गैस्ट्रिक कैंसर रोगी व्युत्पन्न Xenograft मॉडल और प्राथमिक सेल लाइनों की स्थापना
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल शल्य गैस्ट्रिक कैंसर के नमूनों से रोगी व्युत्पन्न xenograft (PDX) मॉडल और प्राथमिक कैंसर सेल लाइनों स्थापित करने के लिए तरीकों का वर्णन करता है। तरीकों दवा के विकास और कैंसर जीव विज्ञान अनुसंधान के लिए एक उपयोगी उपकरण प्रदान करते हैं.
Abstract
ट्यूमर जीव विज्ञान की हमारी समझ अग्रिम और चिकित्सीय एजेंटों की प्रभावकारिता की जांच करने के लिए पूर्व नैदानिक मॉडल का उपयोग कैंसर अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण है। हालांकि वहाँ कई स्थापित गैस्ट्रिक कैंसर सेल लाइनों और पूर्व नैदानिक अनुसंधान के लिए कई पारंपरिक ट्रांसजेनिक माउस मॉडल हैं, इन इन विट्रो में और विवो मॉडल में नुकसान उनके अनुप्रयोगों की सीमा. क्योंकि इन मॉडलों की विशेषताओं संस्कृति में बदल गया है, वे अब मॉडल ट्यूमर विषमता, और उनकी प्रतिक्रियाओं मनुष्यों में प्रतिक्रियाओं की भविष्यवाणी करने में सक्षम नहीं किया गया है. इस प्रकार, वैकल्पिक मॉडल है कि बेहतर ट्यूमर विषमता का प्रतिनिधित्व विकसित किया जा रहा है. रोगी व्युत्पन्न xenograft (PDX) मॉडल कैंसर कोशिकाओं के हिस्टोलॉजिक उपस्थिति की रक्षा, intratumoral विषमता बनाए रखने, और बेहतर ट्यूमर microenvironment के प्रासंगिक मानव घटकों को प्रतिबिंबित. हालांकि, यह आमतौर पर 4-8 महीने लगते हैं एक PDX मॉडल है, जो कई गैस्ट्रिक रोगियों की उम्मीद अस्तित्व से अधिक है विकसित करने के लिए. इस कारण से, प्राथमिक कैंसर सेल लाइनों की स्थापना दवा प्रतिक्रिया अध्ययन के लिए एक प्रभावी पूरक विधि हो सकती है. वर्तमान प्रोटोकॉल शल्य गैस्ट्रिक कैंसर के नमूनों से PDX मॉडल और प्राथमिक कैंसर सेल लाइनों स्थापित करने के लिए तरीकों का वर्णन करता है. इन तरीकों दवा के विकास और कैंसर जीव विज्ञान अनुसंधान के लिए एक उपयोगी उपकरण प्रदान करते हैं.
Introduction
गैस्ट्रिक कैंसर दुनिया भर में पांचवें सबसे आम कैंसर और कैंसर की मौत का तीसरा प्रमुख कारण है। 2018 में, गैस्ट्रिक कैंसर के 1,000,000 से अधिक नए मामलों का विश्व स्तर पर निदान किया गया, और एक अनुमान के अनुसार 783,000 लोग इस बीमारी से मारे गए1. पूर्वोत्तर एशियाई देशों में गैस्ट्रिक कैंसरकी घटना और मृत्यु दर बहुत अधिक बनी हुईहै. कैंसर चिकित्सा के क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रगति के बावजूद, उन्नत गैस्ट्रिक कैंसर के साथ रोगियों का पूर्वानुमान गरीब रहता है, लगभग 25%4, 5,6के पांच साल के जीवित रहने की दरकेसाथ, 7,. . इस प्रकार, गैस्ट्रिक कैंसर के लिए नई चिकित्सीय रणनीतियों के विकास के लिए एक तत्काल आवश्यकता है
गैस्ट्रिक कैंसर का उपचार इसकी उच्च विषमता8,9के कारण चुनौतीपूर्ण है . इस प्रकार, कैसे ट्यूमर विषमता की चुनौतियों का समाधान करने के लिए सटीक दवा का एहसास करने का सवाल कैंसर अनुसंधान के लिए केंद्रीय है. इन विट्रो और विवो मॉडल में विषमांगी तंत्र और गैस्ट्रिक कैंसर के जीव विज्ञान को स्पष्ट करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। हालांकि, हालांकि वहाँ कई गैस्ट्रिक कैंसर सेल लाइनों और पूर्व नैदानिक अनुसंधान के लिए कई पारंपरिक ट्रांसजेनिक माउस मॉडल हैं, इन मॉडलों के नुकसान उनके अनुप्रयोगों की सीमा10. क्योंकि इन मॉडलों की विशेषताओं संस्कृति में बदल गया है, वे अब मॉडल ट्यूमर विषमता, और उनकी प्रतिक्रियाओं के लिए मानव में प्रतिक्रियाओं की भविष्यवाणी करने में सक्षम नहीं किया गया है11. इन मुद्दों को गंभीर रूप से कैंसर रोगियों है कि लक्षित दवाओं का जवाब देंगे के उपसमूहों की पहचान करने की संभावना को सीमित. प्राथमिक ट्यूमर की अल्पकालिक संस्कृति एक अपेक्षाकृत तेजी से और व्यक्तिगत तरीका कैंसर औषधीय गुणों की जांच करने के लिए प्रदान करता है, जो संभावना व्यक्तिगत कैंसर के इलाज की पहचान होगी.
