تهدف الطريقة المبينة أدناه إلى توفير بروتوكول شامل لإعداد جراحة الأعصاب غير البشرية (NHP) باستخدام مزيج جديد من طرق الطباعة ثلاثية الأبعاد (3D) واستخراج بيانات التصوير بالرنين المغناطيسي.
في هذه الورقة، نحدد طريقة للتحضير الجراحي الذي يسمح للتخطيط العملي لمجموعة متنوعة من جراحات الأعصاب في NHPs فقط باستخدام البيانات المستخرجة من التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI). يسمح هذا البروتوكول لتوليد نماذج جسدية دقيقة تشريحية ثلاثية الأبعاد للدماغ والجمجمة ، بالإضافة إلى نموذج جل أجاروز للدماغ الذي ينمّر بعض الخصائص الميكانيكية للدماغ. ويمكن استخراج هذه النماذج من التصوير بالرنين المغناطيسي باستخدام برنامج استخراج الدماغ لنموذج الدماغ، ورمز مخصص لنموذج الجمجمة. ويستفيد بروتوكول الإعداد من أحدث تكنولوجيا الطباعة ثلاثية الأبعاد لصنع أدمغة مُتشابكة وجماجم وقوالب لنماذج مخ هلامية. يمكن استخدام نماذج الجمجمة والدماغ لتصور أنسجة الدماغ داخل الجمجمة مع إضافة استئصال القحف في التعليمات البرمجية المخصصة ، مما يسمح بإعداد أفضل للعمليات الجراحية التي تشمل الدماغ مباشرة. تم تصميم تطبيقات هذه الطرق للعمليات الجراحية التي تشارك في التحفيز العصبي والتسجيل وكذلك الحقن ، ولكن براعة النظام تسمح للتوسع في المستقبل للبروتوكول وتقنيات الاستخراج والنماذج لنطاق أوسع من العمليات الجراحية.
وقد تم بحث الرئيسيات خطوة محورية في تطور البحوث الطبية من النماذج الحيوانية إلى التجارب البشرية1,2. هذا هو الحال خصوصا في دراسة علم الأعصاب والهندسة العصبية كما أن هناك تباينا كبيرا الفسيولوجية والتشريحية بين أدمغة القوارض وتلك من الرئيسيات غير البشرية (NHP)1,2,3. مع التكنولوجيات الوراثية الناشئة مثل علم الكيمياء، optogenetics، والتصوير الكالسيوم التي تتطلب التعديل الوراثي للخلايا العصبية، وقد اكتسبت بحوث الهندسة العصبية دراسة وظيفة العصبية في NHP اهتماما خاصا كنموذج قبل الظهر لفهم وظيفة الدماغ2،4،5،6،7،8،9،10،11،12،13،15،16. في معظم تجارب علم الأعصاب NHP ، هناك حاجة إلى تدابير جراحة الأعصاب لزرع أجهزة مختلفة مثل وظائف الرأس ، و غرف التحفيز والتسجيل ، صفائف القطب والنوافذ البصرية4،5،6،7،10،11،13،14،15،17،18.
تستخدم مختبرات NHP الحالية مجموعة متنوعة من الأساليب التي غالبًا ما تتضمن ممارسات غير فعالة بما في ذلك تخدير الحيوان لتتناسب مع ساقي وظيفة الرأس وتقريب انحناء الجمجمة حول موقع استئصال القحف. مختبرات أخرى تناسب رئيس آخر إلى الجمجمة في عملية جراحية أو استخدام أساليب أكثر تقدما للحصول على القياسات اللازمة لزرع مثل تحليل أطلس الدماغ NHP والرنين المغناطيسي (MR) بمسح في محاولة لتقدير انحناء الجمجمة2,10,11,16. جراحي الأعصاب في NHPs تنطوي أيضا على حقن السوائل، وغالبا ما لا يكون المختبرات وسيلة لتصور موقع الحقن المتوقع داخل الدماغ2،4،5،13،14 الاعتماد فقط على قياسات تكسينية والمقارنة مع المسح MR. هذه الطرق لديها درجة من عدم اليقين لا مفر منه من عدم القدرة على اختبار التوافق المادي لجميع المكونات المعقدة للزرع.
لذلك، هناك حاجة إلى طريقة دقيقة غير فاشية للتخطيط للأعصاب في NHPs. هنا، نقدم بروتوكول ومنهجية لإعداد عمليات الزرع والحقن في هذه الحيوانات. تنبع العملية بأكملها من فحوصات التصوير بالرنين المغناطيسي ، حيث يتم استخراج الدماغ والجمجمة من البيانات لإنشاء نماذج ثلاثية الأبعاد (3D) يمكن طباعتها 3D. يمكن الجمع بين نماذج الجمجمة والدماغ للتحضير لعمليات استئصال القحف وكذلك وظائف الرأس مع زيادة مستوى الدقة. ويمكن أيضا أن تستخدم نموذج الدماغ لخلق قالب لصب نموذج هلام دقيقة تشريحيا من الدماغ. يمكن استخدام مخ الجل وحده و بالاشتراك مع الجمجمة المستخرجة للتحضير لمجموعة متنوعة من عمليات الحقن الجراحية. أدناه سوف نصف كل من الخطوات المطلوبة للتصوير بالرنين المغناطيسي القائمة على الأدوات لإعداد جراحة الأعصاب.
