Protocolo de baixo custo de análise da pegada e caixa de teste de suspensão para ratos aplicada o retenção crônica de estresse

Summary

O protocolo de baixo custo, composto por análise de pegada e teste de caixa de suspensão após estresse de contenção é útil para avaliar os distúrbios do movimento do modelo do rato.

Abstract

Perturbação da marcha é frequentemente observada em pacientes com distúrbios do movimento. Em modelos do rato usados para distúrbios de movimento, análise da marcha é importante teste comportamental para determinar se os ratos imitam os sintomas dos pacientes. Déficit motor muitas vezes é induzida por estresse quando não fenótipo motor espontâneo é observado em modelos do rato. Portanto, a análise da marcha, seguido de estresse de carregamento seria um método sensível para avaliar o fenótipo motor em modelos do rato. No entanto, os pesquisadores enfrentam a exigência de um aparelho caro para obter resultados quantitativos automaticamente a partir da análise da marcha. Para estresse, estresse por métodos simples de carregamento sem aparelhos caros necessários para choque elétrico e forçado a correr é desejável. Portanto, apresentamos um protocolo simples e de baixo custo, consistindo em análise de pegada com papel e tinta, teste de caixa para avaliar a função motora de suspensão, e carga de estresse definido pela moderação com um tubo cónico. O déficit motor de ratos com êxito foram detectado pelo presente protocolo.

Introduction

Distúrbios do movimento são definidos como distúrbios do sistema nervoso, mostrando um excesso ou escassez de movimentos voluntários ou automática¹. Em particular, distúrbio da marcha é frequentemente documentado entre os pacientes com distúrbios de movimento^2,3,4. Portanto, a análise da marcha é um teste comportamental adequado para a validação de modelos animais de distúrbios do movimento. Em camundongos, análises automatizadas da marcha foram realizadas para andar em velocidade natural⁵ e em velocidades ajustáveis por esteira^6,7. Essas análises fornecem resultados quantitativos de marcha automaticamente. Um método alternativo para detectar o distúrbio da marcha é chamado análise da pegada. Depois rotulando as solas dos pés com tinta, ratos andar no papel, e as pegadas são analisadas. Inicialmente, vaselina e carvão em pó foram utilizados para visualizar a pegada⁸e então foram substituídos por tinta sobre papel de polígrafo⁹ e colaborador fotográfico em papel fotográfico¹⁰. Um método mais barato e menos tóxico, usando a tinta e o papel do que os outros métodos permanece até à data de¹¹. Análise de pegada é menos caro em comparação com a análise automatizada de^5,6,7 e seria útil para avaliar os distúrbios do movimento em modelos do rato para os pesquisadores sem fundos de pesquisa abundante .

O enforcamento teste de caixa é uma espécie de quatro testes de suspensão de membro usando fio gaiola tampa¹² e malha de arame de tela¹³. A caixa é um aparelho com malha rotatable tampa no topo da caixa ao longo de um bar do centro. Além de análise de marcha, o teste pode ser barata e facilmente executado. Portanto, foi realizado o enforcamento teste de caixa para avaliar a força de preensão e equilíbrio, além para a análise de pegada no presente protocolo.

Estresse induz os sintomas de distúrbios de movimento^14,15. Déficit motor muitas vezes é induzida por vários estresses crônicas mesmo quando nenhum fenótipo motor espontâneo é observado nos modelos do rato de um movimento transtorno^16,17,18. Moderação é um dos métodos comumente usados para o stress, porque o animal não é fisicamente prejudicado¹⁹ e custo é menos em comparação com outros métodos, como choque elétrico com aparelhos dedicados a carregar em camundongos e forçado a correr com o uso de uma escada rolante. Contenção por um tubo, que é interpretada por confinar um rato em um tubo cônico de 50ml furada, é mais fácil do que outros métodos, como fio de malha coador, membro gravado e envoltura de animal com gaze (revista²⁰). Neste artigo, resumimos os protocolos do espaço de análise e a caixa de suspensão teste após a contenção por um tubo. Este protocolo nos ajudaria a usar modelos de rato de distúrbios do movimento sem fenótipo motor espontâneo.

Protocol

Todos os experimentos com animais foram conduzidos de uma forma humana. O institucional Animal experimento Comité de Jichi universidade médica aprovado o estudo. O estudo foi realizado em conformidade com o Regulamento institucional para experimento Animal e diretriz Fundamental para a boa conduta do Animal experimento e actividades conexas em instituições acadêmicas de pesquisa sob a jurisdição do MEXT do Japão. Os ratos utilizados neste protocolo tem sido descrito anteriormente21. <p…

Representative Results

Os camundongos machos heterozigotos de Atp1a3 (Atp1a3+ −) que são o modelo do rato para início rápido distonia parkinsonismo e selvagem-tipo littermates foram utilizados no presente protocolo. Atp1a3+ − mostrou significativamente menor comprimento dos passos do membro anterior e membro posterior do que aqueles do tipo selvagem em 4 semanas de idade (Figura 5A e Figura 5B, a…

Discussion

A análise de pegada e a caixa de suspensão de teste são simples e pouco dispendiosos testes comportamentais para a função motora dos ratos. Os fenótipos neurocomportamentais em vários modelos de mouse foram detectados com êxito por esses testes. Por exemplo, encurtou o comprimento do passo em esclerose lateral amiotrófica²⁴, aumento do comprimento do passo assimétrico em ataxia-telangiectasia²⁵, aumento do comprimento de sobreposição na doença de Huntington dis…

Materials

Hanging box	O’hara & Co.	http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/
Marking pen	ZEBRA	MO-120-MC-BK
Goal box	O’hara & Co.	http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/	Accessory for apparatus of balanced beam test
Boxes	O’hara & Co.	–	Side wall of runway
Black ink	Shin-asahi	–
Red ink	Maruyamakogyo	BC-6
Disposable Petri Dish	Corning	351008	Petri dishe (35 mm in diameter)
Askul Multipaper Super White J Monochrome A3	Askul	701-712	White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)
50 mL Conical tube	Corning	430829
Square drill	KAKURI Corporation	DIY FACTORY (K32-0313)