चूहों में Afferent लिम्फेटिक जहाजों Suturing द्वारा लिम्फ प्रवाह अवरुद्ध
Summary
एक प्रोटोकॉल के लिए afferent लसीका जहाजों की शल्य चिकित्सा suturing द्वारा लिम्फ प्रवाह ब्लॉक करने के लिए प्रस्तुत किया जाता है ।
Abstract
लिम्फ नोड्स (एलएन) को निकालने के लिए एंटीजन, साइटोकिन्स और कोशिकाओं को परिवहन करके ऊतक द्रव संतुलन को बनाए रखने और प्रतिरक्षा सुरक्षा को अनुकूलित करने में लिम्फेटिक जहाज महत्वपूर्ण हैं। लिम्फिक जहाजों के कार्य का अध्ययन करते समय लिम्फ प्रवाह में रुकावट एक महत्वपूर्ण विधि है। मुरीन फुटपैड से पॉपलाइटल लिम्फ नोड्स (पीएलएन) तक के अफरेंट लिम्फेटिक जहाजों को पीएलएन में लिम्फ ड्रेनेज के लिए एकमात्र मार्गों के रूप में अच्छी तरह से परिभाषित किया गया है। इन अफरेंट लिम्फेटिक जहाजों को चुनिंदा रूप से पीएलएन के प्रवाह को रोका जा सकता है। यह विधि एलएन, अफरेंट लिम्फेटिक जहाजों, साथ ही क्षेत्र के आसपास अन्य लिम्फेटिक जहाजों में लिम्फिक एंडोथेलियल कोशिकाओं को न्यूनतम क्षति के साथ लिम्फ प्रवाह में हस्तक्षेप की अनुमति देती है। इस विधि का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है कि एलएन में उच्च एंडोथेलियल वेणुओं (एचईवी) और केमोकीन अभिव्यक्ति को कैसे प्रभावित करता है, और कार्यात्मक लिम्फेटिक जहाजों के अभाव में एलएन के आसपास के एडीपोज ऊतक के माध्यम से लिम्फ कैसे बहता है। लिम्फेटिक फ़ंक्शन के महत्व की बढ़ती मान्यता के साथ, इस विधि में एलएन माइक्रोएनवायरमेंट और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को विनियमित करने में लिम्फेटिक जहाजों के कार्य को आगे जानने के लिए व्यापक अनुप्रयोग होंगे।
Introduction
लिम्फेटिक प्रणाली का स्थानिक संगठन अतिरिक्त तरल पदार्थ और परिवहन एंटीजन और एंटीजन-पेश कोशिकाओं (एपीसीएस) को सूखा एलएन में कुशलतापूर्वक हटाने के लिए संरचनात्मक और कार्यात्मक समर्थन प्रदान करता है। प्रारंभिक लिम्फेटिक जहाजों (जिसे लिम्फेटिक केशिकाएं भी कहा जाता है) उनके असतत अंतरकोशिकीय जंक्शनों के कारण अत्यधिक पारमीय होते हैं, जो आसपास के बाह्य स्थानों1से तरल पदार्थ, कोशिकाओं और अन्य सामग्रियों के प्रभावी संग्रह की सुविधा प्रदान करते हैं। प्रारंभिक लिम्फेटिक जहाजों को लिम्फेटिक जहाजों को इकट्ठा करने में विलय होता है, जिनमें तंग इंटरसेलुलर जंक्शन, एक निरंतर तहखाने झिल्ली और लिम्फेटिक मांसपेशी कवरेज होता है। लिम्फेटिक जहाजों को इकट्ठा करना एकत्रित लिम्फ को ड्रेनिंग एलएन तक पहुंचाने और अंततः लिम्फ को संचलन2,3में लौटने के लिए जिम्मेदार है। लिम्फ को निकालने वाले एलएन में लिम्फ को प्रेरित करने वाले लिम्फेटिक जहाजों का संग्रह 4 ,5,6, 7 , 5,7हैं । एफेरेंट लिम्फेटिक जहाजों की बाधा एलएन में लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध कर सकती है, जो लिम्फ प्रवाह के कार्य का अध्ययन करते समय एक उपयोगी तकनीक है।
पिछले अध्ययनों से पता चला है कि लिम्फ प्रवाह एंटीजन और एपीसीएस के परिवहन के साथ-साथ एलएन होओस्टेसिस को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यह अच्छी तरह से समझा जाता है कि ऊतक-व्युत्पन्न एपीसी, आमतौर पर माइग्रेट डेंड्रिटिक कोशिकाओं (डीसी) को सक्रिय करते हैं, टी कोशिकाओं को सक्रिय करने के लिए एलएन में एफेरेंट लिम्फेटिक जहाजों के माध्यम से यात्रा करते हैं8। विचार है कि मुक्त फार्म एंटीजन, जैसे रोगाणुओं या घुलनशील एंटीजन, निष्क्रिय एलएन निवासी APCs को सक्रिय करने के लिए एलएन के लिए लिम्फ के साथ प्रवाह पिछले एक दशक में स्वीकृति प्राप्त कर रहा है9,10,11,12। लिम्फ के साथ यात्रा करने वाले फ्री-फॉर्म एंटीजन एलएन की यात्रा करने के लिए संक्रमण के बाद मिनट लेते हैं, और एलएन-निवासी सेल सक्रियण उत्तेजना के बाद 20 मिनट के भीतर हो सकता है। यह पलायन डीसी की सक्रियता से बहुत तेज है, जो निकासी एलएन9में प्रवेश करने के लिए 8 घंटे से अधिक समय लेता है। प्रतिरक्षा सुरक्षा शुरू करने के लिए एंटीजन के परिवहन के अलावा, लिम्फ अपने माइक्रोएनवायरमेंट को बनाए रखने के लिए एलएन में साइटोकिन्स और डीसी भी रखता है, और प्रतिरक्षा सेल होमोस्टेसिस13, 14का समर्थन करता है। इससे पहले, लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध करके, अफ़रीद लिम्फिक जहाजों को रोककर यह दर्शाया गया था कि एलएन15, 16, 17को होमोस्टैटिक टी सेल और बी सेल होमिंग का समर्थन करने के लिए आवश्यक एचईवी फेनोटाइप को बनाए रखने के लिए लिम्फ की आवश्यकता होती है। सीसीएल21 एक महत्वपूर्ण केमोकी है जो एलएन 8,18में डीसी और टी सेल की स्थिति का निर्देशदेताहै। लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध