिए अंय इस तकनीक को दोहराने की मांग शोधकर्ताओं की सहायता । शोधकर्ता एक फ्लोरोसेंट विदारक माइक्रोस्कोप (या इसी तरह के उपकरण) है कि व्यक्तिगत उपकला कोशिकाओं और लाइव इमेजिंग के दौरान फ्लोरोसेंट बैक्टीरिया कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के लिए उपयोग की आवश्यकता होगी, micropipetting के लिए एक खुला और सुलभ इमेजिंग मंच के साथ (उपयोग माइक्रोस्कोप के विवरण के लिए सामग्री की तालिका देखें, हालांकि अन्य समकक्ष साधन मॉडल भी इस्तेमाल किया जा सकता है). हालांकि यह प्रोटोकॉल यूटीआई के म्यूरिन मॉडल में IBCs पर ध्यान केंद्रित करेगा, इसी तरह के तरीकों को संक्रमण के अन्य मॉडलों में सेल निलंबन से संक्रमित कोशिकाओं को अलग करने के लिए लागू किया जाना चाहिए ।
हमने जिस प्रोटोकॉल का वर्णन किया है वह यूटीआई के म्यूरिन मॉडल से सिंगल आईबीसी के पृथक्करण की अनुमति देता है । यह प्रोटोकॉल ibcs को व्यवहार्य intracellular बैक्टीरिया से युक्त करता है, जिसे cfu के लिए संवर्धन द्वारा सत्यापित किया जा सकता है । प्रोटोकॉल IBCs से intracellular बैक्टीरिया में परिणाम extracellular बैक्टीरिया द्वारा थोड़ा संदूषण के साथ, दोनों बैक्टीरिया और एक IBCS से मेजबान सेल के आगे लक्षण वर्णन के लिए अनुमति (चित्रा 4सी) । हम यह भी बताते है कि एक एकल ibc से बैक्टीरिया ऐसे qpcr (चित्रा 4सी) के रूप में अनुप्रवाह अनुप्रयोगों में इस्तेमाल किया जा सकता है, सुझाव है कि हमारी तकनीक के लिए इन विट्रो विश्लेषण में अंय के लिए ibc प्रक्रिया इस्तेमाल किया जा सकता है । 5 IBCs के रूप में कुछ के रूप में से काटा बैक्टीरिया pooling द्वारा, हम आगे तीन बैक्टीरियल जीन पर qRT-पीसीआर विश्लेषण करने के लिए हमारी क्षमता का प्रदर्शन, सुझाव है कि अच्छी गुणवत्ता आरएनए हमारे अलग आईबीसी में बैक्टीरिया से काटा जा सकता है (चित्रा 4डी). संयुक्त, डेटा हमने दिखाया है कि प्रदर्शन जीनोम चौड़ा आरएनए विश्लेषण (जैसे RNA अनुक्रमण के रूप में) एकल IBCs पर इस अलगाव तकनीक का उपयोग संभव हो सकता है ।
इस प्रोटोकॉल में, हम 6 एच समय बिंदु पर ध्यान केंद्रित किया है क्योंकि है कि जब काले 6 UTI89 द्वारा संक्रमित चूहों के मूत्राशय में ibc संख्या पीक। इसके अलावा, हम भी एक स्थैतिक बैक्टीरियल संस्कृति प्रणाली का इस्तेमाल किया है प्रकार के स्तर को बढ़ाने के लिए 1 UTI89 में पिल्स अभिव्यक्ति । प्रकार की अभिव्यक्ति 1 पिलस ई. कोलाई के लिए महत्वपूर्ण है करने के लिए संलग्न करने के लिए और संक्रमित मूत्राशय उपकला कोशिकाओं28। हालांकि, इस अभिव्यक्ति कसकर विनियमित है29 और पर्यावरण cues इसे बदलने के लिए जाना जाता है30। आदेश में एक सुसंगत संक्रमण phenotype और IBCs की पर्याप्त संख्या बनाए रखने के लिए, हम एक 2 x 24 h स्थैतिक बैक्टीरियल संस्कृति का उपयोग करने की सिफारिश (थोड़ा त्रिशंकु एट अल.8से संशोधित) और 6 एच संक्रमण समय बिंदु जब पहले परीक्षण ई. कोलाई के साथ काम इस तरह के NU14 और UTI8928,29के रूप में उपभेदों । हालांकि, यह संभव है कि इन चर अंय यूटीआई उपभेदों में या अंय चूहों उपभेदों में समायोजित करने के लिए प्रत्येक संक्रमण से IBCs की आदर्श संख्या प्राप्त करने की आवश्यकता होगी ।
