Meyve sinekleri Işlemek için basit ev yapımı Araçlar-Drosophila melanogaster
Summary
Burada açıklanan çeşitli ev yapımı araçların transferi, Chill, ve yetişkin Drosophilaöldürmek, yanı sıra cam kültür şişeleri temizlemek ve yumurta toplamak için kullanılır. Bu araçların yapmak kolaydır ve Drosophila işleme oldukça etkilidir.
Abstract
Meyve sinek, Drosophila melanogaster, yaygın biyolojik araştırma ve biyoloji eğitimi hem de kullanılır. Yetişkin sinekler işleme yetişkin sinek olarak, yaygın ama pratikte zordur. Burada gösterilmiştir nasıl bazı basit ve maliyet-etkili araçlar Drosophilaişleme zor sorunları gidermek için yapmak. Köpük tıpalar delikler yapılır ve Pipet uçları veya huniler delikler yerleştirilir. Sinekler sonra sadece bir yönde pipet ucu/huni montaj içine hareket, Yetişkin Drosophila bir şişe içine veya dışına transfer etkili kontrol sağlar. Mevcut protokoller, ezilmiş buzun içinde serinleyerek ve onları soğuk, sert bir IcePack yüzeyine aktararak serin anestezi yapan sinekler için değiştirildi. IcePack bir stereomikoskop altında incelendiğinde yoğunlaştırılmış sudan sinekler immobilize tutar tıbbi gazlı bez bir parçası ile kaplıdır. Sinekler sonunda sayma ve sıralama veya mikrosallama tarafından atılan için ötenize vardır. Bir şişe şeklinde kafes de yumurta toplamak için geliştirilmiştir, yanı sıra bir işgücü tasarrufu cihazı ve cam kültür şişeleri temizlemek için eşlik eden protokol.
Introduction
Meyve sinek, Drosophila melanogaster, yaygın olarak kullanılan bir model organizmadır biyolojik araştırma ve biyoloji eğitimi konular çeşitli çalışma1,2. Drosophila işleme temel sorunları, tüm yetişkinler (bazı mutantlar dışında3,4) uçabilir, böylece işlemek için daha kolay, böylece şişeye şişe ve sineklerin immobilizasyonu için yetişkin transferi vardır.
Geleneksel olarak, bir araştırmacı transferler iki şişe ağız-ağız tutarak bir şişeden diğerine uçar, aşağı uçar ya da başka bir şişeye kadar uçmak için sinek izin, sonra ayıran ve her iki şişe replugging4. Açıkçası, bu aynı çaplı iki şişe açılması gerektirir, ve transfer uçar miktarını kontrol etmek zordur. Bu arada, bu işi yapmak için hızlı eller gerektirir, ve başıboş sinekler kaçmak laboratuar veya sınıf için sorunlara neden olabilir. İlave bakire sinekler veya erkek zaten hazırlanmış bir haç sinek ekleyerek Drosophila deneyler başka rutin bir iştir. Geleneksel olarak, sinek ekstra sinekler eklenmeden önce çapraz şişede immobilize olmalıdır.
Yetişkin Drosophila , eter, Co2veya soğuk5ile rutin olarak anestezize edilir. Eter ve Co2 pozlama ile karşılaştırıldığında, soğutmak yetişkin Drosophila immobilizing için en uygun maliyetli Ajan ve en az sinekler ve araştırmacılar (özellikle genç öğrenciler)6,7için zararlı. Ancak, soğuk yüzey veya oda sürekli yoğunluk su sinekleri ıslatır. Islak sineklerin fenotiplerini belirlemek zordur ve manipülasyon sırasında kolayca zarar görebilir8,9. Bu, daha yaygın kabul edilmekte olan tüyler ürpertici yöntemi tuttu.
Fly temliki için araçlar ve sinek soğutma için bir yöntem daha önce10açıklanmıştır. Burada, Drosophila deneyler için güvenli, güvenilir ve uygulanabilir bir modifiye tüyler ürpertici anestezi tekniği bildirilmiştir. Ayrıca bu yazıda açıklanan 1), sayma, sıralama veya atma, 2) işgücü tasarrufu cihazları ve cam kültür şişeleri temizlemek için protokoller ve 3) yumurta toplamak için basit bir kafes için yetişkinler öldürmek için yöntemler. Burada açıklanan kolay tasarlanmış ve uygun maliyetli araçlar, sinek elleçleme zor sorunları gidermek için kullanılabilir ve bu yöntemler test edilmiş ve deneyimli ve acemi araştırmacılar için sağlam, güvenilir ve kolay ele olması kanıtlanmıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu yazıda Drosophila yetiştirme ve deneylerinde yer alan temel faaliyetlerin işlenmesi için bazı ev yapımı araçlar açıklanmıştır. Bu araçlar basit ama oldukça etkilidir. Neredeyse, herhangi bir laboratuar kolaylıkla bu araçları yapabilirsiniz, ve bir araştırma veya bir öğretim Laboratuvarı belki yerel olarak mevcut değildir hazır bir alternatif bulmak gerekmez.
Sinek aktarımı en yaygın uygulamadır ve Drosophila deneylerinde zor bir iştir. Ne yaz?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Hiçbiri
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
Riferimenti
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. . Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory Culture of Drosophila. Drosophila Protocols. , (2000).
- Greenspan, R. J. Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).
- Ashburner, M., Thompson, J., Ashburner, M., Wright, T. R. F. The laboratory culture of Drosophila. The genetics and biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).
- Ratterman, D. M., O'Donnell, M. A. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. Tested Studies For Laboratory Teaching. , 259-265 (2003).
- . Culturing techniques for Drosophila Available from: https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf (2019)
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. . Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).
- Artiss, T., Hughes, B. Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging. The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).
- Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments. Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).
- . Egg-laying cages for drosophila Available from: https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17 (2018)
- Roberts, D. B. . Drosophila: a practical approach. , (1998).
- Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. Two devices for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).
- Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).
- Yang, D. . Genetics laboratory investigation. , (2016).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, (2018).
- Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).
