Istituzione dell'infarto pontino acuto nei ratti mediante stimolazione elettrica

Summary

Presentato qui è un protocollo per stabilire infarto pontino acuto in un modello di ratto tramite stimolazione elettrica con un singolo impulso.

Abstract

L’infarto pontino è il sottotipo di ictus più comune nella circolazione posteriore, mentre manca un modello di roditore che imita l’infarto pontino. Fornito qui è un protocollo per stabilire con successo un modello di ratto di infarto pontino acuto. Vengono utilizzati ratti di circa 250 g, e una sonda con una fazza isolante viene iniettata nei pons utilizzando un apparato stereotassico. Una lesione è prodotta dalla stimolazione elettrica con un singolo impulso. Il punteggio Longa, il punteggio di Berderson e il test di equilibrio del fascio vengono utilizzati per valutare i deficit neurologici. Inoltre, il test somatosensoriale di rimozione adesivo viene utilizzato per determinare la funzione sensomotoria e il test di posizionamento degli arti viene utilizzato per valutare la propriocezione. Le scansioni MRI vengono quindi utilizzate per valutare l’infarto in vivo, e la colorazione TTC viene utilizzata per confermare l’infarto in vitro. Qui, viene identificato un infarto di successo che si trova nella base anterolaterale dei pons rostrali. In conclusione, viene descritto un nuovo metodo per stabilire un modello di ratto infarto pontino acuto.

Introduction

A partire dagli anni ’80, il modello di occlusione dell’arteria cerebrale media (MCAO) indotta dai filamenti in silicone è stato ampiamente utilizzato nella ricerca sull’ictus^{di base 1}. Sono stati utilizzati anche altri metodi (ad esempio, la sutura di un ramo dell’MCA² e l’infarto focale indotta fotochimicamente). Questi modelli sono stati definizione modelli di ictus basati su MCA e hanno contribuito notevolmente alle indagini sui meccanismi patofsiologici alla base dell’ictus e delle potenziali terapie. Anche se ci sono limitazioni di questi modelli sperimentali^3,4, questi metodi sono stati utilizzati molti laboratori^5,6. I modelli di tratto basati su MCA rappresentano un tratto nella circolazione anteriore; tuttavia, pochi rapporti hanno studiato modelli che imitano l’ictus nella circolazione posteriore⁷.

Ci sono differenze significative tra l’eziologia, i meccanismi, la manifestazione clinica e la prognosi tra i colpi di circolazione anteriore e posteriore⁸. Pertanto, i risultati derivati dai modelli di tratto di circolazione anteriore non possono essere applicati al tratto di circolazione posteriore. Ad esempio, l’intervallo di tempo di reperfusione per la circolazione anteriore è stato esteso a 6 h, con una piccola porzione di studi che si estende a 24 h sulla base dei risultati dell’imaging⁹. Tuttavia, la finestra di tempo per la circolazione posteriore può essere più lunga di 24 h, secondo i rapporti^{precedenti 10} e le nostre esperienze cliniche. Questa finestra di tempo di reperfusione allungata deve essere ulteriormente studiata e confermata nei modelli sperimentali.

Per quanto riguarda i colpi di circolazione posteriore, l’infarto pontino è il sottotipo più comune, che rappresenta il 7% di tutti i casi di ictus ischemico^11,12. Secondo la topografia dell’infarto, gli infarti pontini sono divisi in infarti pontini isolati e non isolati¹³. Gli infarti pontini isolati sono classificati in tre tipi in base ai meccanismi sottostanti: grande malattia dell’arteria (LAD), malattia del ramo dell’arteria basilare (BABD) e malattia dell’arteria piccola (SAD). La conoscenza dei meccanismi, della manifestazione e della prognosi dell’infarto pontino è stata ricavata da indagini cliniche sui casi¹⁴. Tuttavia, un modello di roditore che imita l’infarto pontino è stato meno studiato.

In studi precedenti, è stata esplorata la lesione diffusa del tegmentum del tronco encefalico che coinvolge i pons⁷. Un gruppo ha tentato di creare un modello di infarto pontino tramite la legatura dell’arteria basilare (BA)¹⁵. Un altro gruppo ha usato una sutura monofilamento in nylon 10-0 per legare selettivamente quattro punti della BA prossimale selettivamente¹⁶. Questo modello imita LAD, ma la maggior parte degli infarti pontini derivano da BABD e SAD. Inoltre, la legatura selettiva del BA è un intervento chirurgico complicato e ha un alto tasso di mortalità.

Fornito qui è un protocollo dettagliato per un modello di ratto facile da eseguire, facilmente riprodotto e di successo di infarto pontino acuto da stimolazione elettrica.

Protocol

Il protocollo è stato esaminato e approvato dall’Institution Animal Care and Use Committee del Secondo Ospedale Affiliato dell’Università di Medicina di Guangzhou, un’istituzione accreditata da AAALACi. I ratti sono stati forniti dall’Animal Center della Southern Medical University. 1. Animale Utilizzare ratti maschi adulti Sprague-Dawley del peso di 250 x 10 g. Al momento del trasporto, ospitare i ratti per almeno 1 settimana prima dell’intervento chirurgico in condizion…

Representative Results

Sei animali sono stati sottoposti al protocollo chirurgico descritto sopra. Il gruppo di controllo, come illustrato nella Figura 4, consisteva di sei ratti. Le fette di cervello mostrate nella Figura 4 sono state derivate da un ratto per gruppo. La risonanza magnetica ha mostrato che l’infarto si trovava nella base dei pons (Figura 4A). Dal momento che la sonda è stata iniettata 2 mm a sinistra della lin…

Discussion

Il presente studio fornisce un protocollo per la generazione di un modello di ratto infarto pontino acuto. Questo modello può essere utilizzato per la ricerca sulla prognosi e la riabilitazione (compreso il dolore cronico post-ictus) nei pazienti colpiti da ictus pontino.

Ci sono diversi punti di forza di questo metodo. In primo luogo, fornisce un modello di ratto di infarto pontino acuto per studi futuri. Come accennato in precedenza, l’infarto pontino è un sottotipo di ictus comune che ha …

Materials

4-0 sucture	Shanghai Jinzhong		Surgical instruments
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgical instruments
Animal anesthesia system	RWD		Wear mask when using the system
Bone cement	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Cured clamp	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
General tissue scissors	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	217181101
Lesion Making Device	Shanghai Yuyan		Making a lesion
MRI system	Bruker Biospin		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Probe	Anke		Need some modification
Q-tips	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Stereotaxic apparatus	RWD
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong		Surgical instrument
TTC	Sigma-Aldrich	BCBW5177	For infarction confirmation in vitro