Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral
Summary
Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.
Abstract
En este estudio, un modelo de ratón de oclusión de arteria cerebral media (MCA) se emplea para el estudio de isquemia-reperfusión cerebral. Un modelo reproducible y confiable es útil para investigar la fisiopatología de la isquemia-reperfusión cerebral y determinar posibles estrategias terapéuticas para pacientes con accidente cerebrovascular. Las variaciones en la anatomía del círculo de Willis de C57BL/6 ratones afecta su volumen de infarto después de la lesión inducida por la isquemia cerebral. Los estudios han indicado que oclusión distal de la MCA (MCAO) puede superar este problema y resultar en un tamaño de infarto estable. En este estudio, establecemos un modelo de ratón de oclusión de los vasos dos de isquemia-reperfusión cerebral a través de la interrupción del flujo sanguíneo a la derecha MCA. Distal, ligar el MCA derecha y arteria carótida común derecha (CCA) y restaurar el flujo sanguíneo después de un periodo de isquemia. Esta isquemia-reperfusión induce un infarto de tamaño estable y un déficit conductual. Las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico dentro del período de infiltración de 24 h. Además, la pérdida neuronal en el área cortical es menor para una duración más larga de la reperfusión. Por lo tanto, este modelo de oclusión de los vasos dos es adecuado para investigar la respuesta inmune y la recuperación neuronal durante el período de reperfusión tras la isquemia cerebral.
Introduction
El modelo de ratón de isquemia-reperfusión cerebral es uno de los enfoques experimentales más utilizados para la investigación de la fisiopatología del cerebro inducida por la isquemia lesión1. Porque isquemia-reperfusión cerebral activa el sistema inmune periférico, las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico y causan daño neuronal2. Así, un modelo de ratón fiable y reproducible que imita la isquemia-reperfusión cerebral es necesaria para entender la patofisiología del accidente cerebrovascular.
C57BL/6J (B6) los ratones son la cepa más comúnmente utilizada en experimentos de movimiento ya que pueden fácilmente ser manipulados genéticamente. Dos modelos comunes de MCAO/reperfusión que imitan a la condición de isquemia-reperfusión cerebral están disponibles. El primero es el modelo de filamento intramural de MCAO proximal, donde se emplea un filamento silicio intravascularly ocluir el flujo sanguíneo en el MCA; Posteriormente se retira el filamento oclusión para restaurar el flujo de sangre3. Una duración corta oclusión resulta en una lesión de la región subcortical, considerando que una mayor duración de la obstrucción provoca infartos en las áreas corticales y subcorticales. El segundo modelo es el modelo de ligadura de MCAO distal, que consiste en la ligadura extravascular de la MCA y CCA para reducir el flujo de sangre a través de la MCA, después de que el flujo sanguíneo se restablece a través de la remoción de la sutura y el aneurysm clip4. En este modelo, un infarto es causado en las áreas corticales, y la tasa de mortalidad es baja. Debido a la ligadura del modelo MCAO/reperfusión requiere craniectomía para exponer el sitio de la MCA distal, el sitio puede confirmarse fácilmente, y examinando si el flujo de sangre en el MCA distal se interrumpe durante el procedimiento es sencillo.
B6 ratones muestran considerables variaciones en la anatomía de su círculo de Willis; Esto puede afectar el volumen de infarto tras isquemia-reperfusión cerebral5,6,7. Actualmente, este problema puede superarse a través de la ligadura de la MCA distales8. En este estudio, establecemos un método para ocluir el flujo de sangre MCA y permitiendo la reperfusión después de un período predeterminado de isquemia. Oclusión de dos vasos del modelo de isquemia-reperfusión cerebral induce isquemia transitoria del territorio MCA a través de la ligadura de la MCA distal derecho y CCA derecha, con flujo de sangre restaurado después de un periodo de isquemia. Este modelo MCAO/reperfusión induce un infarto de tamaño estable, una mayor parte del cerebro de la infiltración de células inmunes en el cerebro isquémico y un déficit conductual después de isquemia – reperfusión cerebral4.
Protocol
Representative Results
Discussion
El modelo de ratón MCAO/reperfusión es un modelo animal empleado comúnmente para mímico isquemia transitoria en los seres humanos. Este modelo animal puede aplicarse a las cepas de ratones transgénicos y knockout para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Varios pasos en el protocolo son especialmente críticos. (1) la microperforadora debe utilizarse con cuidado cuando se crea un agujero en el cráneo, con inadecuado acción fácilmente, lo que causa hemorragia de la MCA. (2) el MCA no debe s…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Ministerio de ciencia y tecnología, Taiwán (más 106-2320-B-038-024 105-2221-E-038-007-MY3 más y más 104-2320-B-424-001) y Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Este manuscrito fue editado por Wallace de edición académica.
Materials
| Bone rongeur | Diener | Friedman | |
| Buprenorphine | Sigma | B-044 | |
| Cefazolin | Sigma | 1097603 | |
| Chloral hydrate | Sigma | C8383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-745 | |
| Electric clippers | Petpro | ||
| 10% formalin | Sigma | F5304 | |
| Germinator dry bead sterilizer | Braintree Scientific | ||
| Iris Forceps | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Iris Scissors | Diener | 9 cm | |
| Iris Scissors STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Micro-scissors-Vannas | HEISS | H-4240 | blade 7mm, 8 cm |
| Mouse brain matrix | World Precision Instruments | ||
| Non-invasive blood pressure system | Muromachi | MK-2000ST | |
| Operating Scissors STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Physiological Monitoring System | Harvard Apparatus | ||
| Razor blades | Ever-Ready | ||
| Stoelting Rodent Warmers | Stoelting | 53810 | Heating pad |
| Suture clip | Stoelting | ||
| Tweezers | IDEALTEK | No.3 | |
| Vetbond | 3M | 15672 | Surgical glue |
| 10-0 suture | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | Sigma | T8877 |
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