Pulitura del DNA microsatellite e citometria di flusso Ploidy Analisi dei tessuti molari Molari Molari Molar fissati di paraffino fissati in parina

Yassemine Khawajkie; Nawel Mechtouf; Phuong Nguyen; Rima Slim

doi:10.3791/60366

Articolo metodologico

Pulitura del DNA microsatellite e citometria di flusso Ploidy Analisi dei tessuti molari Molari Molari Molar fissati di paraffino fissati in parina

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DOI:

10.3791/60366

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20 ottobre 2019

Yassemine Khawajkie¹ , Nawel Mechtouf² , Phuong Nguyen² , Rima Slim¹^,²^,³

¹Department of Experimental Medicine, McGill University, ²Department of Human Genetics, McGill University, ³Department of Obstetrics and Gynecology, McGill University

In questo articolo

Sommario

Le talpe idatidiformi sono gravidanze umane anomale con aeziologie eterogenee che possono essere classificate in base alle loro caratteristiche morfologiche e al contributo dei genitori ai genomi molare. Qui, i protocolli di genotipizzazione del DNA microsatellite multiplex e citometria di flusso dei tessuti molari incorporati in paraffina fissati in formalina sono descritti in dettaglio, insieme all'interpretazione e all'integrazione dei risultati.

Abstract

La talpa idatidiforme (HM) è una gravidanza umana anomala caratterizzata da un'eccessiva proliferazione trofoblastica e da uno sviluppo embrionale anormale. Esistono due tipi di HM basati sulla valutazione morfologica microscopica, HM completo (CHM) e HM parziale (PHM). Questi possono essere ulteriormente suddivisi in base al contributo dei genitori ai genomi molare. Tale caratterizzazione dell'HM, mediante morfologia e analisi del genotipo, è fondamentale per la gestione del paziente e per la comprensione fondamentale di questa patologia intrigante. È ben documentato che l'analisi morfologica dell'HM è soggetta ad ampia variabilità interosservante e non è sufficiente da sola per classificare con precisione HM in CHM e PHM e distinguerli dagli aborti idropici non molare. L'analisi della genotipizzazione viene eseguita principalmente su DNA e tessuti da prodotti di concezione incorporati in paraffina fissata in formalina (FFPE), che hanno una qualità inferiore a quella ottimale e possono quindi portare a conclusioni errate. In questo articolo vengono forniti protocolli dettagliati per la genotipizzazione multiplex e l'analisi della citometria di flusso dei tessuti molari FFPE, insieme all'interpretazione dei risultati di questi metodi, alla loro risoluzione dei problemi e all'integrazione con la valutazione morfologica , l'immunosofochimica^{p57 KIP2} e l'ibridazione in situ (FISH) della fluorescenza in situ per raggiungere una diagnosi corretta e robusta. Qui, gli autori condividono i metodi e le lezioni appresi negli ultimi 10 anni dall'analisi di circa 400 prodotti di concepimento.

Introduzione

Una talpa idatidiforme (HM) è una gravidanza umana anomala caratterizzata da sviluppo embrionale anormale, iperproliferazione del trofoblasto e degenerazione ipicca di villi cirionico (CV). Storicamente, HM era diviso in due tipi, HM completo (CHM) e HM parziale (PHM) basato solo sulla valutazione morfologica¹. Tuttavia, è stato dimostrato che la valutazione morfologica da sola non è sufficiente per classificare HM nei due sottotipi (CHM e PHM) e distinguerli da aborti non molori²^,3^,⁴.

Poiché CHM e PHM hanno diverse propensi....