שמרים כתושבת לפיתוח Assays פונקציונלי ללמוד אנושי האדם
Summary
הציגו כאן הם ארבעה פרוטוקולים כדי לבנות ולנצל שמרים סכביסים כתבת הכתב כדי לחקור את הפוטנציאל האנושי P53 transactivation הפעלה, השפעות של מוטציות הקשורות לסרטן השונים שלה, שיתוף הביע אינטראקציה חלבונים, ו ההשפעות של מולקולות קטנות ספציפיות.
Abstract
הממצא הידוע P53 חלבון מוכר יכול לשמש כגורם שעתוק (TF) ב -S. cerevisiae ס שמרים הורשו לפיתוח בחני פונקציונלי שונים ללמוד את ההשפעות של 1) מחייב האתר [i.e., אלמנט התגובה (RE)] משתני רצף על P53 הפעלה ספציפיות או 2) TP53 מוטציות, שיתוף מבוטא קופטים, או מולקולות קטנות על פעילות הפעלה P53. יישומי מחקר בסיסיים וטרנסלבותית שונים פותחו. הגישות הללו מנצלות שני יתרונות עיקריים של מודל השמרים. מצד אחד, הקלות של עריכת הגנום מאפשרת בנייה מהירה של מערכות עיתונאי איכותיות או כמותיים על ידי ניצול זנים איזוגניים הנבדלים רק ברמה של P53 מסוימים-RE כדי לחקור את הרצף-ספציפיות של P53 תלוי הפעלה מעבר. מצד שני, הזמינות של מערכות מוסדרים עבור ביטוי חוץ רחמי P53 מאפשר הערכה של הפעלה במגוון רחב של ביטוי חלבון. סקר בדוח זה משמשים באופן נרחב מערכות המבוססות על גנים עיתונאי צבע, לluciferase, ואת הצמיחה של שמרים כדי להמחיש את הצעדים מתודולוגיים העיקריים שלהם כדי להעריך באופן אנוש את כוח החיזוי שלהם. יתר על כן, רב-תכליתיות קיצונית של גישות אלה ניתן לנצל בקלות כדי ללמוד TFs שונים כולל P63 ו P73, שהם חברים אחרים של TP53 משפחת גנים.
Introduction
תמלול הוא תהליך מורכב מאוד הכרוך בפעילות דינמית, מרחבית וטמפורלית של גורמי שעתוק (TFs) וקופנים לגיוס ואפנון של RNA פולימות על אזורי כרומטין בתגובה לגירויים ספציפיים1 . רוב TFs, כולל מדכא הגידול האנושי P53, לזהות רכיבים ספציפיים משחק ציס בצורה של רצפי DNA הנקרא רכיבי תגובה (REs), אשר מורכב של יחיד (או מספר) מוטיבים ייחודיים ~ 6-10 נוקלאוטידים ארוך. בתוך מוטיבים אלה, עמדות בודדות עשויות להראות דרגות שונות של השונות2, מסוכמים בדרך כלל על ידי מטריצות משקל מיקום (pwm) או לוגו3,4.
שמרים S. cerevisiae ס היא מערכת המודל המתאים ללמוד היבטים שונים של חלבונים אנושיים דרך compleמנטציה, ביטוי חוץ רחמי, ומוסר פונקציונלי, גם כאשר גן שמרים אורתוולוגי אינו נוכח5, מיכל בן 6 , 7. בשל השימור האבולוציוני של רכיבי בסיס של מערכת הטרנססקריפט8, מספר רב של מערכות האדם (כאשר הביעו הבעה בתאי שמרים) יכולים לווסת את הביטוי של גן עיתונאי על ידי משחק באמצעות יזמים שעברו הנדסה ל הכיל REs מתאים. מערכת מודל התמלול המוצגת כאן עבור P53 אנושי מתאפיינת בשלושה משתנים מרכזיים שהאפקטים יכולים להיות מאופנן: 1) מודאליות של הביטוי והסוג של P53, 2) רצף RE השליטה P53 תלויי שעתוק, ו 3) סוג של גן עיתונאי (איור 1A).
