ब्लियोमाइसिन के एंडोट्रेकल इंजेक्शन द्वारा माउस फेफड़ों की चोट का प्रेरण
Summary
यहाँ हम C57BL में ब्लियोमाइसिन के एंडोस्ट्रियल इंजेक्शन द्वारा फेफड़ों की चोट के प्रेरण के बाद पूरे गर्भनाल से प्राप्त अंतःशिरा संचार मानव मेसेन्काइमल स्ट्रॉमल कोशिकाओं की एंटीफाइब्रोटिक गतिविधि की जांच करने के लिए एक प्रभावी विधि प्रस्तुत करते हैं /6 चूहों. इस प्रोटोकॉल को आसानी से अन्य चिकित्सकीय के पूर्व नैदानिक परीक्षण के लिए बढ़ाया जा सकता है.
Abstract
पल्मोनरी फाइब्रोसिस एक अलग एटियोलॉजी के साथ कई मानव फेफड़ों की बीमारियों की एक पहचान है। के बाद से वर्तमान उपचार बल्कि सीमित हैं, माउस मॉडल के लिए नए antifibrotic रणनीतियों के विकास के लिए एक आवश्यक उपकरण होना जारी है. यहाँ हम पूरे गर्भनाल (एचयूसी-एमएससी) से प्राप्त मानव मेसेन्काइमल स्ट्रॉमल कोशिकाओं की विवो एंटीफाइब्रोटिक गतिविधि में जांच करने के लिए एक प्रभावी विधि प्रदान करते हैं, जो ब्लियोमाइसिन-प्रेरित फेफड़ों की चोट को कम करता है। C57BL/6 चूहों bleomycin का एक एकल endotracheal इंजेक्शन प्राप्त (1.5 U/kg शरीर वजन) के बाद एक डबल जलसेक के द्वारा hUC-एमएससी (2.5 x 105) पूंछ नस में, 24 ज और 7 दिन bleomycin प्रशासन के बाद. दिन 8, 14, या 21 में बलिदान पर, भड़काऊ और फाइब्रोटिक परिवर्तन, कोलेजन सामग्री, और explanted फेफड़ों के ऊतकों में एचयूसी-एमएससी उपस्थिति का विश्लेषण कर रहे हैं। माउस श्वासनली में ब्लियोमाइसिन का इंजेक्शन फेफड़ों के प्रत्यक्ष लक्ष्यीकरण की अनुमति देता है, जिससे व्यापक फुफ्फुसीय सूजन और फाइब्रोसिस होता है। एचयूसी-एमएससी की दोहरी खुराक के प्रणालीगत प्रशासन का परिणाम ब्लियोमाइसिन-प्रेरित फेफड़ों की चोट के शुरुआती कुंदन में परिणाम है। अंतःशिरा रूप से संक्रमित एचयूसी-एमएससी को माउस फेफड़ों में क्षणिक रूप से प्रवेश किया जाता है, जहां वे अपने विरोधी भड़काऊ और एंटीफाइब्रोटिक गतिविधि को लागू करते हैं। अंत में, इस प्रोटोकॉल सफलतापूर्वक मानव फुफ्फुसीय फाइब्रोसिस के एक प्रयोगात्मक माउस मॉडल में एचयूसी-एमएससी के पूर्व नैदानिक परीक्षण के लिए लागू किया गया है। हालांकि, इस तकनीक को आसानी से फेफड़ों के pathophysiology पर विभिन्न endotracheally प्रशासित पदार्थों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए और नए विरोधी भड़काऊ और एंटीफाइब्रोटिक प्रणालीगत उपचार को मान्य करने के लिए दोनों बढ़ाया जा सकता है।
Introduction
पल्मोनरी फाइब्रोसिस एक प्रगतिशील रोग प्रक्रिया है जो एक्स्ट्रासेलुलर मैट्रिक्स घटकों के अत्यधिक जमाव की विशेषता है, मुख्य रूप से प्रकार मैं कोलेजन, फेफड़ों इंटरस्टिशियम में, बिगड़ा फेफड़ों के समारोह के लिए अग्रणी। यह एक अलग एटियोलॉजी के साथ कई मानव फेफड़ों के रोगों की पहचान है और एक गरीब नैदानिक पूर्वानुमान कारक का प्रतिनिधित्व करता है। के बाद से वर्तमान चिकित्सा बल्कि सीमित कर रहे हैं1, माउस मॉडल दोनों रोगजनक तंत्र की आगे की जांच के लिए शुरुआत और रोग की प्रगति को प्रभावित करने के लिए और नए antifibrotic के विकास के लिए एक आवश्यक उपकरण होना जारी रणनीतियों2,3.
तारीख करने के लिए, ब्लियोमाइसिन का प्रशासन प्रयोगात्मक प्रेरित फुफ्फुसीय फाइब्रोसिस4का सबसे अधिक लागू मॉडल रहा है। इसके अलावा कई देने के तरीकों (अंतःशिरा, इंट्रापेरिटोनल, subcutaneous, और साँस लेना सहित), इंट्राट्रेकल या एंडोट्रेकल इंजेक्शन ब्लोमाइसिन के सबसे अक्सर इस्तेमाल किया मार्गों के रूप में उभरा है4,5. जिस विधि का वर्णन हम यहाँ करते हैं, उसे श्वासनली श्लेष्म पर ब्लियोमाइसिन के स्कलिंग प्रभाव से बचने के लिए विकसित किया गया है। वास्तव में, श्वासनली को बाहरी बनाकर और इसे ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के माध्यम से विज़ुअलाइज़ करके, ऊपरी वायुमार्ग में किसी भी रिसाव के बिना ब्लियोमाइसिन समाधान की पूरी मात्रा को सीधे निचले वायुमार्ग में प्राप्त करना संभव है। जब आवश्यक शल्य विशेषज्ञता और इंस्ट्रूमेंटेशन उपलब्ध हैं, इस विधि के लिए अनुमति देता है सुरक्षित, मजबूत, और फेफड़ों की सूजन और फाइब्रोसिस के reproduible प्रेरण, के रूप में नीचे की सूचना दी.
Protocol
Representative Results
Discussion
फेफड़ों में बहिर्जात एजेंटों को वितरित करने के लिए एंडोट्रेकल प्रशासन एक अधिमानी मार्ग है। कई वर्षों के बाद से, श्वासनली में ब्लियोमाइसिन का प्रत्यक्ष इंजेक्शन व्यापक रूप से फुफ्फुसीय फाइब्रोसिस<sup c…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एक अनुदान आरएफ-2011-02352331 Ministero इटालियनो डेला सलामी (Armando Gabrieli के लिए) से समर्थित किया गया था.
Materials
| C57BL/6 mice | Charles River | Jax Mice Stock n. 000664 | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | T48402 | |
| Barraquer Micro Needle Holder | Lawton | 62-3755 | |
| Bleomycin sulfate | Sigma-Aldrich | B1141000 | |
| Bürker chamber | Brand | 718905 | |
| Culture Flasks | EuroClone | ET7076 | |
| Disposable razors | Unigloves | 4080 | |
| Dissecting Forceps | Aesculap Surgical Instruments | BD311R | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Heating pad | 2Biological Instruments | 557023 | |
| Isoflurane Vet | Merial Italia | N01AB06 | |
| Operating Microscope | Carl Zeiss | Model OPM 16 | |
| TrypLE Select Enzyme | Gibco | 12563-029 | |
| Vannas Micro Scissors | Aesculap Surgical Instruments | OC498R | |
| Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm | Ethicon | VCP392ZH |
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