זיהוי נוגדן Anti-aquaporin-4 G בנסיוב אדם על ידי Assay מבוססת-תא
Summary
Assay מבוססת תא היא שיטה בשימוש נרחב כדי לזהות סרום אנטי-aquaporin-4 אימונוגלובולין G… יכול להיות מיושם בשיטה זו אבחנה קלינית, מחקרים מדעיים של הפרעות ספקטרום אופטי neuromyelitis.
Abstract
נוגדן אנטי-aquaporin-4 (AQP4) G (IgG) הוא סמן אבחון הליבה עבור הפרעות הספקטרום אופטיקה neuromyelitis (NMOSD). הבדיקה מבוססת-תא (כקבוצת) היא שיטה בשימוש נרחב כדי לזהות anti-AQP4 IgG בסרום אדם עם רגישות גבוהה. בקצרה, סרום אנטי-AQP4 IgG הוא נלכד על ידי תא AQP4 transfected נעוצות על ביו-שבב אז זוהה על ידי נוגדנים משניים מתויג fluorescein. קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ הוא מנוצל כדי להמחיש את פלורסצנטיות, עוצמת קרינה פלואורסצנטית מוערך על-ידי קלינאים מנוסים לפחות שני. אבחנה סופית של NMOSD יכול להתבצע מבוסס על השילוב של אנטי-AQP4 IgG תוצאות איתור, הביטויים הקליניים ואת הממצאים neuroradiological. על פי מחקרים קודמים, כקבוצת הוא רגיש יותר ספציפית יותר שיטות זיהוי IgG אחרות אנטי-AQP4, ניתן להחיל אותה אבחנה קלינית והן מחקרים של NMOSD. השיטה יש מגבלות; לדוגמה, עדיין מידה בינלאומי כדי להעריך סרום אנטי-AQP4 IgG titers לוקה בחסר. . הנה, פרוטוקול מפורט לגילוי בנסיוב אדם אנטי-AQP4 IgG באמצעות כקבוצת מתואר.
Introduction
אג AQP4 סרום הוא סמן אבחון הליבה עבור neuromyelitis אופטיקה ספקטרום הפרעות (NMOSD)1. וזמינותו מבוססת-תא (כקבוצת) היא שיטה לזיהוי IgG נגד שימוש נרחב-AQP4 עם רגישות גבוהה. . הנה, עבור כקבוצת פרוטוקול מפורט הוא הציג.
AQP4, חלבון ערוץ מים, יש שש יחידות משתרע על-פני קרום ונקבוביות שני תחומים לוליינית סביב אחד מימית2. Anti-AQP4 אג מעורב בפתוגנזה של NMOSD באמצעות קשירה המטרה שלו, AQP4, הנמצא בעיקר על endfeet של האסטרוציטים3. הוכח כי אנטי-AQP4 IgG הוא חיובי כ שני שלישים של חולים NMOSD4. האחרונה הבינלאומי הקריטריונים לאבחון NMOSD, אנטי-AQP4 IgG נחשב להיות סמן אבחון הליבה5. בהקשר זה, חשוב מאוד ליצור פרוטוקול אמין כדי לזהות בנסיוב אדם אנטי-AQP4 IgG וכדי להקל על אבחנה קלינית של NMOSD.
כיום, שיטות שונות של זיהוי IgG anti-AQP4 הינם זמינים, כגון כקבוצת, המבוסס על רקמות assay, מקושרים-אנזים immunosorbent assay לזרום cytometry6,7. כקבוצת מעסיקה EU90 תאים, אשר הם transfected עם AQP4 האנושי, כדי ללכוד אנטי-AQP4 IgG. IgG שנתפסו anti-AQP4 זוהה על ידי נוגדנים משניים פלורסנט, לאחר מכן דמיינו ידי מיקרוסקופ. לצבירת ראיות הראו כי כקבוצת הוא רגיש וספציפי יותר מאשר אחרים אנטי-AQP4 IgG זיהוי שיטות6,7. על פי מטא אנליזה, רגישות וסגוליות של כקבוצת הוכחו להיות 76% ו- 99%, אשר היו גבוהים יותר מאשר מבוסס-רקמות, מבחני מקושרים-אנזים immunosorbent6. יתר על כן, השוואה multicenter של מבחני אבחון של אנטי-AQP4 IgG היה מתנהל7. סך של 193 לימוד הנושאים מ 15 מרכזי אבחון אירופה היו נרשם7. ארבע שיטות שונות נוצלו לזהות סרום אנטי-AQP4 IgG7. הוכח כי כקבוצת היה רגיש וספציפי יותר מאשר אחרים שיטות7. כפי AQP4 מבוטאת שני איזופורמים הגדולות (AQP4-M1 ו- AQP4-M23), אנטי-AQP4 IgG ללכוד תא transfected עם AQP4-M1 או AQP4-M23. אולם, איזה סוג של תא לכידה היא במחלוקת יותר שרידים. חקירה אחד תמך AQP4-M1 מבוסס כקבוצת8, בעוד אחרים הראו כי AQP4-M23 מבוסס כקבוצת הוא7,טוב יותר9,10. עם זאת, AQP4-M23 מבוססי כקבוצת תניב תוצאות חיוביות כוזבות עקב IgG לא ספציפי האיגוד8. Jarius ואח. 11 דיווחו כי היה הבדל משמעותי בשיעורי זיהוי IgG anti-AQP4 בין AQP4-M1 ו- CBAs AQP4-M23 מבוססי.
בסיכום, סרום אנטי-AQP4 IgG הוא סמן הליבה עבור NMOSD. כקבוצת יש ירידה לפרטים ורגישות גבוהה יותר מאשר שיטות זיהוי IgG אחרות אנטי-AQP4. זה נשאר שנוי במחלוקת אם AQP4-M1 או AQP4-M23-מבוסס – כקבוצת עדיף. במאמר זה, עבור כקבוצת AQP4-M1 מבוססי פרוטוקול מפורט מתואר, אשר ניתן להחיל על אבחנה קלינית ולימודים של NMOSD.
Protocol
Representative Results
Discussion
תארנו שיטה נגישים נרחב לזהות anti-AQP4 IgG בנסיוב אדם. Anti-AQP4 אג קשורה קשר הדוק NMOSD, הקמת שיטת זיהוי אמין anti-AQP4 IgG חיונית לאבחון קליני של NMOSD. ראשית, anti-AQP4 IgG הוא ספציפי NMOSD. טרשת נפוצה היא גם מחלה בתיווך החיסונית של מערכת העצבים המרכזית ומניות קווי דמיון רבים עם NMOSD12. עם זאת, anti-AQP4 IgG הוא רק ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים על התמיכה של מענקים מן הלאומי למדע קרן של סין (מספר 31600820), בריאות, ועדת תכנון משפחה של ג’ילין המחוז (לא 2016Q036), ו המדע טכנולוגיה תכנון הפרוייקט של ג’ילין (מס ‘ 20180520110JH).
Materials
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
Riferimenti
- Zekeridou, A., Lennon, V. A. Aquaporin-4 autoimmunity. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2 (4), 110 (2015).
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