בנוגע למודאליות של הביטוי P53, ס’ cerevisiae ס מאפשר בחירה של inducible, מחדש, או קונסטיטוטיביות9,10,11. בפרט, inducible GAL1 יזם מאפשר בסיס (באמצעות רפפינז כמקור פחמן) או משתנה (על ידי שינוי כמות של גלקטוז במדיה) ביטוי של TF ב שמרים. למעשה, הביטוי tunable דק מייצג פיתוח קריטי ללמידה לא רק P53 עצמה אלא גם P53 משפחה אחרים חלבונים12,13.
בנוגע לסוג ה-REs השולט בביטוי התלוי בP53, ס’ cerevisiae ס מאפשר בנייה של זנים כתבת שונים בעל הבדלים ייחודיים ב RE של עניין ברקע איזוגניים אחרת. מטרה זו היא להגיע באמצעות הסתגלות של גישה מגוונת במיוחד הגנום לעריכה שפותחה ב -S. cerevisiae ס, הנקרא delitto perfetto12,14,15,16.
יתר על כן, גנים עיתונאי שונים (כלומר, URA3, HIS3, ו- ADE2) ניתן להשתמש באיכות הפעולה והערכה כמותית של הפעילות של tfs האדם ב -S. cerevisiae ס, כל אחד עם תכונות ספציפיות שיכול ל להתאים לצרכים הניסיוניים17,18,19,20,21. הביטוי של הגנים האלה העיתונאי מדבר על ה, היסטידין, ובהתאמה. הכתב הURA3 אינו מאפשר את צמיחת התאים בנוכחות של 5 וכדומה, ולכן ניתן לבחור בו בצורה נגדית. מערכת ADE2 עיתונאי יש את היתרון כי, מלבד הבחירה התזונתית, זה מאפשר זיהוי של תאים שמרים לבטא פראי סוג (כלומר, פונקציונלי על ADE2 ביטוי) או מוטציה (כלומר,לא פונקציונלי על ADE2 ) P53 מצבע המושבה.
לדוגמה, תאים שמרים המבטאים את הגן ADE2 ליצור בגודל בדרך כלל מושבות לבנות על הצלחות המכילות כמויות מגבילות של אדנין (2.5-5.0 mg/L), בעוד אלה כי לא מתאים או לא לתעתזה מופיע על צלחת זהה אדום קטן (או ורוד) מושבות. הדבר נובע מהצטברות של ביניים במסלול הביוסינתטי של אדנין (כלומר, P-ריבוסידלסטינו-סראזול, שנקרא בעבר באופן כולל ובאוויר), המומר ליצירת פיגמנט אדום. הצבע האיכותני המבוססת על ADE2 הוא גן הכתבים מאז הוחלף על ידי הגחלילית הכמותית (LUC1)12,22. לאחרונה, העיתונאי ADE2 כבר בשילוב עם העיתונאי lacz ב קל לציון, חצי כמותי, שיטת עיתונאי כפול כי ניתן לנצל לסווג משנה P53 מוטציות לפי רמת השיורית של פונקציונליות . עשריםואחד
כתבים פלורסנט כגון egfp (חלבון פלורסנט ירוק משופר) או dsred (Discosoma sp. אדום חלבון הניאון) יש גם שימש הערכה כמותית של פעילות ההפעלה הקשורים לכל מוטציות ההיגיון האפשרי ב TP53 ברצף24. לבסוף, הסיכוי של שילוב היזמים tunable עבור ביטוי P53 אלל עם זנים שמרים איזוגניים שונים עבור RE ו/או הגן עיתונאי הובילו לפיתוח של מטריצת נתונים היוצרת סיווג מעודן של סרטן הקשורים ו germline . מוטציה P53 אלטלס25,26,27
הגישות המתוארות לעיל משמשות למדידת הפעילות הטרנסקריפטוניים של החלבון הP53. עם זאת, הביטוי של פראי מסוג P53 ב שמרים S. cerevisiae ס28 ו שיזוסכמיומיב פומל29 יכול לגרום לפיגור הצמיחה, אשר נקשר עם מעצר מחזור התא28,30 או . מוות תאים31 בשני המקרים, עיכוב הצמיחה שמרים מופעלת על ידי ביטוי P53 גבוהה, כבר מתואם עם אפנון פוטנציאל ההמרה של גנים שמרים אנדוגניים מעורב צמיחת תאים. תמיכה השערה זו, אובדן הפונקציה מוטציה P53 R273H לא להפריע צמיחת תאים שמרים כאשר מתבטאת ברמות דומות כמו פראי P5332. לעומת זאת, הביטוי בשמרים של המוטציות הרעילים P53 V122A (הידוע בפעילות הטרנססקריפט גבוהה יותר לעומת פראי-סוג P53) גרם לאפקט מעכבות גדילה חזק יותר מאשר פראי סוג P5332.