जबकि त्रिशंकु एट अल.8 से प्रोटोकॉल केवल मादा चूहों का उपयोग करता है, पुरुष चूहों में मूत्र पथ के संक्रमण की स्थापना के लिए अंय स्थापित प्रोटोकॉल31रिपोर्ट किया गया है । इस मॉडल में, पुरुष चूहों में cystitis भी IBC मार्ग का पालन किया । के रूप में पुरुष और मादा चूहों के मूत्राशय आकार में समान हैं, हमें आशा है कि हमारे ibc अलगाव प्रोटोकॉल संक्रमित पुरुष चूहों पर के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल में प्रयुक्त अपेक्षाकृत सरल प्रौद्योगिकी भी यह सुनिश्चित करती है कि इसे अधिकांश प्रयोगशालाओं में तैनात किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल में शामिल प्रमुख कदमों में से एक है कांच की केशिकाओं को खींचना जिसमें रूचि के कोशिका प्रकार का चयन करने के लिए माइक्रोकेशिकाओं का निर्माण करना है । यह कदम microcapillaries के व्यास में लचीलापन के लिए अनुमति देता है बनाया है, और इस तरह की विधि एकाधिक विभिंन लक्ष्य सेल प्रकार के लिए बढ़ाया जा सकता है । हालांकि, इन capillaries बनाने में निहित भिन्नता के कारण, देखभाल करने के लिए सुनिश्चित करें कि अंतिम व्यास एक उपयोगी रेंज में है लिया जाना चाहिए । यदि केशिकाओं बहुत संकीर्ण हैं, वे ब्याज की सेल लेने में विफल है, लेकिन अगर वे बहुत व्यापक बना रहे हैं, एक ही प्रयास में एकाधिक कोशिकाओं का चयन किया जा सकता है । इसके अलावा, केशिका खींचने की प्रक्रिया के दौरान एक खुली लौ का उपयोग जलता है और आग का एक अंतर्निहित जोखिम वहन करती है, तो शोधकर्ता microcapillaries बनाने का प्रयास करने के लिए ऐसी घटनाओं होने से रोकने के लिए ध्यान रखना चाहिए । परिवर्तनशीलता के रूप में के रूप में अच्छी तरह से खुले आग इन capillaries बनाने में शामिल जोखिम को कम करने के लिए, शोधकर्ता ऐसे electroशरीरक्रियात्मक प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया उन लोगों के रूप में एक पारंपरिक माइक्रोपिपेट पुलिंग मशीन, का उपयोग कर सकता है (जैसे, पीसी-१००, नारीशिगे समूह) । के रूप में इन मशीनों या तो गुरुत्वाकर्षण या रोबोट प्लेटफार्मों के उपयोग के लिए capillaries खींच कर, वे संक्रमण मॉडल की जरूरतों को पूरा करने के लिए सिलवाया जा सकता है । हालांकि, micropipette पुलिंग उपलब्ध मशीनों की विस्तृत श्रृंखला का मतलब होगा कि व्यक्तिगत शोधकर्ता के लिए कुछ परीक्षण और त्रुटि के माध्यम से जाने के लिए इस प्रोटोकॉल के साथ उपयोग के लिए उपयुक्त अंतिम केशिका व्यास निर्धारित करने की आवश्यकता होगी ।
प्रस्तुत प्रोटोकॉल नेत्रहीन IBC की पहचान करने के लिए एक फ्लोरोसेंट टैग व्यक्त बैक्टीरिया का उपयोग करता है । इस प्रकार, इस तकनीक के शोधकर्ताओं द्वारा सीमित करने के लिए आनुवंशिक रूप से संक्रामक जीव को संशोधित करने की क्षमता है । विशेष रूप से उपेक के लिए, ibc-बनाने उपभेदों जैसे CFT073 और NU14 सफलतापूर्वक gfp के साथ बदल दिया गया है-plasmids३२,३३,३४व्यक्त; इसलिए ये एक ही प्रोटोकॉल में प्रयोग करने योग्य होना चाहिए । माउस मूत्राशय (७० मिमी2)३५के क्षेत्र के आधार पर, व्यक्तिगत उपकला कोशिकाओं की लंबाई (50-120 μm)17, और एक एकल मूत्राशय में IBCs की आवृत्ति16, ibcs की घटनाओं के लिए एक रूढ़िवादी अनुमान के बारे में है 1 में १,००० कक्ष (या ०.