인간 섬유근육 조직을 시각화하기 위해 인산화산 제제를 사용한 마이크로 X선 컴퓨터 단층 촬영 사용
Summary
마이크로 X 선 컴퓨터 단층 촬영은 손상되지 않은 인간 표본에서 3 차원 정보를 얻는 데 효과적이지만 연조직 관찰에 는 성공이 제한적입니다. 인산조영제를 사용하면 이 문제를 해결할 수 있다. 우리는 인간의 섬세한 섬유 근육 조직 (안구 유지 인대)을 검사하기 위해이 조영제를 구현했습니다.
Abstract
수동 해부 및 조직학적 관찰은 인간의 조직을 조사하는 데 사용되는 일반적인 방법입니다. 그러나 수동 해부는 섬세한 구조를 손상시킬 수 있으며, 처리 및 조직학적 관찰은 단면 이미징을 통해 제한된 정보를 제공합니다. 마이크로 X 선 컴퓨터 단층 촬영 (microCT)은 표본을 손상시키지 않고 3 차원 정보를 얻는 효과적인 도구입니다. 그러나, 연조직 부분 분화에 있어 제한된 효율을 나타낸다. 인산화산(PTA)과 같은 조대비 증강제를 사용하면 연조직 대비를 개선하여 이 문제를 해결할 수 있습니다. 우리는 궤도 영역에서 섬세한 구조인 인간 구안성 유지 인대 (ORL)를 조사하기 위해 PTA와 마이크로 CT를 구현했습니다. 이 방법에서, 수확 된 표본은 포르말린에 고정되고, 직렬 에탄올 용액에서 탈수되고, PTA 용액으로 염색된다. 염색 후, 마이크로CT 스캐닝, 3D 재구성 및 분석이 수행됩니다. 피부, 인대 및 근육은이 방법을 사용하여 명확하게 시각화 할 수 있습니다. 시편 크기와 염색 기간은 이 방법의 필수 특징입니다. 적합한 시편 두께는 약 5-7mm였으며, 그 위에 는 공정이 느려졌고, 최적 지속 시간은 5-7일이었고, 그 아래 중앙 지역의 빈 구멍이 가끔 발생했습니다. 절단 시 작은 조각의 위치와 방향을 유지하려면 각 부품의 동일한 부위에 봉제하는 것이 좋습니다. 또한 각 조각을 올바르게 식별하려면 해부학 적 구조의 예비 분석이 필요합니다. 파라필름은 건조를 방지하는 데 사용할 수 있지만 시편 왜곡을 방지하기 위해 주의를 기울여야 합니다. 우리의 다방향 관측은 ORL이 이전에 보고된 바와 같이 실과 같은 섬유가 아닌 연속 플레이트의 다층 메쉬워크로 구성되어 있음을 보여주었습니다. 이 결과는 PTA를 가진 microCT 스캐닝이 인간 조직의 복잡한 구조물 내의 특정 구획을 검토하기 위해 유용하다는 것을 건의합니다. 그것은 암 조직의 분석에 도움이 될 수 있습니다., 신경 조직, 그리고 다양 한 장기, 심장과 간 같은.
Introduction
수동 해부 및 조직학적 관찰은 일반적으로 근육 및 결합 조직과 같은 인간 조직을 검사하는 데 사용됩니다. 그러나 수동 해부는 섬세한 구조를 쉽게 손상시킬 수 있으며 조직학적 관찰은 평평한 단면1,2에대한 제한된 정보를 제공합니다. 따라서 조직을 보다 정확하고 효율적으로 검사하기 위해 개선 된 방법이 필요합니다.
종래의 컴퓨터 단층 촬영(CT)은 일반적으로 임상 실습에 사용되지만 작은 구조2,3을구별하는 능력이 부족하다. 마이크로 X 선 CT (microCT)는 그들을 파괴하지 않고, 작은 구조의 3 차원 (3D) 정보를 얻기위한 효과적인 도구입니다. 그러나, microCT는 조밀한 조직만 명확하게 구상될 수 있기 때문에 한정된 적용이 있습니다; 연조직을 분화하는 데 사용할 수 없습니다. 이러한 한계를 극복하기 위해 염색제에 사용할 수 있다. 인산성산(PTA), 인산모질산 및 루골의 요오드와 같은 대조강화제는 스캐닝 시연조직대비비율을 향상시킨다4,5. 이러한 에이전트를 비교하는 여러 연구는 PTA가 좋은 성능을 발휘하고6,7,8을처리하기 쉽다는 것을 시사한다.
구안성 옹대(ORL)는 궤도 주위의 섬세한 구조이며, 이는 종래의 관측 시 쉽게 손상될 수 있다9. PTA를 조영제로 사용하여 microCT를 사용하여 이 구조에 대한 3D 정보를 검사하고 성공적으로 검색했습니다. 이 방법은 적절한 수정과 함께 심장과 간과 같은 다른 인간 조직에 대한 연구에 적용 할 수 있습니다10,11,12.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 인간 연조직의 검사에서 PTA 준비와 마이크로CT를 구현했습니다. 간단히 말해서, 시편은 며칠 동안 포르말린에서 수확되고 고정되고, 그 다음에 직렬 에탄올 용액에서 탈수됩니다. 포르말린 고정 직후 PTA 용액에 시료를 배치하면 급속한 탈수로 인한 일부 조직 균열이 발생할 수 있습니다. 따라서 PTA 염색 전에 직렬 탈수가 필요합니다. 다음으로, 샘플은 약 1주일 동안 PTA 용액을 사용하여 염?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 연세대학교 의과대학 교수연구보조금(2018-0099)의 지원을 받았습니다. 저자는 연세대학교 의과대학에 시신을 아낌없이 기부해주신 분들께 감사드립니다. 김준호 씨와 방종호 교수님의 기술지원에 감사드립니다(연세대학교 의과대학 외과해부학교육센터 직원). 우리는 또한 이 연구에 사용된 고품질 microCT 스캐닝 시스템에 대한 Genoss Co., Ltd.에 감사드립니다.
Materials
| 12 Tungsto(Ⅵ)phosphoric acid n-hydrate Phosphotungstic acid |
Junsei | 84220-0410 | PTA powder |
| CTvox | Bruker | ver 2.7 | 3D recon software |
| Nrecon | Bruker | ver 1.7.0.4 | Reconstruction software |
| Skyscan | Bruker | 1173 | MicroCT scanner |
| Tconv | Bruker | ver 2.0 | File resizing software |
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