בנוסף, זה הוכיח כי האדם MDM2 היה מסוגל לעכב את הפעילות האנושית P53 הטרנס בשמרים, קידום אוביקווינציה שלה והשפלה הבאים33. בהתאם, היכולת של MDM2 אנושי ו mdmx לעכב את P53 המושרה עיכוב הצמיחה שמרים הפגינו32,34. במחקר נוסף, מתאם בין פעילות P53 טרנססקריפט ורמות ביטוי אקטין הוקמה, עם זיהוי של P53 RE במעלה הזרם על הגן ACT1 ב שמרים32. בעקביות, ביטוי אקטין היה משופר על ידי פראי P53 ואפילו יותר כך על ידי P53 V122A, אבל לא על ידי מוטציה P53 R273H. לעומת זאת, ביטוי אקטין ידי P53 ירד בנוכחות שיתוף של P53 מעכבי MDM2, mdmx, או pifithrin-α (מדכא קטן מולקולה של הפעילות P53 הטראנס), עקבי עם התוצאות המבוססות על שמרים-גידול שמרי. חשוב מכך, תוצאות אלה הקימו מתאם בין P53 המושרה עיכוב הצמיחה ומידת הפעילות שלה שמרים, אשר נוצל גם כדי לזהות וללמוד מולקולות קטנות מודלדירוג P53 פונקציות28,34 , 35.
Protocol
Representative Results
Discussion
שמרים מבוססי בחני הוכיחו שימושי כדי לחקור היבטים שונים של פונקציות חלבון P53. בחני אלה רגישים במיוחד להערכת פוטנציאל ההפעלה הפעלת כלפי משתנים של אתרי יעד RE, כולל הערכה של פולימריות פונקציונלי. השימוש כתבים צבע, כמו גם המזעור של התוצאה לוציפראז תוצאות בעלות חסכונית ומדרגי יחסית. כמו כן, מבחן …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים לאיחוד האירופי (כספי פדר poci/01/0145/פדר/007728 באמצעות מתכנתים המבצע מפעל להתחרות) וכספים לאומיים (fct/MEC, האופרה הלאומית של ciência e ומיניצ) באמצעות ה הסכם שותפות PT2020 UID/קי/50006/2019 והפרוייקטים (3599-PPCDT) לפטין/DTP-FTO/1981/2014-POCI-01-0145-פדר-016581. מלגות FCT: SFRH/BD/96189/2013 (S. גומז). עבודה זו נתמכת על ידי Compagnia S. פאולו, טורינו, איטליה (פרויקט 2017.0526) ומשרד הבריאות, (פרויקט 5×1000, 2015 ו 2016; המחקר הנוכחי 2016). אנו מודים עמוקות ד ר תרזה לופס-אריות מונטנגרו (אוניברסיטת טרנטו, מעבדות לימוד של מדעים ניסיוניים) לסיוע בהקלטת וידאו.
