Presentato qui è un protocollo per indurre lesioni cerebrali traumatiche diffuse utilizzando un dispositivo a percussione fluida laterale seguito dalla raccolta del contenuto di caecum per l'analisi del microbioma intestinale.
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Articolo metodologico
Indagare sulle alterazioni nel caecum Microbiota dopo una lesione cerebrale traumatica nei topi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Sempre più prove dimostrano che l'asse microbiota-gut-cervello svolge un ruolo importante nella patogenesi delle malattie cerebrali. Diversi studi dimostrano anche che le lesioni cerebrali traumatiche causano cambiamenti al microbiota intestinale. Tuttavia, i meccanismi alla base della regolazione bidirezionale dell'asse cervello-gut rimangono sconosciuti. Attualmente, esistono pochi modelli per studiare i cambiamenti nel microbiota intestinale dopo lesioni cerebrali traumatiche. Pertanto, lo studio presentato combina protocolli per indurre lesioni cerebrali traumatiche utilizzando un dispositivo di percussioni fluide laterale e l'analisi di campioni di caecum in seguito alla lesione per studiare le alterazioni nel microbioma intestinale. Le alterazioni della composizione del microbiota intestinale dopo lesioni cerebrali traumatiche sono determinate utilizzando il sequenziamento 16S-rDNA. Questo protocollo fornisce un metodo efficace per studiare le relazioni tra microrganismi enterici e lesioni cerebrali traumatiche.
Introduzione
La lesione cerebrale traumatica (TBI) è un problema di salute pubblica globale e la principale causa di morte e disabilità nei giovani adulti1,2. TBI causa molti decessi ogni anno, e i sopravvissuti sperimentano una varietà di disabilità fisiche, psichiatriche, emotive e cognitive. Pertanto, la TBI è un pesante fardello per la famiglia e le risorse sociali di un paziente. TBI coinvolge sia la lesione cerebrale primaria che si verifica al momento del trauma e qualsiasi lesioni cerebrali secondarie che sviluppano ore a mesi dopo la lesione iniziale. Lesione cerebrale secondaria è mediata da diverse cascate bioch....
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Protocollo
Tutte le procedure eseguite sono state approvate dal Comitato Sperimentale di Etica Animale dell'Università di Hejiang. Tutti gli strumenti e i materiali utilizzati in chirurgia sono sterili. Il processo di proceudre TBI dura circa 20 minuti.
1. Cura degli animali
- Utilizzare topi C57BL/6J maschi da 5 a 6 settimane (20-25 g di peso) in questo esperimento.
- Mantenere i topi su un ciclo di luce/buio di 12 h/12 h e assicurarsi che ricevano cibo e acqua al libitum. Fornire le stesse quantità di cibo e acqua a entrambi i gruppi farsa e TBI durante lo studio.
- Fai tutti gli sforzi per ridurre al minimo il dolore e il di....
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Risultati
La creazione di TBI è illustrata nella Figura 1. Dopo l'anestesia e la disinfezione, il cuoio capelluto è stato inciso sagittally (Figura 1A). Una craniotomia (3 mm di diametro) è stata trafitta nel cranio sopra la corteccia parietale destra con un trapano elettrico, la dura è stata mantenuta intatta (Figura 1B,C). Una cannula di lesione plastica è stata posta sopra la finestra ossea.......
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Discussione
Presentato qui è un protocollo semplice ed efficiente per determinare i cambiamenti nel microbiota cecale dopo il TBI nei topi. L'induzione di lesioni cerebrali e la raccolta di campioni di contenuto di caecum sono parti critiche del protocollo.
Nonostante i ricercatori abbiano studiato i cambiamenti del microbiota intestinale dopo la TBI, la lesione cerebrale utilizzata in questi studi era CCI-8 e modelli di goccia/impatto indotti9. Tuttavia, il.......
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Dichiarazioni
Gli autori ringraziano sinceramente Baohong Wang per la sua guida tecnica.
Ringraziamenti
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Kit di isolamento del DNA | QIAGEN | 51604 | Per una rapida purificazione del DNA genomico da campioni di feci |
| Servizio di analisi genetica | GENEWIZ | Servizio di analisi genica | |
| Pad riscaldante | Shanghai SAFE Biotech Co. | termoforo | TR-200 |
| Il primo ospedale affiliato, Scuola di Medicina, Dispositivo LFPI iniettore dell'Università | |||
| Virginia Dispositivo LFPI dell'Università del Commonwealth | FP302 | ||
| Micro trapano cranico | RWD Life Science | 78061 | Micro trapano cranico |
| Iodio povidone | Il primo ospedale affiliato, Scuola di Medicina, Università | Iodio Povidone |
Riferimenti
- Cheng, P., et al. Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study. 14, e1002332(2017).
- Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated....
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Ristampe e permessi
