כאן, אנו מדגימים כיצד להגדיר וולט-אמפר-מונה זול עם תדר פלט מיתכנת שניתן להשתמש בו עם המקל מסחרית זמין אלקטרודות עבור transepi, מדידות התנגדות חשמלית החשמל.
שימוש בטרספפיתל/ההתנגדות החשמלית של שנות ה-80 לקביעת שליטה וחדירות במערכות מודל מבחנה. ברוב המקרים, אלקטרודות המקל משמשות כדי לקבוע את העכבה החשמלית בין התא העליון והתחתון של מערכת להוסיף מסנן התרבות התא המכיל monolayers הסלולר. קרום מסנן מאפשר לתאים לדבוק, הקיטוב, ואינטראקציה על ידי בניית צמתים הדוקים. טכניקה זו תוארה עם מגוון של קווי תאים שונים (למשל, תאים של מחסום הדם-מוח, מחסום נוזלי שדרתי דם, או מערכת העיכול והריאות). התקני המדידה העגלון ניתן להשיג בקלות מספקים שונים ציוד מעבדה. עם זאת, יש פתרונות חסכוניים יותר ומותאמים להתאמה אישית, אם אתה מקבל הרכבה עצמית מתאימה. המטרה הכוללת של פרסום זה היא להגדיר מכשיר אמין עם תדר פלט ניתן לתכנות, כי יכול לשמש עם המקל מסחרית המקלות זמין עבור מדידה הטיר.
תאים אפיתל ואנדותל לתפקד כגבולות הסלולר, הפרדת הצדדים פסגה והצלעות של הגוף. אם הם מקושרים באמצעות צמתים הדוקים, החומר הפסיבי דיפוזיה דרך החללים הפרתאיים מוגבל1, והתוצאה היא היווצרות של מכשול חדיר בררני. כמה מערכות מחסום מלאכותי פותחו2 שימוש בתאי מיקרו-כלי (hbmec, מחסום דם-מוח3,4,5,6,7), מקלעת דמית תאים אפיתל (hibcpp/pcpec דם-שדרתי מחסום נוזלשדרה 8,9,10,11,12,13,14), המעי הגס אדנוקרצינומה תאים (caco-2, מודלים במערכת העיכול15), או קווי נשימה/מכתשי תא (מודליםריאתי16,17). מערכות אלו מורכבות בדרך כלל תאים הגדלים במונאולייר על ממברנות חדירות (כלומר, מערכות להוסיף מסנן) כדי לאפשר גישה לצדדים הקודקוד והבזלת צלעות. חשוב ששלמות מערכת המודל תתאים לתנאים הvivo. מכאן, טכניקות מספר פותחו כדי לנתח את תפקוד המכשול על ידי מדידת הפצת הפראותאי של תרכובות מעקב על פני שכבת התא. חומרים אלה כוללים הקרינה הדו, אלבומין מתויג בצבע, inulin מתויג FITC, או לצבוע-התווית דקטרנס2. עם זאת, צבעים כימיים יכולים להפוך תאים שמיש לניסויים נוספים. לניטור מערכות המכשול באופן בלתי פולשני, מדידת מערכת ההתנגדות החשמלית של הטראנס-מרחבי הרשת ניתן להשתמשב -2,18,19. בגלל מערכות האלקטרודות דו קוטבית מושפעים העכבה אלקטרודות האלקטרודה בממשק אלקטרודה-אלקטרוליט, מדידות הטארבלפולהם משמשים בדרך כלל כדי להתגבר על הגבלה זו20. הטכניקה התחתונה היא חישה 4-טרמינל (4T) שתוארה לראשונה בשנת 1861 על ידי ויליאם תומסון (לורד קלווין)21. בקיצור, הזרם מוזרק על-ידי זוג אלקטרודות הנושאות את הזרם הנוכחי, בעוד זוג אלקטרודות לחישה במתח השני משמש למדידת מדידת המתח20. כיום, כביכול אלקטרודות המקל מורכב מזוג אלקטרודות כפולות, כל אחד המכיל גלולה כסף/כסף-כלוריד למדידת מתח ואלקטרודות כסף עבור עובר הנוכחי2. העכבה החשמלית נמדדת בין פסגה לבין תא בזלת צלעות עם שכבת התא בין (איור 1). אות גל מרובע בתדר של בדרך כלל 12.5 Hz מוחל על האלקטרודות החיצוניות ואת הזרם הסירוגין המתקבל (AC) נמדד. בנוסף, הירידה הפוטנציאלית לאורך שכבת התא נמדדת על-ידי זוג האלקטרודה השני (הפנימי). העכבה החשמלית מחושבת לאחר מכן על פי חוק אוהם. ערכי העגלון מנורממים על-ידי הכפלת אזור משטח העכבה ושכבת התאים ומבוטאים בדרך כלל כ-Ω ∙ ס”מ2.
