כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לנתק את תאי הקרניות של הקרנית (CEC) מהקרום של האישה (DM) באמצעות “YAG” (בלייזר) של ממברנה הvivo לשעבר של המחלה של keratopathy בולולס (BK).
Nd: לייזרים YAG שימשו כדי לבצע ניתוח בעינית לא פולשנית, כגון capsulotomy במשך כמה עשורים עכשיו. האפקט המרחיק מסתמך על התמוטטות אופטית במוקד הלייזר. גלי הלם אקוסטי בועות הקצף נוצרות, גרימת קרע ברקמה. גודל בועה והגברה של הלחץ משתנים באמצעות אנרגיית הדופק ומיקומו של נקודת המוקד. במחקר זה, עיניים פורקלסי חזירי הוקמו מול מסחרית זמין Nd: YAG לייזר. משתנה אנרגיות הדופק, כמו גם עמדות שונות של נקודות מיקוד אחורי הקרנית נבדקו. נגעים וכתוצאה מכך הוערכו על ידי שני פוטון מיקרוסקופ ו היסטולוגיה כדי לקבוע את הפרמטרים הטובים ביותר עבור התנתקות בלעדית של תאים אנדותל הקרנית (CEC) עם נזק מינימלי השני. היתרונות של שיטה זו הם הצריבה המדויקת של CEC, מופחתת נזק סביבתי, ומעל לכל, טיפול ללא מגע.
שקיפות הקרנית חיונית להעברת האור לרשתית ולפוטוטורטורים1. בהקשר זה, מצב יחסי של התייבשות הוא קריטי כדי לשמור על סיבי הקולגן בתוך משתית הקרנית מיושרים כראוי. הומאוסטזיס זה מתוחזק על ידי תאי הקרנית אנדותל (CEC) ממוקם על קרום האמת (DM)2. האנדותל היא שכבת הקרניות הפנימית ביותר. יש לו מכשול חשוב ותפקוד המשאבה, אשר חיונית עבור שקיפות הקרנית3. בניגוד האפיתל, האנדותל אינו מסוגל לחדש את העצמי4. לפיכך, כל נזק תאי שנגרם על-ידי מחלה או טראומה מגרה את התאים האנדותל הנותרים כדי להגדיל ולהגר, לכסות את הפגמים הנובעים ולשמור על פונקציונליות הקרנית5. עם זאת, אם צפיפות ה-CEC נופלת מתחת לסף קריטי, פירוק האנדותל מוביל לבצקת, וכתוצאה מכך ראייה מטושטשת וחוסר נוחות או כאב חמור אפילו4. למרות הזמינות של תרופות כדי להקל על הסימפטומים, כיום הטיפול הסופי היחיד במקרים אלה הוא השתלת הקרנית, אשר ניתן לבצע בצורה של השתל בעובי מלא או השתלת אנדותל מלצ’יני. הנוהל האחרון הינו זמין בתור ממברנה של הממברנה האנדוספיה (DMEK), כמו גם של התפשטות הנוכחות האוטומטית של מתיחת העומק (DSAEK)6. עם זאת, ההגנה של שנותרו CEC ושיפור ההישרדות שלהם יכול להיות יעד חלופי, אשר זקוק למודל מחלה נאותה כדי לבחון תרופות טיפוליות פוטנציאליות.
הנוכחי CEC מחלת הפסד מודלים להתמקד בהשמדת האנדותל באמצעות הזרקה של סוכנים רעילים (g., בנזלקוניום כלוריד) לתוך החדר הקדמי או על ידי שחיקה מכנית של התאים באמצעות שיטה של ירידות פולשני7,8. בעוד מודלים אלה מבוססים היטב, חסרונות כגון תגובה דלקתית כללית ונזק סביבתי לא מדויק קיימים. לכן, מודלים אלה נוטים יותר לייצג את השלבים הסופיים של המחלה, כאשר האפשרויות הכירורגי הנ ל הם בלתי נמנעים.
עם ההתקדמות אסטרטגיות הטיפול הסלולרי כגון בתאי גזע וטיפול גנטי, היישום של אלה טיפולים סלולריים יכול להיות שימושי בשלבים המוקדמים של הפסד CEC9. לאחר מכן, אנו זקוקים למודל המייצג את השלבים המוקדמים האלה של המחלה בצורה מספקת יותר. בהקשר זה, מודלים של תרבות התא השתפרו בעשור האחרון אבל הם עדיין מוגבלים בתוקף שלהם, כמו תאים בתחום החוץ לא יכול להתקרב לשכפול האינטראקציות המורכבות המתרחשות בין סוגי התא השונים בתוך הקרנית10. לכן, vivo ex ובדגמי המחלות vivo עדיין בביקוש גבוה ושיפור הקיימים הוא בעל אינטרס מוחלט.
פולשני, ניתוח תוך העינית על ידי פוטושיבוש באמצעות מניאודימיום: YAG (Nd: YAG) לייזר הפך הליך שגרתי עבור רופאי עיניים ברחבי העולם מאז השקתו בסוף שנות ה-7011. פוטושיבוש מסתמך על קליטת אור לא לינארית המובילה להקמת פלזמה, הדור של גלי הלם אקוסטי, ויצירת בועות קוויטציה, בכל פעם שאתר היישום ממוקם בסביבה נוזלית12. באופן כללי, תהליכים אלה תורמים להשפעה המיועדת של חיתוך רקמות מדויק. עם זאת, הם יכולים גם להיות מקור נזק סביבתי מיותרים הגבלת הכליאה המקומית של ניתוח לייזר13.
החיזוי של השפעות מכניות כתוצאה מכך השתפר באופן משמעותי באמצעות אפיון של הפצת גל ההלם וקורס החפירה. זוהי המטרה שלנו למקד את CEC עם נזק קטן לרקמות שמסביב ככל האפשר כדי לספק מודל פולשני, לייזר בסיוע ניסיוני המודל עבור בשלבים המוקדמים של הפסד CEC. לצורך זה, יש צורך לקבוע את האנרגיות האופטימליות של הדופק ומיקומי הנקודות של מוקדי הלייזר.
התוצאות של המחקר הטיס הזה עולה כי Nd: YAG לייזר ניתן להשתמש באופן סלקטיבי בתאי הקרנית בצורה סלקטיבית כאשר הפרמטרים המתאימים למינון האנרגיה ומיקום נקודת המיקוד נבחרים.
כמו הפונקציה אנדותל חשוב עבור שקיפות הקרנית ושמירה על הקרנית מתוך בצקת סטרומה, מודלים של בעיות אנדותל לשחק ת?…
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים לכריסטין וררן וליאן א. סוצ’יורק על עזרתם בשיטות נסיוניות.
BARRON VACUUM TREPHINE | Katena | K20-2058 | |
Cryostat | Leica | CM 3050S | |
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | PAA | E-15009 | |
Eye holder | Self | N/A | |
Inverted Microscope | Leica | DMI 6000 B | |
KH2PO4 | Merck | 529568 | |
Na2HPO4 | Merck | 1065860500 | |
Nd:YAG laser | Zeiss Meditec | visuLAS YAG II plus | |
OCT Tissue Tek | Sakura Finetechnical | 4583 | |
Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Gibco | 10010056 | |
Porcine serum | Sigma-Aldrich | 12736C | |
Spectral-domain optical coherence tomograph | Heidelberg Engineering | Spectralis | |
Tissue culture plate 12-well | Sarstedt | 833921 | |
Two-Photon Microscope | JenLab | DermaInspect | |
Viscoelastic | OmniVision | Methocel |