Materials
| L-Aspartic acid | SIGMA | 11189 | |
| QIAquick PCR Purification Kit | QIAGEN | 28104 | |
| L-Phenylalanine | SIGMA | 78019 | |
| Peptone | BD Bacto | 211677 | |
| Yeast ex+A2:C26tract | BD Bacto | 212750 | |
| Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids and Ammonium Sulfate | BDTM | 233520 | |
| Lithium Acetate Dihydrate | SIGMA | 517992 | |
| Bacteriological Agar Type A | Biokar Diagnostics | A1010 HA | |
| G418 disulfate salt | SIGMA | A1720 | |
| Ammonium Sulfate | SIGMA | A2939 | |
| L-Arginine Monohydro-chloride | SIGMA | A5131 | |
| Adenine Hemisulfate Salt | SIGMA | A9126 | |
| Passive Lysis Buffer 5x | PROMEGA | E1941 | |
| Bright-Glo Luciferase Assay System | PROMEGA | E2620 | |
| 5-FOA | Zymo Research | F9001 | |
| D-(+)-Galactose | SIGMA | G0750 | |
| L-Glutamic acid | SIGMA | G1251 | |
| Dextrose | SIGMA | G7021 | |
| L-Histidine | SIGMA | H8125 | |
| L-Isoleucine | SIGMA | I2752 | |
| L-Lysine | SIGMA | L1262 | |
| L-Leucine | SIGMA | L8000 | |
| L-Methionine | SIGMA | M2893 | |
| PEG | SIGMA | P3640 | |
| D-(+)-Raffinose Pentahydrate | SIGMA | R0250 | |
| L-Serine | SIGMA | S4500 | |
| L-Tryptophan | SIGMA | T0271 | |
| L-Threonine | SIGMA | T8625 | |
| Uracil | SIGMA | U0750 | |
| L-Valine | SIGMA | V0500 |
Riferimenti
- Spitz, F., Furlong, E. E. Transcription factors: from enhancer binding to developmental control. Nature Reviews Genetics. 13 (9), 613-626 (2012).
- Pan, Y., Tsai, C. J., Ma, B., Nussinov, R. Mechanisms of transcription factor selectivity. Trends in Genetics. 26 (2), 75-83 (2010).
- Das, M. K., Dai, H. K. A survey of DNA motif finding algorithms. BMC Bioinformatics. 8 Suppl 7, S21 (2007).
- Sebastian, A., Contreras-Moreira, B. The twilight zone of cis element alignments. Nucleic Acids Resesarch. 41 (3), 1438-1449 (2013).
- Iggo, R., et al. Validation of a yeast functional assay for p53 mutations using clonal sequencing. Journal of Pathology. 231 (4), 441-448 (2013).
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genetics. 3 (5), e84 (2007).
- Scharer, E., Iggo, R. Mammalian p53 can function as a transcription factor in yeast. Nucleic Acids Research. 20 (7), 1539-1545 (1992).
- Kennedy, B. K. Mammalian transcription factors in yeast: strangers in a familiar land. Nature Reviews Molecular Cellular Biology. 3 (1), 41-49 (2002).
- Belli, G., Gari, E., Piedrafita, L., Aldea, M., Herrero, E. An activator/repressor dual system allows tight tetracycline-regulated gene expression in budding yeast. Nucleic Acids Research. 26 (4), 942-947 (1998).
- Mumberg, D., Muller, R., Funk, M. Regulatable promoters of Saccharomyces cerevisiae: comparison of transcriptional activity and their use for heterologous expression. Nucleic Acids Research. 22 (25), 5767-5768 (1994).
- Weinhandl, K., Winkler, M., Glieder, A., Camattari, A. Carbon source dependent promoters in yeasts. Microbial Cell Factories. 13, 5 (2014).