रोगी व्युत्पन्न xenografts (PDXs) दवा प्रतिक्रिया रूपरेखा12के लिए एक वैकल्पिक पूर्व नैदानिक मॉडल के रूप में पसंद कर रहे हैं. इसके अलावा, PDX मॉडल दीक्षा और कैंसर 13,14की प्रगति का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करते हैं. पीडीएक्स मॉडल कैंसर कोशिकाओं के हिस्टोलॉजिक रूप को संरक्षित करते हैं, इंट्राट्यूमरल विषमता को बनाए रखते हैं, और बेहतर ट्यूमर माइक्रोएनवायरनमेंट15,16के प्रासंगिक मानव घटकों को प्रतिबिंबित करते हैं। हालांकि, व्यापक रूप से इस्तेमाल किया PDX मॉडल की सीमा की स्थापना और क्रमिक मानव ठोस ट्यूमर प्रचार के लिए कम सफलता दर है. इस अध्ययन में, PDX मॉडल और प्राथमिक सेल लाइनों की स्थापना के लिए शालीनता से सफल तरीकों का वर्णन कर रहे हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
गैस्ट्रिक कैंसर सीमित चिकित्सीय विकल्पों के साथ एक आक्रामक बीमारी है; इस प्रकार गैस्ट्रिक कैंसर के मॉडल क्लिनिक4,8,17में प्रत्यक्ष अनुवाद के साथ कार्यात्मक अनुसंधान…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81572392) द्वारा समर्थित किया गया था; चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2016YFC1201704); गुआंग्डोंग विशेष सहायता कार्यक्रम (2016TQ03R614) के टिप-टॉप वैज्ञानिक और तकनीकी अभिनव युवा प्रतिभा।
हम विशेष रूप से आंकड़ों की तैयारी में सहायता के लिए ग्वांग्झू Sagene बायोटेक कं, लिमिटेड धन्यवाद.
Materials
| 40 μm Cell Strainer | Biologix, Shandong, China | 15-1040 | |
| Biological Microscope | OLYMPUS, Tokyo, Japan | OLYMPUS CKX41 | |
| Centrifuge | Eppendorf, Mittelsachsen, Germany. | 5427R | |
| CO2 Incubator | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology, Shanghai, China | L40601 | |
| Electro-Thermostatic Water Cabinet | Yiheng, Shanghai, China | DK-8AXX | |
| Fetal bovine serum | Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada | 86150040 | |
| Isoflurane | Baxter, China | CN2L9100 | |
| Live Tissue Kit Cryo Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2601 | |
| Live Tissue Thaw Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen, Beijing, China | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilin&streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 15140122 | |
| Red blood cell lysis buffer | Solarbio, Beijing, China | R1010 | |
| RPMI-1640 medium | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 8118367 | |
| Surgical Suture Needles with Thread | LingQiao, Ningbo, China | 3/8 arc 4×10 | |
| Tissue-processed molds and auxiliary blades | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2603 | |
| Trypsin-EDTA | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 2003779 | |
| Type 1 collagenase | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 17100017 |
Riferimenti
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