Un protocollo sperimentale dettagliato è presentato in questo documento per la valutazione della tossicità neurocomportamentale degli inquinanti ambientali utilizzando un modello di larva di pesce zebra, compreso il processo di esposizione e i test per gli indicatori neurocomportamentali.
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Articolo metodologico
Studiare gli effetti neurocomportamentali degli inquinanti ambientali sulle larve dei pesci zebra
In questo articolo
Sommario
Abstract
Negli ultimi anni sempre più inquinanti ambientali si sono dimostrati neurotossici, soprattutto nelle prime fasi di sviluppo degli organismi. Le larve di pesce zebra sono un modello preminente per lo studio neurocomportamentale degli inquinanti ambientali. In questo caso, viene fornito un protocollo sperimentale dettagliato per la valutazione della neurotossicità degli inquinanti ambientali utilizzando larve di pesce zebra, compresa la raccolta degli embrioni, il processo di esposizione, gli indicatori neurocomportamentali, il processo di prova e analisi dei dati. Inoltre, vengono discussi l'ambiente culturale, il processo di esposizione e le condizioni sperimentali per garantire il successo del test. Il protocollo è stato utilizzato nello sviluppo di farmaci psicopatici, ricerca sugli inquinanti neurotossici ambientali, e può essere ottimizzato per fare studi corrispondenti o essere utile per studi meccanicistici. Il protocollo dimostra un chiaro processo operativo per studiare gli effetti neurocomportamentali sulle larve di pesce zebra e può rivelare gli effetti di varie sostanze neurotossiche o inquinanti.
Introduzione
Negli ultimi anni sempre più inquinanti ambientali si sono dimostrati neurotossici1,2,3,4. Tuttavia, la valutazione della neurotossicità in vivo dopo l'esposizione agli inquinanti ambientali non è così facile come quella della perturbazione endocrina o della tossicità dello sviluppo. Inoltre, l'esposizione precoce agli inquinanti, soprattutto a dosi rilevanti per l'ambiente, ha attirato una crescente attenzione negli studi di tossicità5,6,7,
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Protocollo
Il protocollo è conforme alle linee guida approvate dal Comitato Etico Animale dell'Università di Tongji.
1. Raccolta di embrioni di pesce zebra
- Mettere due coppie di sano adulto Tubingen zebrefish nella scatola di deposizione delle uova la notte prima dell'esposizione, mantenendo il rapporto di sesso a 1:1.
- Rimuovere il pesce adulto al sistema 30-60 min dopo la luce del giorno la mattina successiva.
- Togliere gli embrioni dalla scatola di riproduzione.
- Sciacquare gli embrioni con acqua di sistema.
- Trasferire gli embrioni in una parabola di vetro Petri (9 cm di diametro) con acqua di sistema ....
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Risultati
Qui, descriviamo un protocollo per studiare gli effetti neurocomportamentali degli inquinanti ambientali utilizzando larve di pesce zebra sotto stimoli leggeri. I test di locomozione, angolo di percorso e attività sociale sono definiti nell'introduzione. Di seguito sono riportate le impostazioni delle microplacche nei test di locomozione e di angolo di percorso e le immagini del software. Inoltre, i nostri risultati della ricerca sono presentati come esempi. Due studi presentano gli effet.......
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Discussione
Questo lavoro fornisce un protocollo sperimentale dettagliato per valutare la neurotossicità degli inquinanti ambientali utilizzando larve di pesce zebra. Il pesce zebra passa attraverso il processo dagli embrioni alle larve durante il periodo di esposizione, il che significa che una buona cura degli embrioni e delle larve è essenziale. Tutto ciò che influenza lo sviluppo degli embrioni e delle larve può influenzare il risultato finale. Qui vengono discussi l'ambiente culturale, il processo di esposizione e le condizioni.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati per il sostegno finanziario della National Natural Science Foundation of China (21876135 e 21876136), il National Major Science and Technology Project of China (2017-X07502003-03, 2018 Laboratorio chiave per la salute ambientale dei bambini (CEH201807-5) e il Consiglio svedese della ricerca (n. 639-2013-6913).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Micropiastra a 48 pozzetti | Corning | 3548 | Alloggiamento Embyros |
| Micropiastra a 6 pozzetti | Corning | 3471 | Custodia Embyros |
| BDE-47 | AccuStandard | 5436-43-1 | Inquinante |
| DMSO | Sigma | 67-68-5 | Microscopio a cosolvente |
| osservazione | Olympus | SZX 16 | |
| Pipetta | Eppendorf | 3120000267 | Soluzione di trasferimento |
| Zebrabox | Viewpoint | ZebraBox | Strumento di comportamento |
| Zebrafish | Shanghai FishBio Co., Ltd. | Tubingen | Zebrafish fornitore |
| ZebraLab | Viewpoint | ZebraLab | Behavior software |
Riferimenti
- Sun, L., et al. Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes). Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).
- Tian, L., et al.
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Ristampe e permessi
