Un modello di ferreta di lesioni cerebrali late preterm ipossiche-ischemiche sensibilizzate all'infiammazione

Summary

Il metodo descrive lesioni cerebrali ipossichee-ischemiche e iperossiche ipossiche-iposiche e iperossiche nel furetto P17 per modellare la complessa interazione tra infiammazione prolungata e lesioni cerebrali ossidative sperimentate in un certo numero di neonati pretermine tardivi.

Abstract

Vi è una continua necessità di modelli clinicamente rilevanti di infezione peritale e ipossia-ischemia (HI) in cui testare gli interventi terapeutici per i neonati con la sequela neurologica della prematurità. I furetti sono candidati ideali per modellare il cervello umano pretermine, in quanto nascono lissencefalico e sviluppano cervelli gyrencephalic postnatally. Alla nascita, lo sviluppo del cervello del furetto è simile a un feto umano di 13 settimane, con 17 kit postnatali (P) considerati equivalenti a un neonato a 32-36 settimane di gestazione. Descriviamo un modello di lesione nel furetto P17, dove la somministrazione di lipopolioaccharide è seguita da ischemia cerebrale bilaterale, ipossia e iperossia. Questo simula la complessa interazione di infiammazione prolungata, ischemia, ipossia, e lo stress ossidativo sperimentato in un certo numero di neonati che sviluppano lesioni cerebrali. Gli animali feriti mostrano una serie di gravità grave delle lesioni, con cambiamenti morfologici nel cervello, tra cui restringimento di più gyri corticali e solci associati. Gli animali feriti mostrano anche un rallentamento dello sviluppo dei riflessi, una velocità di locomozione più lenta e variabile in una passerella automatizzata e una diminuzione dell'esplorazione in un campo aperto. Questo modello fornisce una piattaforma in cui testare le terapie putative per i neonati con encefalopatia neonatale associata a infiammazione e HI, studiare i meccanismi di lesione che influenzano lo sviluppo corticale e studiare le vie che forniscono resilienza animali inalterati.

Introduction

Vi è un continuo bisogno di modelli animali di grandi dimensioni che riflettano la fisiopatologia della prematurità e dell'ipossia-ischemia perinata in cui è possibile testare gli interventi terapeutici per i neonati. Nel 2017, il 9,93% dei 382.726 neonati nati negli Stati Uniti sono nati prima di termine, e l'84% di questi neonati sono nati tra 32 e 36 settimane di gestazione¹. Nei neonati prematuri, l'esposizione perinatale a infezioni o infiammazioni è comune, dove l'attivazione immunitaria materna dovuta a patogeni virali o batterici può avviare il lavoro pretermine. Postnatalmente, i neonati pretermine sono ad alto rischio di sepsi di esor....

Protocol

Le procedure sono state eseguite in conformità con la Guida NIH per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e come parte di un protocollo approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Washington.

1. Preparazione e amministrazione LPS

NOT: Fare riferimento alla Figura 1 per una sequenza temporale delle procedure.

1. Prima di iniziare la procedura, sigillare, sterilizzare e autoclave tutti gli strumenti chirurgici e tende chirurgiche. Preparare farmaci preoperatori in fiale sterili. Calcolare la portata ne....

Results

Di 34 animali (n - 18 maschi, n - 16 femmine) provenienti da sei cucciolate esposte all'insulto, otto animali (24%; n - 4 maschi, n - 4 femmine) sono morti durante il secondo periodo di ipossia (n . 5), durante la gestione della temperatura (n ) o durante la notte dopo l'insulto (n . 1). Nel gruppo ferito, nove dei 26 sopravvissuti (35%) aveva visibile lesione lorda. Cinque animali (n - 5 maschi) hanno avuto lesioni moderate, e quattro animali (n 2 maschi, n - 2 femmine) hanno avuto gravi lesioni, definite rispettivament.......

Discussion

A causa delle somiglianze fisiche e di sviluppo condivise tra il cervello dei furetti e il cervello umano, il furetto viene sempre più utilizzato per modellare lesioni cerebrali sia adulte che dello sviluppo. ^8,9,10,11,12. Tuttavia, la ricerca fino ad oggi suggerisce che il cervello del furetto è sia resistente alle lesioni iniziali che ad alta plastica, con d.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
80% Ossigeno	Praxair
9% Ossigeno	Praxair
Protezione da banco assorbente	Kimtech	7546
Passerella automatizzata	Noldus
Betadine scrub
Bupivacaine	Patterson Veterinario	07-888-9382
Calibri a base di buprenorfina
per	la misurazione SRA	ME-CAL-FP-200	Gamma 200 mm, risoluzione 0,01 mm
Spugna di garza di cotone	Fisher Scientific	22028556
Emostatico curvo	Roboz	RS-7101
Pinze curve	Precision Instruments	501215
Emostatico curvo per sutura	Roboz	RS-7111
Software di tracciamento Ethovision	Noldus
Lubrificante per gli occhi	Rugby	NDC 0536-1970-72
Furetti (Mustela putorius furo)	Marshall Biosciences		Outbred (nessun ceppo specifico)
Formalina	Fisher Scientific	SF100-4	10% (tampone fosfato/certificato)
Tagliacapelli	Siringhe	GMT175N
	BD	329461	0,3 cc 3 mm 31 G
Isoflurano	Piramal	66794-017-25
Lidocaina	Patterson Veterinario	07-808-8202
Elenco LPS	Biologico	LPS Ultrapuro #423
Sensore di ossigeno	BW Allarme gas	GAXT-X-DL-2
Pentobarbital
Camera in plastica	Tellfresh	1960	10 L; 373 x 270 x 135 mm3
Soluzione salina, 0,9%	Hospira	RL-4492
Lama per bisturi	Integra Miltex	297
Manico per bisturi	World Precision Instruments	500236	#3, 13 cm
Sutura sterile	Fine Science Tools	18020-50	Seta intrecciata, applicatore
clip chirurgiche	Fine Science Tools	12020-09
Dispositivo di rimozione delle clip chirurgiche	Fine Science Tools	12023-00
Teli chirurgici	Medline Unidrape	VET3000
Guanti chirurgici	Ansell Perry Inc	5785004
Surigical clips	Fine Science Tools	12022-09
Termometro (rettale)	YSI	Precision 4000A
Termometro (acqua)	Fisher Scientific	14-648-26
Nastro ombelicale	Grafco	3031	Sterile
Bagnomaria	Thermo Scientific	TSCOL19	19 L