करने से एलएन में सीसीएल21 अभिव्यक्ति में बाधा उत्पन्न होती है और एलएन19में डीसी और टी सेल पोजिशनिंग और/या बातचीत में संभावित रूप से व्यवधान डालता है । इस प्रकार, लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध करने से एलएन माइक्रोएनवायरमेंट को बाधित करके ड्रेनिंग एलएन तक प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से एंटीजन/डीसी पहुंच को समाप्त किया जा सकता है जो एलएन में प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करता है । लिम्फ प्रवाह के कार्य की बेहतर जांच करने के लिए, एक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया जाता है(चित्रा 1)चूहों में लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध करने के लिए फुटपैड से पीएलएन तक अफरेंट लिम्फेटिक जहाजों को सुटरिंग करके। यह विधि स्वस्थ और रोगग्रस्त परिस्थितियों में लसीका कार्य पर भविष्य के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक हो सकती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
लिम्फ प्रवाह को अवरुद्ध करने से स्वस्थ और रोगग्रस्त परिस्थितियों में एलएन को एंटीजन डिलीवरी में हेरफेर करने में व्यापक अनुप्रयोग होंगे। यह अध्ययन करने के लिए एंटीजन डिलीवरी के समय को नियंत्रित करने …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक पांडुलिपि के प्रूफरीडिंग के लिए शुक्रिया जरदिनेजाद का शुक्रिया अदा करते हैं । इस काम को कनाडा के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (सीआईएचआर, पीजेटी-156035) और कनाडा फाउंडेशन फॉर इनोवेशन फॉर एसएल (32930) और नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना फॉर यूजिया लिन (81901576) द्वारा समर्थित किया गया है।
Materials
| 0.9% Sodium Chloride Saline | Baxter | JB1323 | |
| 100% ethanol | Greenfield Global | University of Calgary distribution services UN1170. | |
| Depilatory cream | Nair | Nair Sensitive Formula Hair Removal Crème with Sweet Almond Oil and Baby Oil, 200-ml. Or similar product. | |
| Evans Blue dye | Sigma Life Science | E2129-10G | For 1 ml of Evans blue dye, add 0.1g Evans blue to 10 ml PBS. The Evens Blue solution will be filtered through 0.22 mm filters and kept sterile in 1ml aliquots. |
| Fluorescein isothiocyanate isomer I (FITC) | Sigma Life Science | F7250-1G | |
| Forceps Dumont #3 | WPI | 500337 | |
| Forceps Dumont #5 | WPI | 500233 | |
| Injection apparatus | Connect one end of polyethylene tubing to 30G × ½ needle. Attach a 1ml TB syringe to the needle. Dislodge needle shaft from another 30G × ½ needle. Insert the blunt end of the 30G × ½ needle shaft into the other end of the tubing. The inside diameter of this tubing is 0.28mm. Thus, 1.6 cm of fluid in the tubing is 1 μl. | ||
| Insulin syringe | Becton Dickinson and Company (BD) | 329461 | |
| IRIS Forcep straight | WPI | 15914 | |
| IRIS scissors | WPI | 14218-G | |
| Ketamine | Narketan | DIN 02374994 | The suppliers of Ketamine and Xylazine are usually under institutional and governmental regulation. |
| Needles (26Gx3/8) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305110 | |
| Needles (30Gx1/2) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305106 | |
| Paton Needle Holder | ROBOZ | RS6403 | Straight, Without Lock; Serrated |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Sigma Life Science | P4417-100TAB | |
| Polyethylene tubing | Becton Dickinson and Company (BD) | 427401 | |
| Surgical tape (1.25cmx9.1m ) | Transpore | 1527-0 | |
| Surgical tape (2.5cmx9.1m ) | Transpore | 1527-1 | |
| Suture | Davis and Geck CYANAMID Canada | 11/04 | 0.7 metric monofilament polypropylene |
| Syringe (1ml) | Becton Dickinson and Company (BD) | 309659 | |
| VANNAS scissors | World Precision Instruments (WPI) | 14122-G | |
| Xylazine | Rompun | DIN02169606 | The suppliers of Ketamine and Xylazine are usually under institutional and governmental regulation. |
| Equipment | |||
| Dissecting microscope | Olympus | Olympus S261 (522-STS OH141791) with light source: Olympus Highlight 3100 | |
| Confocal microscope | Leica | SP8 |
Riferimenti
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