Colorazione delle goccioline per nidi e lipidi degli ovociti nelle larve di Drosophila

Chuanxian Wei; Yan Yan; Xiaoli Miao; Renjie Jiao

doi:10.3791/60606

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Articolo metodologico

Colorazione delle goccioline per nidi e lipidi degli ovociti nelle larve di Drosophila

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DOI:

10.3791/60606

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28 dicembre 2019

Chuanxian Wei^*¹ , Yan Yan^*¹ , Xiaoli Miao¹ , Renjie Jiao¹^,²^,³

¹Sino-French Hoffmann Institute, School of Basic Medical Sciences, Guangzhou Medical University, ²The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, ³The State Key Laboratory of Respiratory Disease, Guangzhou Medical University

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Presentati qui sono i metodi dettagliati per la dissezione e la colorazione delle goccioline lipidiche degli ovociti nelle larve di Drosophila utilizzando BODIPY 493/503, un colorante fluorescente specifico per gocciolaiole lipidiche.

Abstract

I lipidi sono essenziali per lo sviluppo animale e l'omeostasi fisiologica. Disregolazione del metabolismo dei lipidi si traduce in vari difetti dello sviluppo e malattie, come l'obesità e fegato grasso. Di solito, i lipidi sono memorizzati in goccioline lipidiche, che sono gli organelli di conservazione lipidica multifunzionale nelle cellule. Le goccioline di lipidi variano per dimensioni e numero in tessuti diversi e in condizioni diverse. È stato riferito che le goccioline di lipidi sono strettamente controllate attraverso la regolazione della sua biogenesi e degradazione. In Drosophila melanogaster, l'enocito è un tessuto importante per il metabolismo dei lipidi ed è stato recentemente identificato come un analogo del fegato umano per quanto riguarda la mobilitazione dei lipidi in risposta allo stress. Tuttavia, i meccanismi alla base della regolazione del metabolismo delle goccioline lipidi che si sono mantilati rimangono sfuggente. Per risolvere questo problema, è della massima importanza sviluppare un metodo affidabile e sensibile per visualizzare direttamente i cambiamenti dinamici delle goccioline di lipidi negli enociti durante lo sviluppo e in condizioni stressanti. Approfittando del LIPophilic BODIPY 493/503, un colorante fluorescente specifico per le gocciolaiate di lipidi, descritto qui, è un protocollo dettagliato per la dissezione e la successiva macchiatura di idropidi nei lipidi delle larve di Drosophila in risposta alla fame. Ciò consente un'analisi qualitativa della dinamica delle gocciolamenti lipidiche in varie condizioni mediante microscopia confocale. Inoltre, questo metodo rapido e altamente riproducibile può essere utilizzato anche negli schermi genetici per identificare nuovi fattori genetici che coinvolgono il metabolismo delle goccioline lipidi che coinvolgono il metabolismo delle goccioline lipidi che coinvolgono gli enociti e altri tessuti.

Introduzione

I lipidi sono essenziali per la sopravvivenza delle cellule. Oltre al loro ruolo tradizionale come componenti integrali dei sistemi di membrana cellulare, i lipidi svolgono anche funzioni cruciali nell'approvvigionamento energetico e nella trasduzione della segnalazione durante i cicli di vita dei singoli animali¹. Pertanto, il metabolismo dei lipidi deve conformarsi a rigide normative per mantenere l'emostasi fisiologica nelle cellule. È noto che la disregolazione del metabolismo dei lipidi si traduce in varie malattie, come il diabete e fegato grasso. Nonostante la grande importanza del metabolismo dei lipidi nella salute degli animali, i mec....