쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형
Summary
우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.
Abstract
쥐에서의 이종성 심장 이식은 50년 이상 다양한 면역학적 연구에 일반적으로 사용되는 모델이었다. 1964년 첫 번째 설명 이후 몇 가지 수정 사항이 보고되었습니다. 쥐에서 이종성 심장 이식을 수행 30 년 후, 우리는 쉽게 가르치고 추가 수술 훈련이나 배경없이 수행 할 수있는 단순화 된 수술 접근 방식을 개발했다.
오름차순 대동맥과 우수하고 열등한 기병 및 폐 정맥의 폐 동맥 및 결찰을 해부한 후, 기증자 심장을 수확하고 이어서 헤파린으로 보충 된 얼음 차가운 식염수 용액으로 관류합니다. 수용인 복부 혈관을 클램핑하고 절개한 후, 기증자는 오름차순 대동맥과 폐 동맥을 각각 연속 적인 실행 봉합사를 사용하여 수용자 복부 대동맥 및 열등한 정맥에 해부학됩니다.
다른 기증자-수령인 조합에 따라, 이 모형은 동종 이식의 급성 또는 만성 거부의 분석을 허용합니다. 이 모형의 면역학 중요성은 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입의 새로운 접근 및 배수 자궁 경관 림프조직의 후속 분석에 의해 더욱 강화됩니다.
Introduction
이종성 심장 이식은 이식 허용 오차, 급성 및 만성 동종 이식 거부, 허혈 재관류 손상, 기계 관류 또는 심장 리모델링에 관한 다양한 조사를 위해 자주 사용되는 실험 모델입니다. 다른 장점 들 중에서도, 이식 기능은 촉진및 이식 실패에 의해 비침습적으로 모니터링될 수 있으며 신장이나 간과 같은 다른 장기와 달리 수용자의 중요한 손상을 유발하지 않는다.
에서 1964, Abbott 외. 처음에 쥐에 이종 성 복 부 심장 이식 설명1. 나중에, 1966년에, 해부학을 위한 종단 간 기술은 Tomita 등2에의해 기술되었습니다. 현재 사용되는 모델의 기초는 1969 년 오노와 린지에 의해보고되었다3. 지난 수십 년 동안, 결합된 이종성 심폐 이식4,,5,,6을포함하여 언로드, 부분적으로 로드되거나 로드된 좌심실 심장 이식의 다른 모형을 만들기 위하여 몇몇 수정이 간행되었습니다. 면역학 분석을 위해 비부적 부하 심장 이식 이식이 가장 일반적으로 수행됩니다. 이 경우, 혈류는 기증자가 대동맥을 상승하고 이어서 관상 동맥으로 역행하게 들어간다. 정맥 배수는 관상 동맥 부비동을 따라 오른쪽 심방과 심실로 발생합니다(그림 1A-B). 따라서 좌심실은 테베시안 정맥에서 혈액의 한계 양을 제외하고 혈류에서 제외됩니다. 이것은 또한 좌심실 보조 장치 치료 동안 병리 생리학적 메커니즘을 연구하기 위한 유용한 모형7.
이종성 심장 이식은 마우스, 토끼, 돼지 등 다양한 종에서 수행되어 왔으며 심지어 인간8,9,10,,11에서단일 또는 쌍심실 보조 장치로 사용되어 왔다.9, 쥐는 여전히 이식 모델에 대한 인기 있는 실험 동물을 나타내며, 특히 상이한 쥐 균주 조합에 대한 이식 편이식 생존 시간이 과거에 잘 정의되어 왔기 때문에 많은 수의 면역학적 시약이 접근가능12,,13. 마우스와는 달리, 쥐는 면역학적 분석을 위한 림프 조직에 더 큰 만들기 수술 및 접근이 더 실현 가능한12입니다. 더욱이, 최근 래트에서 상업적 복제 기술의 도입은 실험적인 쥐모델(14)에대한 반복적인 관심을 유도할 가능성이 크다.
일반적으로, 이종성 심장 이식편은 자궁 경부 또는 복부 해부학을 수행함으로써 수용자 혈관에 부착될 수 있다. 그러나, 몇몇 연구 결과는 대퇴문 해부학이 수동 촉진 또는 경피 심초음파에 대한 더 나은 접근 때문에 향상한 감시를 용이하게 하고 이렇게 접목 실패의 더 정확한 검출을 허용한다는 것을건의합니다 15,,16.