- Inga, A., Storici, F., Darden, T. A., Resnick, M. A. Differential transactivation by the p53 transcription factor is highly dependent on p53 level and promoter target sequence. Molelcular and Cellular Biology. 22 (24), 8612-8625 (2002).
- Resnick, M. A., Inga, A. Functional mutants of the sequence-specific transcription factor p53 and implications for master genes of diversity. Proceeding of the National Academy of Science USA. 100 (17), 9934-9939 (2003).
- Tomso, D. J., et al. Functionally distinct polymorphic sequences in the human genome that are targets for p53 transactivation. Proceeding of the National Academy of Science USA. 102 (18), 6431-6436 (2005).
- Storici, F., Lewis, L. K., Resnick, M. A. In vivo site-directed mutagenesis using oligonucleotides. Nature Biotechnology. 19 (8), 773-776 (2001).
- Storici, F., Resnick, M. A. The delitto perfetto approach to in vivo site-directed mutagenesis and chromosome rearrangements with synthetic oligonucleotides in yeast. Methods in Enzymology. 409, 329-345 (2006).
- Campomenosi, P., et al. p53 mutants can often transactivate promoters containing a p21 but not Bax or PIG3 responsive elements. Oncogene. 20 (27), 3573-3579 (2001).
- Flaman, J. M., et al. A simple p53 functional assay for screening cell lines, blood, and tumors. Proceedings of the National Academy of Science USA. 92 (9), 3963-3967 (1995).
- Kovvali, G. K., Mehta, B., Epstein, C. B., Lutzker, S. G. Identification of partial loss of function p53 gene mutations utilizing a yeast-based functional assay. Nucleic Acids Research. 29 (5), E28 (2001).
- Shimada, A., et al. The transcriptional activities of p53 and its homologue p51/p63: similarities and differences. Ricerca sul cancro. 59 (12), 2781-2786 (1999).
- Sunahara, M., et al. Mutational analysis of p51A/TAp63gamma, a p53 homolog, in non-small cell lung cancer and breast. Oncogene. 18 (25), 3761-3765 (1999).
- Andreotti, V., et al. p53 transactivation and the impact of mutations, cofactors and small molecules using a simplified yeast-based screening system. PLoS ONE. 6 (6), e20643 (2011).
- Hekmat-Scafe, D. S., et al. Using yeast to determine the functional consequences of mutations in the human p53 tumor suppressor gene: An introductory course-based undergraduate research experience in molecular and cell biology. Biochemistry Molecular Biology Educaction. 45 (2), 161-178 (2017).
- Kato, S., et al. Understanding the function-structure and function-mutation relationships of p53 tumor suppressor protein by high-resolution missense mutation analysis. Proceedings of the National Academy of Science USA. 100 (14), 8424-8429 (2003).
- Monti, P., et al. Transcriptional functionality of germ line p53 mutants influences cancer phenotype. Clinical Cancer Research. 13 (13), 3789-3795 (2007).
- Monti, P., et al. Dominant-negative features of mutant TP53 in germline carriers have limited impact on cancer outcomes. Molecular Cancer Research. 9 (3), 271-279 (2011).
- Leroy, B., et al. The TP53 website: an integrative resource centre for the TP53 mutation database and TP53 mutant analysis. Nucleic Acids Research. 41 (Database issue), D962-D969 (2013).
- Nigro, J. M., Sikorski, R., Reed, S. I., Vogelstein, B. Human p53 and CDC2Hs genes combine to inhibit the proliferation of Saccharomyces cerevisiae. Molecular and Cellular Biology. 12 (3), 1357-1365 (1992).
- Bureik, M., Jungbluth, A., Drescher, R., Wagner, P. Human p53 restores DNA synthesis control in fission yeast. Biological Chemistry. 378 (11), 1361-1371 (1997).