१%) । यह अनुमान दुर्लभ घटनाओं को लक्षित करने के लिए हमारे सेल आइसोलेशन प्रोटोकॉल की उपयोगिता को प्रदर्शित करते हैं । हमारे प्रोटोकॉल के माध्यम से सेल चयन की परिशुद्धता और केशिका व्यास कि खींचा जा सकता है की एक विस्तृत श्रृंखला का सुझाव है कि इस प्रोटोकॉल को विवो में अंय से intracellular बैक्टीरिया को अलग और संक्रमण के विट्रो मॉडलों में इस्तेमाल किया जा सकता है । वास्तव में, हम सफलतापूर्वक इस तकनीक का इस्तेमाल किया है संक्रमित सुसंस्कृत मूत्राशय उपकला कोशिकाओं को अलग (नहीं दिखाया डेटा) ।
प्रोटोकॉल में अधिक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण चरणों में से एक मूत्राशय के व्युत्क्षण के लिए scraping उपकला कोशिकाओं को बेनकाब है । हमने पाया है कि यह भी मूत्राशय पर एक चीरा बनाने के लिए यह splay बाहर scraping के लिए संभव है । तथापि, इसे काटने की प्रक्रिया के दौरान मूत्राशय की उपकला कोशिकाओं को होने वाले नुकसान को कम करने के लिए उचित सावधानी बरती जानी चाहिए; आदर्श रूप से एक एकल कटौती मूत्राशय खुला splay करने के लिए उपयोग किया जाना चाहिए । इसके अतिरिक्त, कटौती ठंडे PBS में किया जाना चाहिए, प्रक्रिया के दौरान कोशिकाओं या मूत्राशय के ऊतकों की आकस्मिक हानि को रोकने के लिए ।
इस प्रोटोकॉल में IBCs के मुंह का पिख्ता सेल चयन प्रक्रिया पर अधिक नियंत्रण प्रदान करता है, साथ ही सेल के साथ स्थानांतरित समाधान की अंतिम मात्रा को सीमित । ठीक नियंत्रण और शोधकर्ताओं के मुंह से समाधान की बड़ी जुदाई भी शोधकर्ता की सुरक्षा अधिकतम, के रूप में स्थानांतरित खंड microliter रेंज के लिए नैनोलिटर के भीतर हैं । इसके विपरीत, आधुनिक micropipette के साथ हमारे अनुभव यह है कि यह IBC के साथ अधिक आसपास के तरल और कोशिकाओं को स्थानांतरित करने के लिए जाता है, संभवतः extracellular ल्यूमिनल बैक्टीरिया के साथ संदूषण के लिए अग्रणी । हमारी खोज है कि मुंह pipetting अंय एकल सेल अलगाव विधियों पर एक उच्च प्रदर्शन प्रदान करता है भी अंय22,23,24लैब्स द्वारा सूचित किया गया है । एकल कोशिका अलगाव के अलावा, मुंह पिख्ता भी न्यूरॉन्स25, जो आगे उपयोगिता और मिनट के नियंत्रण को दर्शाता है कि एक प्रशिक्षित शोधकर्ता तकनीक के साथ प्राप्त कर सकते हैं के लिए एकल सेल इलेक्ट्रोपोरेशन में इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, सुरक्षा प्राथमिक महत्व की है, और हम संभावित अतिरिक्त उपाय है कि इस्तेमाल किया जा रहा रोगजनकों के आधार पर लिया जा सकता है सुझाव: (i) शोधकर्ता और जैविक सामग्री के बीच हवा बफर का विस्तार, उदाहरण के लिए एक aspirating का उपयोग करके एक बड़ी मात्रा के साथ पिपेट (जैसे, 5 मिलीलीटर), या (ii) एक अतिरिक्त बाधा के रूप में कार्य करने के लिए aspirating पिपेट में कपास ऊन के रूप में एक भौतिक फिल्टर जोड़ने.