동작 시간, 합병증 비율, 결과 및 이식편 생존 시간에 관한 차이가 없는 것으로 나타났다17. 분명히, 충분한 수의 배수 림프절의 가용성은 자궁 경부 해부학의 이점으로 언급되어야합니다. 그러나, 더 긴 훈련 기간이 필요합니다. 대조적으로, 복부 문합은 면역 학적 조사를 위해 덜 복잡하고 동등하게 가치가 있습니다, 특히 알로겐성 심장 근육 세포및 후속 자궁 경부 림프절 절제술의 귀 내 주사의 새로운 방법의 결과와 결합 될 때. 두 모델의 조합은 개입 후 면역 학적 분석의 광범위한 스펙트럼을 제공합니다.
다음 프로토콜은 허혈 시간을 줄이기 위해 외과 의사의 쌍으로 작동을 말합니다. 그러나, 모든 실험은 한 사람에 의해 수행 될 수있다. 심장 박식 및 이식을 위한 기기 및 재료의 설정은 그림 2A-B에표시됩니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
앞서 설명한 쥐의 이종성 심장 이식 방법은 주로 1969년 오노와3린지의 설명에 기초한다 3. 그 이후로, 이 모형의 넓은 다양성으로 이끌어 내는 각종 종에서 몇몇 수정이 소개되었습니다. 이러한 수정의 몇 가지를 결합하고 실험실에서 이종 성 심장 이식을 수행의 30 년 이상에서 발생하는 우리 자신의 경험을 소개, 우리는 긴 훈련 기간이나 수술 배경을 필요로하지 않는 가능한 수?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
브리타 트라우테비히, 코린나 뢰버트, 잉그리드 메더의 헌신에 감사드립니다.
Materials
| Anesthesia device (including isoflurane vaporizer) | Summit Anesthesia Solutions | No Catalog Number available | |
| Cannula (27 G) | BD Microlance | 302200 | |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl 50 mg/mL | |
| Cellstar Tubes (15 mL) | GreinerBioOne | 188271 | |
| Cell strainer (40 µm) | BD Falcon | 2271680 | |
| Collagenase Type CLSII | Biochrome | C2-22 | |
| Compresses 5×5 cm | Fuhrmann | 31501 | |
| Compresses 7.5×7.5 cm | Fuhrmann | 31505 | |
| Cotton swabs | Heinz Herenz Medizinalbedarf | 1032128 | |
| Dexpathenol (5 %) | Bayer | "Bepanthen" | |
| DPBS BioWhittaker | Lonza | 17-512F | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD557R | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD313R | |
| Forceps | B. Braun | Aesculap BD35 | |
| Heating mat | Gaymar Industries | "T/Pump" | |
| Hemostatic gauze | Ethicon | Tabotamp | |
| Heparin-Natrium 25 000 I.E. | Ratiopharm | No Catalog Number available | |
| Isofluran CP | CP-Pharma | No Catalog Number available | |
| Large-pored sieve (stainless steel) | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
| Lidocaine | Astra Zeneca | 2 % Xylocain | |
| Metamizol-Natrium | Ratiopharma | Novaminsulfon 500 mg/mL | |
| Micro forceps | B. Braun | Aesculap BD3361 | |
| Micro needle holder | Codman, Johnson & Johnson Medical | Codmann 80-2003 | |
| Micro needle holder | B. Braun | Aesculap BD336R | |
| Micro needle holder | B. Braun | Aesculap FD241R | |
| Micro scissors | B. Braun | Aesculap FD101R | |
| Micro scissors | B. Braun | Aesculap FM471R | |
| Needle holder | B. Braun | Aesculap BM221R | |
| Penicillin/Streptomycin/Glutamine (100x) | PAA | P11-010 | |
| Peripheral venous catheter (18 G) | B. Braun | 4268334B | |
| Peripheral venous catheter (22 G) | B. Braun | 4268091B | |
| Probe pointed scissors | B. Braun | Aesculap BC030R | |
| Retractors | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
| RPMI culture medium | Lonza | BE12-702F | |
| Saline solution (NaCl 0.9 %) | Baxter | No Catalog Number available | |
| Scissors | B. Braun | Aesculap BC414 | |
| Surgical microscope | Carl-Zeiss | OPMI-MDM | |
| Sutures (anastomoses) | Catgut | Mariderm 8-0 monofil | |
| Sutures (ligature) | Resorba | Silk 5-0 polyfil | |
| Sutures (skin, fascia) | Ethicon | Mersilene 3-0 | |
| Syringe (1 mL) | B. Braun | 9166017V | |
| Syringe (10 mL) | B. Braun | 4606108V | |
| Syringe (20 mL) | B. Braun | 4606205V | |
| Vascular clamp | B. Braun | Aesculap FB708R |
Riferimenti
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