Generazione di un modello di ratto di insufficienza epatica acuta combinando il 70% di epatitectomia parziale e acetaminofene

Summary

Il modello animale acuto di insufficienza epatica sviluppato nell'attuale studio presenta un'alternativa fattibile per lo studio di potenziali terapie. L'attuale modello utilizza l'effetto combinato di lesioni epatiche fisiche e farmacologiche e fornisce una finestra temporale adatta per studiare il potenziale di nuove terapie.

Abstract

L'insufficienza epatica acuta (ALF) è una condizione clinica causata da varie eziologie con conseguente perdita di funzioni metaboliche, biochimiche, sintetizzanti e disintossicanti del fegato. Nella maggior parte dei casi di danni al fegato irreversibili, trapianto di fegato ortotropico (OLT) rimane l'unico trattamento disponibile. Per studiare il potenziale terapeutico di un trattamento per ALF, è essenziale il suo test precedente in un modello animale di ALF. Nello studio attuale, è stato sviluppato un modello ALF nei ratti combinando il 70% di epatectomia parziale (PHx) e iniezioni di acetaminofene (APAP) che fornisce una finestra terapeutica di 48 h. I lobi laterali mediani e lasciati del fegato sono stati rimossi per accise 70% della massa epatica e APAP è stato dato 24 h postchirurgico per 2 giorni. La sopravvivenza negli animali indotti da ALF è risultata essere gravemente diminuita. Lo sviluppo di ALF è stato confermato da livelli alterati di siero degli enzimi alanine aminoasi (ALT), aminoatomomomomomosoe aspartato (AST), fosfatosi alcalina (ALP); cambiamenti nel tempo protrombina (PT); e valutazione del rapporto internazionale normalizzato (INR). Lo studio del profilo di espressione genica da parte di qPCR ha rivelato un aumento dei livelli di espressione dei geni coinvolti nell'apoptosi, nell'infiammazione e nella progressione della lesione epatica. La degenerazione diffusa degli epatociti e l'infiltrazione delle cellule immunitarie è stata osservata mediante valutazione istologica. La reversibilità di ALF è stata confermata dal ripristino dei livelli di sopravvivenza e siero di ALT, AST e ALP dopo il trapianto intrasplenico di epatociti di ratti sani sinosgenici. Questo modello presenta un'alternativa affidabile ai modelli animali ALF disponibili per studiare la fisiofisiologia di ALF e per valutare il potenziale di una nuova terapia per ALF. L'uso di due approcci diversi consente inoltre di studiare l'effetto combinato delle lesioni epatiche fisiche e indotte da farmaci. La riproducibilità e la fattibilità della procedura corrente è un ulteriore vantaggio del modello.

Introduction

L'insufficienza epatica acuta (ALF) è definita dall'Associazione Americana per lo Studio delle Malattie del Fegato come rapido sviluppo di lesioni epatiche acute senza segni previi di danno ed è caratterizzata da una grave compromissione delle funzioni sintetiche, metaboliche e disintossicanti del fegato¹. ALF si differenzia dall'insufficienza epatica cronica in cui l'insufficienza si verifica a causa di lesioni epatiche causate per un lungo periodo di tempo e da insufficienza epatica cronica acuta (ACLF), dove si verificano danni epatici bruschi a causa di malattie epatiche croniche^2,3^,

Protocol

La procedura descritta di seguito è stata approvata dal Comitato Etico Istituzionale degli Animali dell'Istituto Nazionale di Immunologia, Nuova Delhi. Il numero di riferimento seriale dell'omologazione è IAEC-355/14.

1. Preparazione

1. Preparare la procedura chirurgica come descritto in precedenza da Das B et al.²⁶.
2. Usa ratti Wistar inbred di 6-8 settimane con un peso corporeo di 200-250 g.
3. Alloggiare gli animali in condizioni standard di cura degli animali e dar loro da mangiare con chow ratto e libitum prima e dopo la procedura.
4. Quando si esegue il 70% di PHx, utilizzare un mix....