- Leao, M., et al. Alpha-mangostin and gambogic acid as potential inhibitors of the p53-MDM2 interaction revealed by a yeast approach. Journal of Natural Products. 76 (4), 774-778 (2013).
- Hadj Amor, I. Y., et al. Human p53 induces cell death and downregulates thioredoxin expression in Saccharomyces cerevisiae. FEMS Yeast Research. 8 (8), 1254-1262 (2008).
- Leao, M., et al. Novel simplified yeast-based assays of regulators of p53-MDMX interaction and p53 transcriptional activity. FEBS J. 280 (24), 6498-6507 (2013).
- Di Ventura, B., Funaya, C., Antony, C., Knop, M., Serrano, L. Reconstitution of Mdm2-dependent post-translational modifications of p53 in yeast. PLoS ONE. 3 (1), e1507 (2008).
- Leao, M., et al. Discovery of a new small-molecule inhibitor of p53-MDM2 interaction using a yeast-based approach. Biochemichal Pharmacology. 85 (9), 1234-1245 (2013).
- Billant, O., Blondel, M., Voisset, C. p53, p63 and p73 in the wonderland of S. cerevisiae. Oncotarget. 8 (34), 57855-57869 (2017).
- Cho, Y., Gorina, S., Jeffrey, P. D., Pavletich, N. P. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations. Science. 265 (5170), 346-355 (1994).
- Muller, P. A., Vousden, K. H., Norman, J. C. p53 and its mutants in tumor cell migration and invasion. Journal of Cellular Biology. 192 (2), 209-218 (2011).
- Oren, M., Rotter, V. Mutant p53 gain-of-function in cancer. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2 (2), a001107 (2010).
- Walerych, D., Napoli, M., Collavin, L., Del Sal, G. The rebel angel: mutant p53 as the driving oncogene in breast cancer. Carcinogenesis. 33 (11), 2007-2017 (2012).
- Ciribilli, Y., et al. The coordinated p53 and estrogen receptor cis-regulation at an FLT1 promoter SNP is specific to genotoxic stress and estrogenic compound. PLoS ONE. 5 (4), e10236 (2010).
- Menendez, D., Inga, A., Resnick, M. A. Potentiating the p53 network. Discovery Medicine. 10 (50), 94-100 (2010).
- Monti, P., et al. Characterization of the p53 mutants ability to inhibit p73 beta transactivation using a yeast-based functional assay. Oncogene. 22 (34), 5252-5260 (2003).
- Monti, P., et al. Tumour p53 mutations exhibit promoter selective dominance over wild-type p53. Oncogene. 21 (11), 1641-1648 (2002).
- Shiraishi, K., et al. Isolation of temperature-sensitive p53 mutations from a comprehensive missense mutation library. Journal of Biological Chemistry. 279 (1), 348-355 (2004).
- Soussi, T. TP53 mutations in human cancer: database reassessment and prospects for the next decade. Advances in Cancer Research. 110, 107-139 (2011).
- Malkin, D. Li-Fraumeni Syndrome. Genes and Cancer. 2, 474-484 (2001).
- el-Deiry, W. S., Kern, S. E., Pietenpol, J. A., Kinzler, K. W., Vogelstein, B. Definition of a consensus binding site for p53. Nature Genetics. 1 (1), 45-49 (1992).
- Menendez, D., Inga, A., Resnick, M. A. The expanding universe of p53 targets. Nature Reviews in Cancer. 9, 724-737 (2009).
- Ciribilli, Y., et al. Transactivation specificity is conserved among p53 family proteins and depends on a response element sequence code. Nucleic Acids Research. 41 (18), 8637-8653 (2013).
- Smeenk, L., et al. Characterization of genome-wide p53-binding sites upon stress response. Nucleic Acids Research. 36, 3639-3654 (2008).
- Vyas, P., et al. Diverse p53/DNA binding modes expand the repertoire of p53 response elements. Proceeding of the National Academy of Science USA. 114 (40), 10624-10629 (2017).
