Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias
Summary
O protocolo atual descreve métodos para estabelecer modelos paciente-derivados do xenograft (PDX) e linhas de célula cancerosas preliminares das amostras cirúrgicas do cancro gastric. Os métodos fornecem uma ferramenta útil para o desenvolvimento de drogas e pesquisa de biologia do câncer.
Abstract
O uso de modelos pré-clínicos para avançar nosso entendimento da biologia tumoral e investigar a eficácia dos agentes terapêuticos é fundamental para a pesquisa do câncer. Embora existam muitas linhas celulares de câncer gástrico estabelecidas e muitos modelos de camundongo transgênicos convencionais para pesquisas pré-clínicas, as desvantagens desses modelos in vitro e in vivo limitam suas aplicações. Porque as características destes modelos mudaram na cultura, não mais modelo a heterogeneidade do tumor, e suas respostas não puderam prever respostas nos seres humanos. Assim, modelos alternativos que melhor representem a heterogeneidade tumoral estão sendo desenvolvidos. Os modelos paciente-derivados do xenograft (PDX) preservam a aparência histologic de pilhas de cancro, mantêm a heterogeneidade intratumoral, e refletem melhor os componentes humanos relevantes do microambiente do tumor. Entretanto, toma geralmente 4-8 meses para desenvolver um modelo de PDX, que seja mais longo do que a sobrevivência esperada de muitos pacientes gastric. Por esta razão, estabelecer linhas de células cancerosas primárias pode ser um método complementar eficaz para estudos de resposta a medicamentos. O protocolo atual descreve métodos para estabelecer modelos de PDX e linhas de célula cancerosas preliminares das amostras cirúrgicas do cancro gastric. Esses métodos fornecem uma ferramenta útil para o desenvolvimento de drogas e pesquisa de biologia do câncer.
Introduction
O câncer gástrico é o quinto câncer mais comum em todo o mundo e a terceira causa principal de morte por câncer. Em 2018, mais de 1 milhão casos novos de câncer gástrico foram diagnosticados globalmente, e cerca de 783.000 pessoas foram mortas por esta doença1. A incidência e a mortalidade do câncer gástrico permanecem muito elevadas nos países asiáticos do nordeste2,3. Apesar de avanços significativos no campo da terapêutica oncológica, o prognóstico de pacientes com câncer gástrico avançado permanece pobre, com uma taxa de sobrevida de cinco anos de aproximadamente 25%4,5,6, 7,. Assim, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para o câncer gástrico
O tratamento do câncer gástrico é desafiador por causa de sua alta heterogeneidade8,9. Assim, a questão de como abordar os desafios da heterogeneidade tumoral para realizar a medicina de precisão é fundamental para a pesquisa do câncer. Os modelos in vitro e in vivo desempenham papéis cruciais na elucidação dos mecanismos heterogêneos e da biologia do câncer gástrico. Entretanto, embora existam inúmeras linhagens celulares de câncer gástrico e muitos modelos convencionais de camundongo transgênico para pesquisas pré-clínicas, as desvantagens desses modelos limitam suas aplicações10. Porque as características destes modelos mudaram na cultura, não mais modelo a heterogeneidade do tumor, e suas respostas não puderam prever respostas nos seres humanos11. Essas questões limitam severamente a possibilidade de identificar subgrupos de pacientes oncológicos que responderão a medicamentos direcionados. A cultura de curto prazo de tumores primários fornece uma maneira relativamente rápida e personalizada para investigar propriedades farmacológicas anticâncer, que provavelmente será a marca registrada do tratamento de câncer personalizado.
Os xenoenxertos derivados do paciente (PDXs) são preferidos como um modelo pré-clínico alternativo para o perfil de resposta à droga12. Além disso, os modelos PDX oferecem uma ferramenta poderosa para o estudo da iniciação e progressão do câncer13,14. Os modelos de PDX preservam a aparência histologic de pilhas de cancro, mantêm a heterogeneidade intratumoral, e refletem melhor os componentes humanos relevantes do microambiente do tumor15,16. No entanto, a limitação dos modelos PDX amplamente utilizados é a baixa taxa de sucesso para estabelecer e propagar serialmente tumores sólidos humanos. Neste estudo, são descritos métodos decentemente bem-sucedidos para o estabelecimento de modelos PDX e linhas celulares primárias.
Protocol
Representative Results
Discussion
O câncer gástrico é uma doença agressiva com opções terapêuticas limitadas; assim, os modelos de câncer gástrico tornaram-se um recurso crítico para viabilizar estudos funcionais de pesquisa com tradução direta para a clínica4,8,17. Aqui, nós descrevemos os métodos e o protocolo de estabelecer modelos do cancro gastric PDX e linhas de pilha preliminares. É importante ressaltar que as características morfológica…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (81572392); o programa-chave nacional de pesquisa e desenvolvimento da China (2016YFC1201704); Tip-Top talentos científicos e técnicos inovadores da juventude do programa de apoio especial de Guangdong (2016TQ03R614).
Agradecemos especificamente Guangzhou Sagene Biotech Co., Ltd. para ajudar na preparação das figuras.
Materials
| 40 μm Cell Strainer | Biologix, Shandong, China | 15-1040 | |
| Biological Microscope | OLYMPUS, Tokyo, Japan | OLYMPUS CKX41 | |
| Centrifuge | Eppendorf, Mittelsachsen, Germany. | 5427R | |
| CO2 Incubator | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology, Shanghai, China | L40601 | |
| Electro-Thermostatic Water Cabinet | Yiheng, Shanghai, China | DK-8AXX | |
| Fetal bovine serum | Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada | 86150040 | |
| Isoflurane | Baxter, China | CN2L9100 | |
| Live Tissue Kit Cryo Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2601 | |
| Live Tissue Thaw Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen, Beijing, China | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilin&streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 15140122 | |
| Red blood cell lysis buffer | Solarbio, Beijing, China | R1010 | |
| RPMI-1640 medium | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 8118367 | |
| Surgical Suture Needles with Thread | LingQiao, Ningbo, China | 3/8 arc 4×10 | |
| Tissue-processed molds and auxiliary blades | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2603 | |
| Trypsin-EDTA | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 2003779 | |
| Type 1 collagenase | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 17100017 |
Riferimenti
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