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Articolo metodologico

Deprivazione visiva monoculare e misurazione della plasticità della dominanza oculare nella Corteccia visiva primaria del mouse

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DOI:

10.3791/60600

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8 febbraio 2020

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* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo protocolli dettagliati per la deprivazione visiva monoculare e l'analisi della plasticità della dominanza oculare, che sono metodi importanti per studiare i meccanismi neurali della plasticità visiva durante il periodo critico e gli effetti di geni specifici su sviluppo visivo.

Abstract

La privazione visiva monoculare è un eccellente paradigma sperimentale per indurre la plasticità della risposta corticale visiva primaria. In generale, la risposta della corteccia all'occhio contralaterale a uno stimolo è molto più forte della risposta dell'occhio ipsilaterale nel segmento binoculare della corteccia visiva primaria del topo (V1). Durante il periodo critico dei mammiferi, suturare l'occhio contralaterale si tradurrà in una rapida perdita di reattività delle cellule V1 alla stimolazione oculare contralaterale. Con il continuo sviluppo di tecnologie transgeniche, sempre più studi utilizzano topi transgenici come modelli sperimentali per esaminare gli effetti di specifici geni sulla plasticità della dominanza oculare (OD). In questo studio, introduciamo protocolli dettagliati per la privazione visiva monoculare e calcoliamo il cambiamento nella plasticità OD nel mouse V1. Dopo la deprivazione monoculare (MD) per 4 giorni durante il periodo critico, vengono misurate le curve di accordatura dell'orientamento di ogni neurone e le curve di accordatura dei neuroni di strato quattro in V1 vengono confrontate tra la stimolazione degli occhi ipsilaterali e contralaterale. L'indice di distorsione cotralaterale (CBI) può essere calcolato utilizzando il punteggio OD oculare di ogni cella per indicare il grado di plasticità OD. Questa tecnica sperimentale è importante per studiare i meccanismi neurali della plasticità OD durante il periodo critico e per esaminare i ruoli di geni specifici nello sviluppo neurale. La limitazione principale è che lo studio acuto non può studiare il cambiamento nella plasticità neurale dello stesso topo in un momento diverso.

Introduzione

La privazione visiva monoculare è un eccellente paradigma sperimentale per esaminare la plasticità V1. Per studiare l'importanza dell'esperienza visiva nello sviluppo neurale, David Hubel e Torsten Wiesel1,2 gattini privati della visione normale in un occhio in vari punti temporali e per diversi periodi di tempo. Hanno poi osservato i cambiamenti nell'intensità di risposta in V1 per gli occhi privati e non privati. I loro risultati hanno mostrato un numero anormalmente basso di neuroni che reagiscono all'occhio che era stato suturato chiuso nei primi tre mesi. Tuttavia, le risposte dei neuroni nei gattini sono....

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Protocollo

In questo protocollo, i topi maschi C57Bl/6 sono stati ottenuti dall'Istituto di Animali da Laboratorio dell'Accademia di Scienze Mediche del Sichuan e dall'Ospedale Popolare Provinciale del Sichuan. Tutte le procedure di cura e sperimentale per gli animali sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee dell'Università di Electronic Science and Technology of China.

1. Privazione monoculare (MD) al giorno postnatale 28 nei topi

  1. Mettere gli utensili chirurgici, l'ago di sutura (0,25 mm di diametro, diametro delle corde 0,07 mm) e i tamponi di cotone in una scatola di alluminio e autoclarli a 120 gradi centigra....

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Risultati

I risultati sperimentali qui descritti consentono misurazioni di plasticità MD e OD di successo da un topo privato e non privo durante il periodo critico (P19-P32). Nella Figura 1 viene illustrato come eseguire registrazioni di unità singole nello strato 4 di V1 la zona binoculare per confrontare le risposte nell'occhio ipsilaterale e contralaterale 4 giorni dopo MD. La figura 2 mostra le misurazioni di sintonizzazione dei picchi e dell'orientamento per stimolar.......

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Discussione

Vi presentiamo un protocollo dettagliato per MD e la misurazione della plasticità OD per singola unità di registrazione. Questo protocollo è ampiamente utilizzato nelle neuroscienze visive. Anche se il protocollo MD non è complicato, ci sono alcune procedure chirurgiche critiche che devono essere seguite con attenzione. In primo luogo, ci sono due dettagli importanti che garantiscono la qualità delle cuciture. La sutura è sufficientemente stabile se i punti sono concentrati nella parte mediale della palpebra. Inoltre, al.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
502 collaM& Fornitore verificato - G Chenguang Stationery Co., Ltd.
Scheda di assoluzioneStrumento nazionalePCI-6250
AgarosioBiowestG-10
AmplificatoreA-M sistemaModello 1800
AtropinaAladdin Bio-Chem Technology Co., LtdA135946-5
Apparato stereotassico cerebraleRWD Life Science Co., Ltd68001
Cohan-Vannas forbici a mollaFine Science Tools15000-02
Lenti a contatto SoluzioniPechino Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.
Cotton SwasHenan Guangderun Medical Instruments Co., Ltd
Fine ago holderSuZhou Stronger Medical Instruments Co., LtdCZQ1370
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53320A
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53072
Pinza66 Vision Tech Co., Ltd.#5
TermoforoStrykerTP 700 T
IlluminatoreMotic China Group Co., Ltd.Monitor LCD MLC-150C
IsofluraneRWD Life Science Co., LtdR510-22
Philips (China) Investment Co., Ltd.39PHF3251/T3
MicroscopioSOPTOPSZMT1
dei segni vitali non invasivoMouseox
Micromanipolatore oleodinamicoNARISHIGE International Ltd.PC-5N06022
Petrolatum Eye GelDezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.17C801
Spike2Cambridge Electronic Design, Cambridge, Regno UnitoSpike2 Versione 9
Forbici chirurgiche66 Vision Tech Co., Ltd.54010
Forbici chirurgiche66 Vision Tech Co., Ltd.54002
Ago da suturaNingbo Medical Co., Ltd3/8 arco 2.5 * 8
Elettrodo di tungstenoFHC, IncL504-01B
XilocainaHuaqing
AWG97028GM17064 Monitor

Riferimenti

  1. Hubel, D. H., Wiesel, T. N. Effects of monocular deprivation in kittens. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).
  2. Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. Critical....

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