Results

Percentuale di sopravvivenza nei modelli animali di ALF
La dose ottimale di APAP per causare ALF in combinazione con 70% PHx è stato standardizzato come 750 mg/kg peso corporeo. Il regime di trattamento è iniziato 24 h dopo 70% PHx, quando gli animali si erano completamente ripresi dall'intervento chirurgico, e consisteva di due dosi di APAP a intervalli di 24 h. La mortalità è stata osservata al tasso dell'80% dopo la somministrazione della seconda dose di APAP, 48 h post-intervento chirurgico. La pe.......

Discussion

Lo sviluppo di un modello animale appropriato per ALF è fondamentale per una migliore comprensione della patogenesi e della progressione di ALF. Un modello animale ALF ben caratterizzato offre anche l'opportunità per lo sviluppo e la sperimentazione di nuovi approcci terapeutici contro ALF. Sono stati fatti molti tentativi per sviluppare un modello clinicamente rilevante di ALF^{6,12,21,23,<.......}

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paracetamolo (Biocetamolo)	EG Pharmaceuticals		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Kit di fosfatasi alcalina (DEA)	Coral Clinical System, India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Analizzatore automatizzato	Tulip, Alto Santracruz, India	Screen Maaster 3000	Analizzatore biochimico per test funzionali epatici
Betadine ( Soluzione di iodio povidon)	Win-Medicare; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Armadio di sicurezza biologica (Classe I)	Kartos international; India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Microscopio a campo chiaro	Olympus, Giappone	LX51
Cefotaxime (Taxim®)	AlKem; India		cefotaxima sodio iniezione, nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Cell Strainer	Sigma; US	CLS431752
Collagenasi Tipo I	Gibco di Life Technologies	17100-017
Cotton Buds	Pure Swabs Pvt Ltd; India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Foglio di tende	JSD Surgicals, Delhi, India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
DPX Mountant	Sigma; US	6522
Soluzione di eosina Y,	Sigma alcolico; US	HT110132
Forceps	Major Surgicals; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Sistema di anestesia dei gas	Ugo Basile; Italia	211000
Glucosio	Himedia, India	GRM077
Crema depilatoria (Veet®)	Reckitt Benckiser, India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Soluzione di ematossilina, Mayer's	Sigma; US	MHS16
Eparina sale sodico	Himedia; India	RM554
Ialuronidasi da Pecora Testes	Sigma; US	H6254
Cannula I.V. (Plusflon)	Mediplus, India	Ref 1732411420
Siringhe da insulina	BD; US	REF 303060
Isoflurano (Forano®)	Asecia Queenborough	No B506	Anestetico per inalazione
Ketamina (Ketamax®)	Troikaa Pharmaceuticals Ltd.		Ketamina cloridrato IP, nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Meloxicam (Melonex®)	Intas Pharmaceuticals Ltd; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Micro portaaghi dritto & curvo	merciano; Inghilterra	BS-13-8
Micro portaaghi dritto & curvo	merciano; Inghilterra	BS-13-8
Microtomo	Histo-Line Laboratories, Italia	MRS3500
Filo di nylon	potente; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Paraformaldeide	Himedia; India	GRM 3660
Percoll®	GE Healthcare	17-0891-01
Gel per lacrime/nebbia per occhi	Allergan India Private Limited/Sun Pharma, India	P3060	Nessun numero di catalogo specifico
RPMI	Himedia; India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Scalpel	Major Surgicals; India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Forbici	Major Surgicals; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
SGOT (ASAT) KIT	Coral Clinical System, India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
SGPT (ALAT) KIT	Coral Clinical System, India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Shandon Cryotome E Cryostat	Thermo Electron Corporation; Stati Uniti		Nessun numero di catalogo specifico
Saccarosio	Sigma; US	S0389
Lama chirurgica n. 22	La Medcare, India		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Scheda chirurgica	Prodotta		Nessun numero di catalogo specifico (approvvigionamento locale)
Nastro bianco chirurgico	3M India; India	1530-1	Suture a nastro chirurgico microporoso
	Ethicon, Johnson & Johnson, India	NW 5047
Siringhe (1ml, 26 G)	Dispo Van; India		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
Trimmer (Clipper)	Philips	NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005
Pesatrice	Braun		Nessun numero di catalogo specifico (Approvvigionamento locale)
William's E Media	Himedia; India	AT125
Xilazina (Xylaxin®)	Immunologici indiani limitati		Sedativo, pre-anestetico, analgesico e miorilassante