मामलों में जहां एक जोखिम मूल्यांकन निष्कर्ष है कि मुंह pipetting अभी भी बहुत जोखिम भरा है, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रोबोट setups (जैसे nanoinjections के लिए इस्तेमाल उन लोगों के रूप में) हमारी तकनीक के अंय वर्गों के साथ संयुक्त किया जा सकता है के लिए एक सुरक्षित विधि प्रदान करने के लिए सुराग मिश्रित आबादी से संक्रमित कोशिकाओं को अलग । यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एक रोबोट माइक्रोनिप्लेटर का उपयोग कर के साथ हमारे अनुभव IBC अलगाव की कमी की दर का प्रदर्शन किया है मुंह की तुलना में पिख्ता, मूत्राशय उपकला कोशिका आकार में बड़े अंतर-प्रयोगात्मक भिन्नता के रूप में यह उपयोगकर्ता के लिए चुनौतीपूर्ण बनाता है एकल IBCs लेने के लिए आवश्यक बल निर्धारित करने के लिए एक रोबोट बांह की. फिर भी, यह एक व्यवहार्य, हालांकि महंगा है, रोग के अत्यधिक संक्रामक एजेंटों के साथ काम करने वालों के लिए विकल्प रहता है ।
The authors have nothing to disclose.
इस अनुसंधान को राष्ट्रीय अनुसंधान प्रतिष्ठान, प्रधानमंत्री कार्यालय, सिंगापुर द्वारा अपनी एनआरएफ अनुसंधान अध्येतावृत्ति योजना (एनआरएफ अवार्ड सं) के अंतर्गत समर्थन दिया गया था । NRF-RF2010-10); सिंगापुर स्वास्थ्य मंत्रालय की राष्ट्रीय चिकित्सा अनुसंधान परिषद (एनएमआरसी/सीआईडीजी/1358/2013); और जीनोम इंस्टीट्यूट ऑफ सिंगापुर (जीआईएस)/विज्ञान, प्रौद्योगिकी, और अनुसंधान के लिए एजेंसी (ए * स्टार) ।
1.5ml eppendorf tube | For static bacterial culture and OD measurement | ||
100% ethanol | For Alcohol Burner | ||
15 ml conical tube | For static bacterial culture and OD measurement | ||
1ml Tuberculin Syringe | BD Biosciences | 302100 | |
3% Bacterial Agar | For static bacterial culture and OD measurement | ||
70% ethanol | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Aesculap anatomic forceps | Braun/Kruuse | BD222R | For initial dissection of mouse (skin, fascia) |
Alcohol Burner | Wheaton | 237070 | |
Aspirating pipette | BD Biosciences | 357558 | |
Aspirator tube | Sigma-Aldrich | A5177 | |
Bacterial loops | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Benchtop centrifuge | Eppendorf | 5424 | Any centrifuge for 1.5ml eppendorf tubes |
Conical flasks | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Digital camera for microscope | Olympus | DP71 | For image capture and harvesting of IBCs. Any other fluorescent microscope with a GFP channel will suffice |
Glass Capillaries | Kimax | 6148K07 | |
Iris Scissors STR SS 110MM | Braun | BC110R | |
Isoflurane (Isothesia) | Henry Schein Animal Health | 29405 | |
Kanamycin Sulfate | Calbiochem | 420311 | For static bacterial culture and OD measurement |
LB broth (Miller) | Thermo/Gibco | 10855021 | For static bacterial culture and OD measurement |
Light source unit for microscope | Olympus | LG-PS2 | For image capture and harvesting of IBCs. Any other fluorescent microscope with a GFP channel will suffice |
Lubricant | KY | Any similar commercial medical lubricant will suffice | |
Macro fluorescence microscope | Olympus | MVX10 | For image capture and harvesting of IBCs. Any other fluorescent microscope with a GFP channel will suffice |
Micropipette + micropipette tips | For static bacterial culture and OD measurement | ||
PBS 1x | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Pipette controller + Pipettes | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Polyethylene Tubing | BD Intramedic | 427401 | |
Precision Glide needle 30G | BD Biosciences | 305107 | Possibly under new catalogue number (305106) |
Splinter forceps curved | Braun | BD312R | |
Spray bottle (for ethanol) | For static bacterial culture and OD measurement | ||
Square cuvettes | Elkay | 127-1010-400 | For static bacterial culture and OD measurement |
Sterilgard III Advance Safety Cabinet | Baker | SG403 | Any biosafety cabinet with a UV irridiator |
Sterilin 90mm Standard Petri Dish | Thermo | 101VR20 | Any sterile petri dish |
Stevens, vascular and tendon scissors, curved, delicate, 110 mm | Braun | OK366R | Recommended for harvesting of bladder |
Surgical Scissors STR S/B 105MM | Braun | BC320R | |
Tabletop Centrifuge | Eppendorf | 5810R | Any refridgerated centrifuge for 15ml conicals |
WPA C08000 cell density meter | Biowave (Biochrom) | 80-3000-45 | For static bacterial culture and OD measurement |