أدوات بسيطة محلية الصنع للتعامل مع ذباب الفاكهة -دروسوفيلا ميلانوجاستر
Summary
وصف هنا هو استخدام العديد من الأدوات محلية الصنع لنقل، والبرد، وقتل كبار البالغين Drosophila، وكذلك لتنظيف قارورة ثقافة الزجاج وجمع البيض. هذه الأدوات هي سهلة لجعل وفعالة إلى حد ما في التعامل مع Drosophila.
Abstract
ذبابة الفاكهة، دروسوفيلا melanogaster، ويستخدم على نطاق واسع على حد سواء في البحوث البيولوجية والتعليم البيولوجيا. التعامل مع الذباب الكبار أمر شائع ولكن من الصعب في الممارسة العملية، كما يطير الذباب الكبار. ويتضح هنا كيفية جعل بعض الأدوات البسيطة والفعالة من حيث التكلفة لمعالجة القضايا الصعبة في التعامل مع دروسوفيلا. يتم إجراء ثقوب في سدادات رغوة ويتم إدراج نصائح ماصة أو المسارات في الثقوب. الذباب ثم تتحرك فقط في اتجاه واحد في تلميح ماصة / قمع التجميع، مما يسمح السيطرة الفعالة على نقل Drosophila الكبار إلى أو الخروج من قارورة. وقد تم تعديل البروتوكولات القائمة للذان بالذباب البارد عن طريق التبريد في الجليد المسحوق ونقلها إلى سطح بارد وصلب من الثلج. يتم تغطية كيس الثلج مع قطعة من الشاش الطبية التي تحافظ على الذباب المعطلة من الماء المكثف عند فحصها تحت مجهر مجسم. وأخيراً يتم قتل الذباب لعدوها وفرزها أو التخلص منها عن طريق التلويح بالميكرولو. كما تم تطوير قفص على شكل زجاجة لجمع البيض، فضلا عن جهاز توفير العمالة والبروتوكول المصاحب لتنظيف قارورة ثقافة الزجاج.
Introduction
ذبابة الفاكهة، دروسوفيلا melanogaster، هو كائن حي نموذجي يستخدم على نطاق واسع في البحوث البيولوجية وتثقيف البيولوجيا لدراسة مجموعة واسعة من المواضيع1،2. المشاكل الأساسية للتعامل مع Drosophila هي نقل البالغين من قارورة إلى قارورة وشل الذباب بحيث تكون أسهل للتعامل معها، كما يمكن لجميع البالغين (باستثناء بعض المتحولين3،4) تطير.
تقليديا ، يقوم الباحث بنقل الذباب من قارورة إلى أخرى عن طريق عقد قنينتين من الفم إلى الفم ، والتنصت على الذباب إلى أسفل أو السماح للذباب أن يطير إلى قارورة أخرى ، ثم فصل وإعادة توصيل كل من قارورة4. ومن الواضح أن هذا يتطلب أن فتح قنينتين بنفس القطر، وأنه من الصعب السيطرة على كمية الذباب المنقولة. وفي الوقت نفسه، وهذا يتطلب أيدي سريعة لإنجاز هذه المهمة، والهروب من الذباب الضال يمكن أن يؤدي إلى مشاكل للمختبر أو الفصول الدراسية. إضافة الذباب البكر الممتاز أو الذباب الذكور إلى الصليب أعدت بالفعل هي مهمة روتينية أخرى في تجارب دروسوفيلا. تقليديا، يجب أن يتم تعطيل الذباب في قارورة الصليب قبل إضافة الذباب إضافية.
يتم التخدير Drosophila الكبار بشكل روتيني عن طريقالأثير، CO 2، أو تقشعر لها الأبدان5. بالمقارنة مع الأثير والتعرض CO 2، تقشعر لها الأبدان هو العامل الأكثر فعالية من حيث التكلفة لشل القصوى Drosophila وأقل ضررا على كل من الذباب والباحثين (وخاصة الطلاب الصغار)6،7. ومع ذلك، الماء الذي يتكثف باستمرار على السطح البارد أو غرفة يبلل الذباب. من الصعب تحديد الأنماط الظاهرية للذباب الرطب، ويمكن أن تصبح بسهولة التالفة أثناء التلاعب8،9. وقد أدى ذلك إلى منع طريقة التبريد من أن تصبح مقبولة على نطاق أوسع.
وقد سبق وصف أدوات لنقل ذبابة وطريقة لتبريد ذبابة10. هنا، يتم الإبلاغ عن تقنية التخدير تقشعر لها الأبدان المعدلة التي هي آمنة وموثوق بها، وممكنة لتجارب دروسوفيلا. كما هو موضح في هذه الورقة هي 1) طرق لقتل البالغين للعد، والفرز، أو التخلص منها، 2) الأجهزة الموفرة للعمالة والبروتوكولات لتنظيف قارورة ثقافة الزجاج، و 3) قفص بسيط لجمع البيض. ويمكن استخدام الأدوات المصممة بسهولة والفعالة من حيث التكلفة الموصوفة هنا لمعالجة القضايا الصعبة المتعلقة بمناولة الذبابة، وقد تم اختبار هذه الأساليب وثبت أنها قوية وموثوق بها وسهلة المنال للباحثين ذوي الخبرة والمبتدئين.
Protocol
Representative Results
Discussion
ويرد في هذه الورقة وصف لبعض الأدوات محلية الصنع للتعامل مع الأنشطة الأساسية التي تنطوي عليها تربية دروسوفيلا وتجريبها. هذه الأدوات بسيطة ولكنها فعالة إلى حد ما. تقريبا، أي مختبر يمكن أن تجعل هذه الأدوات بسهولة، والبحث أو مختبر التدريس لا تحتاج إلى العثور على بديل الجاهزة التي ربما لا…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
اي
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
Riferimenti
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. . Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory Culture of Drosophila. Drosophila Protocols. , (2000).
- Greenspan, R. J. Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).
- Ashburner, M., Thompson, J., Ashburner, M., Wright, T. R. F. The laboratory culture of Drosophila. The genetics and biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).
- Ratterman, D. M., O'Donnell, M. A. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. Tested Studies For Laboratory Teaching. , 259-265 (2003).
- . Culturing techniques for Drosophila Available from: https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf (2019)
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. . Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).
- Artiss, T., Hughes, B. Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging. The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).
- Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments. Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).
- . Egg-laying cages for drosophila Available from: https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17 (2018)
- Roberts, D. B. . Drosophila: a practical approach. , (1998).
- Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. Two devices for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).
- Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).
- Yang, D. . Genetics laboratory investigation. , (2016).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, (2018).
- Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).