ישנן מערכות בהן תאים ואלקטרודות מסודרים בצורה מתוחכמת יותר, אך מבוססים גם על עקרון המדידה של 4T וניתן להשתמש בהם עם התקני מדידה זהים. מערכות אנדוhm, למשל, שבו מוכנס המסנן, מכילים תא וכובע עם זוג אלקטרודות קונצנטריים עם מבנה זהה כמו המקל אלקטרודה. צורת האלקטרודות מאפשרת זרימה אחידה יותר של צפיפות הזרם לאורך הקרום, ובכך מפחיתה את הווריאציה בין הקריאות. אפילו יותר מורכב (אבל גם יותר מדויק) הוא חדר Ussing, שבו שכבת התאים מפריד בין שני תאים מלאים בתמיסה של המצלצל22. החדר עצמו יכול להיות מתודלק בחמצן, CO2, או N2, ו מעורבב או שיושלם עם חומרים ניסיוניים. כאשר מתבצעת העברת יונים לרוחב שכבת התא, ניתן למדוד הבדל פוטנציאלי על-ידי שתי אלקטרודות לחישה במתח בסמוך לרקמה. מתח זה מבוטל על-ידי שני אלקטרודות נוכחיות הנושאות בסמוך לשכבת התא. הזרם הנמדד יעניק לאחר מכן את הובלת הרשת וההתנגדות הטרנססיפיתית, המשקפת את שלמות המכשול, ניתן לקבוע22. ניתן גם ליישם את מדידת העגלון על מערכות גוף-על-שבב המייצגות מודלים של רקמת מכשול23,24. מערכות אלה מחקות בתנאים vivo של התאים ולעתים קרובות מורכב ממספר סוגים של תאים, מוערמים אחד מעל השני בשכבות.
הפרוטוקול הבא מסביר כיצד להגדיר voltammeter חסכוני ואמין עם תדר פלט ניתן לתיכנות אשר מייצרת לא הבדלים משמעותיים מבחינה סטטיסטית לעומת מערכות מדידה זמין מסחרית.
לפני voltammeter ביצוע עצמי ניתן להשתמש בשגרה יומית, זה חיוני כדי לבדוק את המכשיר לתפקוד תקין. במקרה שלנו, חצי שעה של תנודות של 40 ms (12.5 Hz) היה מתוכנת, אבל הזמן תנודות יעיל התברר להיות 60 ms (16.7 Hz). חוסר דיוק זה של פולט הזמן של microcontroller לא היתה לגילוי השפעה על מדידות הטיר. ייתכן שיהיה עדיף לקבוע את התדר המ…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים להררמן ליגגאייר ולמרווין בנדה על העצות המומחים שלהם בתחום האלקטרוטכניקה והאינפורמטיקה.
120 kOhm resistor | General (generic) equipment | ||
Banana plug cables | General (generic) equipment | ||
Cables | General (generic) equipment | ||
Chopstick electrode | Merck Millicell | MERSSTX01 | |
Chopstick electrode (alternative) | WPI World Precision Instruments | STX2 | |
Crimping tool | General tool | ||
Digispark / ATtiny85 | AZ-Delivery Vertriebs GmbH | Digispark Rev.3 Kickstarter | |
DMEM:F12 | Gibco (Thermo Fisher) | 31330038 | |
Fetal calf serum (FCS)/Fetal Bovine Serum (FBS) | Life Technologies | 10270106 | |
Filter inserts 3µm translucent | Greiner Bioone | 662631 | |
HIBCPP | Hiroshi Ishikawa / Horst Schroten | ||
Insulation stripper | General tool | ||
Luster terminal | General (generic) equipment | ||
Oscilloscope | HAMEG | Digital Storage Scope HM 208 | |
Plotter | PHILIPS | PM 8143 X-Y recorder | |
Software Arduino | https://www.arduino.cc | Arduino 1.8.9 | |
Soldering iron | General tool | ||
Soldering lugs | General (generic) equipment | ||
Telephone cable with RJ14 (6P4C) connector | General (generic) equipment | ||
Test resistor | Merck Millicell | MERSSTX04 | |
True-RMS multimeters | VOLTCRAFT | VC185 | |
USB charger | General (generic) equipment | ||
USB extension cord | General (generic) equipment | ||
Voltohmmeter for TEER measurement | WPI World Precision Instruments | EVOM | |
Voltohmmeter for TEER measurement (alternative) | Merck Millicell | ERS | |
Wire end ferrules | General (generic) equipment |