Angiografia por fluorescência para avaliação da perfusão de aneurisma e patência da artéria parental em modelos de aneurisma de ratos e coelhos

Summary

Nós apresentamos um protocolo para avaliar eficientemente a perfusão do aneurysm e a permeabilidade da embarcação do aneurysm do Sidewall nos ratos e nos coelhos, usando a angiografia Video Fluorescein-baseada da fluorescência (FVA). Com um valor preditivo positivo de 92,6%, é um método simples, mas muito eficaz e econômico, sem necessidade de equipamentos especiais.

Abstract

O tratamento do aneurisma cerebral concentra-se em alcançar a oclusão completa, bem como preservar o fluxo sanguíneo na artéria mãe. O sódio da fluoresceína e o verde do do indocyanine são usados para permitir a observação do estado da circulação sanguínea e da perfusão da embarcação, respectivamente. O objetivo deste estudo é aplicar a FVA para verificar o fluxo sanguíneo em tempo real, o estado de perfusão dos vasos e a oclusão de aneurismas após a indução de aneurismas laterais em coelhos e ratos, bem como validar o procedimento nessas espécies.

Vinte aneurismas do Sidewall foram criados em 10 coelhos suturando uma bolsa arterial descelularizados da embarcação na artéria carotídea de um coelho fornecedor. Além disso, 48 aneurismas de parede lateral microcirúrgica foram criados em 48 ratos. Durante o seguimento em um mês após a criação, o complexo de artéria/aneurisma dos pais foi dissecado e a FVA foi realizada por meio de uma injeção intravenosa de fluoresceina (10%, 1 mL) por meio de cateterismo da veia orelha em coelhos e uma catherização da veia femoral em ratos. Os aneurismas foram então colhidos, e a patência foi avaliada macroscopicamente.

Macroscopicamente, 14 dos 16 aneurismas em coelhos não indicaram perfusão residual da artéria parental com luminae totalmente oclusada, porém 11 (79%) foram detectados pelo FVA. Quatro aneurismas foram excluídos devido a problemas técnicos. Em ratos, a perfusão de aneurisma residual foi observada macroscopicamente em 25 dos 48 casos. Dos 23 sem evidência macroscópica de perfusão, a FVA confirmou a incidência de 22 aneurismas (96%). Não houve eventos adversos associados à FVA. A fluoresceina é facilmente aplicável e nenhum equipamento especial é necessário. É um método seguro e extremamente efetivo para avaliar a integridade da artéria parental e a permeabilidade do aneurisma/perfusão residual em um ambiente experimental com coelhos e ratos. FVA usando fluoresceina como um agente de contraste parece ser eficaz no controle da permeabilidade dos aneurismas e do vaso subjacente e pode até mesmo ser adaptado para a cirurgia de bypass.

Introduction

A evidência do obliteração completo do aneurysm e da integridade da artéria do pai é da importância máxima na cirurgia do aneurysm. Existem várias opções para confirmar a permeabilidade da artéria parental e a oclusão do aneurisma, como a ultrassonografia Doppler, a angiografia cerebral convencional (DSA), a angiografia por tomografia computadorizada (CTA) ou a angiografia por ressonância magnética (ARM)^{1, 2}. no entanto, estes são métodos caros e demorados, que muitas vezes não estão disponíveis em um ambiente de laboratório. Além disso, podem ter efeitos secundários relevantes, tais como a exposição à radiação ou a necessidade de sedação adicional de animais experimentais para evitar artefactos de movimento.

Com um número crescente de novos dispositivos endovasculares emergentes, há uma necessidade consecutiva de testes pré-clínicos de tais dispositivos. No entanto, esses estudos muitas vezes dependem de análise post-mortem (por exemplo, macro patologia e histologia) e falta de informações sobre a perfusão dinâmica. Além disso, para o pesquisador pode ser crucial obter informações imediatas e confiáveis durante um procedimento cirúrgico experimental. A angiografia por fluorescência é um custo-eficaz e fácil de executar a técnica de visualização^1,3,4.

Como tal, a angiografia video do verde do do indocyanine (ICG) é usada frequentemente em procedimentos Neurosurgical clínicos e extensivamente foi estudada^5,6. A angiografia video da Fluorescein (FVA) é uma técnica alternativa, com a vantagem adicional de criar um sinal da fluorescência que esteja dentro da escala do comprimento de onda da visão humana, e possa assim ser visto pelo olho despido sem uma câmera infravermelha prolongada do espectro ⁷. a angiografia video da Fluorescein é usada menos frequentemente na cirurgia cerebrovascular clínica e os relatórios em FVA em ajustes experimentais são escassos^1,4.

O objetivo deste relato é demonstrar a viabilidade e o escopo das aplicações de FVA na pesquisa cerebrovascular pré-clínica de ratos e coelhos.

Protocol

Os roedores foram alojados em uma instalação do cuidado animal e os experimentos foram revistos e aprovados pelo Comitê para o bem-estar animal na Universidade de Berna, Switzerland (seja 108/16) e (BE65/16). Todos os animais foram mantidos em uma dieta de laboratório padrão com acesso livre à comida e água. Todos os experimentos com animais foram conduzidos cuidadosa consideração dos 3Rs (reposição, redução e refinamento). Dez coelhos fêmeas da Nova Zelândia branca e 48 ratos Wistar machos foram incluído…

Representative Results

A frequência cardíaca e a pressão arterial foram monitoradas durante a cirurgia. A frequência cardíaca média foi de 193/min em coelhos e 196/min em ratos. O peso corporal dos coelhos variou de 3,05 a 40, 5kg, e os ratos pesaram 335-690 g. Pudemos realizar FVA em oito dos dez coelhos (Figura 1). Quatro examinações do aneurysm em dois coelhos não foram gravadas com a câmera devido às dificuldades técnicas. Não foram relatadas dificuldades técnicas envo…

Discussion

O FVA é um método promissor e não complicado para examinar vasos em roedores e pode ser realizado com dispositivos comerciais e equipamentos de prateleira. FVA pode ser executado durante toda a cirurgia onde a avaliação intraoperativa da integridade da embarcação é necessária enquanto os vasos precisam a dissecção apropriada primeiramente.

Os autores preferiram a injeção venosa à injeção arterial devido ao risco mais baixo de eventos inadvertidos tais como a infecção, a isque…

Materials

For rabbits
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter	Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera	Sony NEX-5R
Catheter	22G Vasofix Safety
Disinfictant
Fluorescein sodium	Fluorescein Faure 10%
Glas plate
Green filter	Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Infusion pump	Perfusor Secura
Ketamine hydrochloride			any generic products
Needle	25G
Oxygen
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments			micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope	OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml, 50ml
Tape
Three-way-stopcock
Torch light
Xylazin			any generic products
For rats
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter	Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera	Sony NEX-5R
Disinfictant
Fluorescein sodium	Fluorescein Faure 10%
Green filter	Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Isoflurane
Ketamine hydrochloride			any generic products
Medetomidine hydrochloride			any generic products
Needle	25G
Oxygen
Plate
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments			micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope	OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml
Tape
Torch light