初代培養ラット副腎皮質細胞とステロイド ホルモン産生機能の試金
Summary
副腎皮質から分泌されるホルモンは、ストレスや病気に対して動物に不可欠です。ここでは、プライマリのラットの文化にプロトコル副腎細胞を提案します。副腎ステロイド生合成機能と脂質生合成に興味の試薬のメカニズムを調査するための良い生体外のプラットフォームかもしれない。
Abstract
副腎皮質が分泌するホルモンは、ストレスや病気に対して動物に不可欠です。ここで説明する方法は、初代培養ラット副腎細胞および関連機能アッセイ (コルチコステロンの分析と同様、脂質液滴表面蛋白質の蛍光抗体染色) の手順です。体内のモデルとは異なり副腎単層培養で interexperiments のバリエーションが少なく、実験条件がコントロールしやすい。その上、ラットのソースは牛のもののような他の動物よりも安定も。副腎研究で使用することができますいくつかのひと副腎細胞株 (NCI H295、NCI H295R、SW13 等) もあります。ただし、これらの行のステロイドの生産は血清のロット番号、通路番号、個別の遺伝子などの変異/損失を含む多数の要因によっては影響も。17 α-ヒドロキシラーゼを欠けているを除いてラット副腎皮質細胞の初代培養は副腎の生理学を研究のためのより良いより便利な技術です。要約すると、初代ラット副腎文化副腎システムに関心の試薬のメカニズム解明のための研究者の良い体外プラットフォームとなる可能性があります。
Introduction
内分泌系は生理学的な活動と恒常性1の調節を担当です。腎臓の頭蓋の極に位置する副腎、ミネラルコルチコイド、糖質コルチコイド、アンドロゲン2,3を分泌する主な内分泌器官の一つです。副腎の 2 つの部品がある: 皮質と髄質。副腎皮質は 3 層で構成されています: 外側の球状、中間皮質および内部の斑3。球状はアルドステロン、ナトリウム イオンと3腎臓の水再吸収を助ける鉱質コルチコイドの分泌元のサイトです。ゾナ副腎皮質は主に通常の生理条件3のグルココルチコイドの基底レベルを生成します。齧歯動物の副腎皮質ステロイドと人間のコルチゾール血ブドウ糖3を調節することによってストレスに対処で体を支援するために行動します。ある程度、炎症反応を抑制する、免疫システム4,5を規制できます。他の哺乳類、マウス、ラットと対照をなして副腎6、7の 17 α-ヒドロキシラーゼ式の不足のための機能的な網状を必要はありません。したがって、マウスおよびラットの副腎、副腎の C-19 ステロイド (コルチゾール、副腎男性ホルモン) の分泌を欠いています。
副腎皮質培養細胞副腎生理8を制御するメカニズムを調査するために有用であることが示されています。他のステロイド ホルモン産生組織のような各副腎ゾーンは遊離型コレステロール9からそのステロイドを合成します。刺激による副腎皮質刺激ホルモン (ACTH)、遊離コレステロールは内訳脂質液滴から解放され、したがって、副腎皮質、皮斑10でステロイドの産生を促進します。
多くのグループは、副腎皮質癌から安定したセルラインを確立しようとしています。ただし、いくつかの懸念には、副腎皮質細胞の生体外モデル8のように使用が限られています。細胞のステロイドの応答は通路、血清のロット番号と血清等の品質が異なる場合があります。さらに、商業の副腎細胞株 (Y1 と SW13) は副腎ステロイド生合成の8を研究することが難しく、コルチコステロンを分泌しません。前のヴィヴォ モデルは良い選択をすることができるこれらの市場からの組織は、いくつかの未知のリスクをぼやける場合がありますにもかかわらず、牛と馬の副腎を使用してください。それらに比べると、ラット副腎の管理が簡単で、ソースが比較的安定していてより病原体フリーします。一緒に取られて、ここで説明した本法は、ラット副腎皮質細胞におけるコルチコステロン合成の関連のメカニズムを調査する使用できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
副腎は、環境適応3で重要な役割を再生します。副腎皮質が分泌するホルモンは、規制し、生理機能と恒常性3を調整できます。生体内でのモデルには、体の本当の生理効果が反映されます。しかし、それはまだ実験で不安定な影響を引き起こしている多くの複雑な要因に影響されます。対照的に、培養細胞モデルでは利点がある動物モデルに比類のないに?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国家科学審議会台湾 (NSC102-2320-B-037-008-MY3) と国立チェン Kung 大学病院研究助成 (NCKUH-10102045) からの助成金によって支えられました。
Materials
| female/ male, SD/Wistar rats (8-12 wk) | BioLASCO | male or femal rats are suitable for experiments. Female's adrenal glands are larger than male rats, however, female rats own the oestrous cycles that may influence the experiments | |
| collagenase, type II | Sigma | C-6885 | isolation of adrenal cells |
| DMEM | ThermoFisher | 12800-017 | powder media for adrenal cells |
| Ham's F12 | ThermoFisher | 21700-075 | powder media for adrenal cells |
| HEPES | JT.baker | 4018 | buffer (powder) |
| NaHCO3 | JT.baker | 3506-1 | |
| Horse serum | Hyclone | 16050014 | |
| Fetal bovine serum | SAFC | 12103C | |
| penicillin (10,000 U)-streptomycin (10,000 ug/ml) | Corning | 30-002-Cl | antibiotics |
| curved forceps | BRAUN | BD343R | |
| forceps | BRAUN | BD331R | |
| scissor | BRAUN | BC224R | cut rat skin and muscle |
| delicate scissor | BRAUN | BC101R | cut adrenal glands |
| adipose-differentiation related protein | Abcam | ab108323 | antibody for lipid droplet associated protein |
| corticosterone ELISA kit | cayman | 500655 | assay for corticosterone synthesis |
| inverted light microscopy | Leica | ||
| fluorescence microscope | Nikon | ||
| Triton X-100 | JT.baker | X198-07 | for immunofluorescence staining |
| goat anti-rabbit IgG Alexa 488 Fluor secondary antibody | ThermoFisher | A-11034 | for immunofluorescence staining |
| anti-ADFP | Abcam | 108323 | for immunofluorescence staining |
| ProLong Gold antifade mountant | ThermoFisher | P36935 | for immunofluorescence staining |
Riferimenti
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