- Tebaldi, T., et al. Whole-genome cartography of p53 response elements ranked on transactivation potential. BMC Genomics. 16, 464 (2015).
- Wang, T., et al. Species-specific endogenous retroviruses shape the transcriptional network of the human tumor suppressor protein p53. Proceedings of the National Academy of Science USA. 104, 18613-18618 (2007).
- Bond, G. L., et al. A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans. Cell. 119 (5), 591-602 (2004).
- Zeron-Medina, J., et al. A polymorphic p53 response element in KIT ligand influences cancer risk and has undergone natural selection. Cell. 155 (2), 410-422 (2013).
- Lion, M., et al. Evolution of p53 transactivation specificity through the lens of a yeast-based functional assay. PLoS ONE. 10 (2), e0116177 (2015).
- Schumacher, B., et al. C. elegans ced-13 can promote apoptosis and is induced in response to DNA damage. Cell Death and Differentiation. 12 (2), 153-161 (2005).
- Jordan, J. J., et al. Low-level p53 expression changes transactivation rules and reveals superactivating sequences. Proceeding of the National Academy of Science USA. 109 (36), 14387-14392 (2012).
- Soares, J., et al. Oxazoloisoindolinones with in vitro antitumor activity selectively activate a p53-pathway through potential inhibition of the p53-MDM2 interaction. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 66, 138-147 (2015).
- Leao, M., et al. Enhanced cytotoxicity of prenylated chalcone against tumour cells via disruption of the p53-MDM2 interaction. Life Sciences. 142, 60-65 (2015).
- Soares, J., et al. A tryptophanol-derived oxazolopiperidone lactam is cytotoxic against tumors via inhibition of p53 interaction with murine double minute proteins. Pharmacol Research. 95-96, 42-52 (2015).
- Soares, J., et al. DIMP53-1: a novel small-molecule dual inhibitor of p53-MDM2/X interactions with multifunctional p53-dependent anticancer properties. Molecular Oncology. 11 (6), 612-627 (2017).
- Soares, J., et al. Reactivation of wild-type and mutant p53 by tryptophanolderived oxazoloisoindolinone SLMP53-1, a novel anticancer small-molecule. Oncotarget. 7 (4), 4326-4343 (2016).
- Sharma, V., Monti, P., Fronza, G., Inga, A. Human transcription factors in yeast: the fruitful examples of P53 and NF-small ka, CyrillicB. FEMS Yeast Research. 16 (7), (2016).
- Stepanov, A., Nitiss, K. C., Neale, G., Nitiss, J. L. Enhancing drug accumulation in Saccharomyces cerevisiae by repression of pleiotropic drug resistance genes with chimeric transcription repressors. Molecular Pharmacology. 74 (2), 423-431 (2008).
- Sharma, V., et al. Quantitative Analysis of NF-kappaB Transactivation Specificity Using a Yeast-Based Functional Assay. PLoS ONE. 10 (7), e0130170 (2015).
- Epinat, J. C., et al. Reconstitution of the NF-kappa B system in Saccharomyces cerevisiae. Yeast. 13 (7), 599-612 (1997).
- Inga, A., Reamon-Buettner, S. M., Borlak, J., Resnick, M. A. Functional dissection of sequence-specific NKX2-5 DNA binding domain mutations associated with human heart septation defects using a yeast-based system. Human Molecular Genetics. 14 (14), 1965-1975 (2005).
- Reamon-Buettner, S. M., Ciribilli, Y., Inga, A., Borlak, J. A loss-of-function mutation in the binding domain of HAND1 predicts hypoplasia of the human hearts. Human Molecular Genetics. 17 (10), 1397-1405 (2008).
- Balmelli-Gallacchi, P., et al. A yeast-based bioassay for the determination of functional and non-functional estrogen receptors. Nucleic Acids Research. 27 (8), 1875-1881 (1999).