توضح هذه المقالة مجموعة أدوات للتحضير لجرّاح الأعصاب في NHPs باستخدام النماذج الفيزيائية و CAD لتشريح الجمجمة والدماغ المستخرجة من فحوصات MR.
في حين تم تصميم نماذج الجمجمة والمخ المطبوعة ثلاثية الأبعاد المستخرجة والمستخرجة من 3D خصيصًا لإعداد عمليات استئصال القحف وزرع الرأس ، …
The authors have nothing to disclose.
وقد تم دعم هذا المشروع من قبل معهد يونيس كينيدي شيفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية التابع للمعاهد الوطنية للصحة تحت رقم K12HD073945، ومركز واشنطن الوطني لبحوث الرئيسيات (WaNPCR، P51 OD010425)، ومركز التكنولوجيا العصبية (CNT، مركز أبحاث الهندسة التابع للمؤسسة الوطنية للعلوم تحت منحة EEC-1028725) وجامعة واشنطن المتخصصة في الأبحاث. وجاء تمويل مختبرات ماكنك ومارتينيز كوندي لهذا المشروع من مبادرة BRAIN NSF-NCS جائزة 17348887، فضلا عن جوائز NSF 1523614 & 1829474، وSY الإمبراطورية المنح المبتكرة لكل أستاذ. نشكر كرم الخطيب على مساعدته في إعداد أغاروز، وتوني جي هوان على المساعدة الفنية.
3D Printing Software (GrabCAD Print) | Stratasys | Version 1.36 | Used for High quality 3D printing |
3D Printing Software (Simplify 3D) | Simplify3D | Version 4.1 | Used for PLA 3D printing |
Agarose | Benchmark Scientific | A1700 | Used for making gel brains |
Black Nail Polish | L.A. Colors | CNP637 | Used for gel molding |
Cannula (ID 320 um, OD 432 um) | Polymicro Technologies | 1068150627 | Used to inject dye into gel brain |
Cannula (ID 450 um, OD 666 um) | Polymicro Technologies | 1068150625 | Used to inject dye into gel brain |
Catheter Connector | B Braun | PCC2000 | Perifix for 20-24 Gage epidural catheters; Units per Cs 50 |
Dremel 3D Digilab 3D45 printer | Dremel | F0133D45AA | Used for prototyping in PLA |
ECOWORKS | Stratasys | 300-00104 | Used to dissolve QSR support structures |
Erlymeyer flask | Pyrex | 4980 | Used for gel molding |
Ethyl cyanoacrylate | The Original Super Glue Corp. | 15187 | Used to make combined cannula |
Graduated cylinder | 3023 | Used for gel molding | |
HATCHBOX PLA 3D Printer Filament | HATCHBOX | 3DPLA-1KG1.75-RED/3DPLA-1KG1.75-BLACK | 1kg Spool, 1.75mm, Red/Black |
Locust Bean Gum | Modernist Pantry | 1018 | Gumming agent for gel brain mixtures |
MATLAB | MathWorks | R2019b | Used for skull extraction |
McCormick Yellow Food Color | McCormick | Used for dye injection | |
Microwave | Panasonic | NN-SD975S | Used for agarose curing |
MR Imaging Software (3D Slicer) | 3D Slicer | Version 4.10.2 | Used for 3D model generation |
MR Imaging Software (Mango with BET plugin) | Reasearch Imaging Institute | Version 4.1 | Used for brain extraction |
Philips Acheiva MRI System | Philips | 4522 991 19391 | Used to image non-human primates |
Phosphate Buffered Solution | Gibco | 70011-044 | 10X diluted with DI water to 1X |
Pump | WPI | UMP3T-1 | Used for dye injection |
Pump driver | WPI | UMP3T-1 | Used for dye injection |
Refrigerator | General Electric | Used to preserve agarose gel | |
Scientific Spatula | VWR | 82027-494 | Used to extract gel molds |
SolidWorks | Dassault Systemes | 2019 | |
Stratasys ABS-M30 filament | Stratasys | 333-60304 | Used for high quality 3D printing |
Stratasys F170 3D printer | Stratasys | 123-10000 | Used for high quality 3D printing |
Stratasys QSR support | Stratasys | 333-63500 | Used to create supports with ABS model |
Syringe | SGE | SGE250TLL | Used for dye injection |