Lo scopo di questa tecnica è la visualizzazione ex vivo delle reti arteriliiche polmonari dei primi topi postnatali e adulti attraverso l'inflazione polmonare e l'iniezione di un composto a base di polimeri radio-opaco attraverso l'arteria polmonare. Vengono inoltre discusse le potenziali applicazioni per i tessuti castati.
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Articolo metodologico
Casting vascolare di polmoni di mouse postnatali adulti e precoci per l'imaging Micro-CT
In questo articolo
Sommario
Abstract
I vasi sanguigni formano reti intricate nello spazio tridimensionale. Di conseguenza, è difficile apprezzare visivamente il modo in cui le reti vascolari interagiscono e si comportano osservando la superficie di un tessuto. Questo metodo fornisce un mezzo per visualizzare la complessa architettura vascolare tridimensionale del polmone.
Per raggiungere questo obiettivo, un catetere viene inserito nell'arteria polmonare e la vascolatura viene simultaneamente lavata di sangue e dilatata chimica per limitare la resistenza. I polmoni vengono poi gonfiati attraverso la trachea a una pressione standard e il composto polimerico viene infuso nel letto vascolare ad una velocità di flusso standard. Una volta che l'intera rete arteriosa è stata riempita e autorizzata a curare, la vascolatura polmonare può essere visualizzata direttamente o su uno scanner micro-CT.
Quando eseguito con successo, si può apprezzare la rete arteriosa polmonare nei topi che vanno dalle prime età postnatali agli adulti. Inoltre, mentre dimostrato nel letto arteriosa polmonare, questo metodo può essere applicato a qualsiasi letto vascolare con posizionamento del catetere ottimizzato e punti finali.
Introduzione
Il focus di questa tecnica è la visualizzazione dell'architettura arteriosa polmonare utilizzando un composto a base di polimeri nei topi. Mentre è stato eseguito un ampio lavoro su letti vascolari sistemici come cervello, cuore e rene1,2,3,4,5, sono disponibili meno informazioni per quanto riguarda la preparazione e il riempimento della rete arteriosa polmonare. Lo scopo di questo studio, quindi, è quello di ampliare il lavoroprecedente 6,7,
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Protocollo
Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (ACUC) del National Heart Lung and Blood Institute.
1. Preparazione
- Iniettare il topo intraperitonealmente con epatina (1 unità/g peso corporeo del topo) e lasciare che ambulate per 2 min.
- Eutanasia l'animale in una camera di CO2.
- Disporre il mouse in posizione supina su una tavola chirurgica e fissare tutti e quattro gli arti alla scheda con del nastro adesivo. Utilizzare l'ingrandimento per la dissezione fine.
2. Esposizione di polmoni e trachea
- Spruzzare il....
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Risultati
Un cast di successo mostrerà un riempimento uniforme dell'intera rete arteriosa polmonare. Lo dimostriamo nei topi C57Bl/6J che variano in età: giorno postnatale P90 (Figura 4A), P30 (Figura 4B), P7 (Figura 4C) e P1 (Figura 4D). Controllando la velocità del flusso e monitorando visivamente il riempimento in tempo reale, sono stati raggiunti endpoint affidabili della vasc.......
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Discussione
Eseguito correttamente, questo metodo produce immagini sorprendenti di reti arteriose polmonari, consentendo il confronto e la sperimentazione nei modelli di roditori. Diversi passaggi critici lungo il percorso garantiscono il successo. In primo luogo, i ricercatori devono eparinizzare l'animale nella fase preparatoria per evitare che si forno coaguli di sangue nella vascolatura polmonare e nelle camere del cuore. Ciò consente il transito arteriosa completo del composto polimero. In secondo luogo, quando si perfora il di.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata sostenuta in parte dal programma di ricerca intramurale NHLBI (DIR HL-006247). Ringraziamo il NIH Mouse Imaging Facility per la guida nell'acquisizione e nell'analisi delle immagini.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa da 1 cc | Becton Dickinson | 309659 | |
| Fiale di scintillazione in vetro da 20 ml | Fisher | 03-340-25P | |
| Ago da 30 G | Becton Dickinson | 305106 | |
| provette coniche da 50 ml | Cornin | 352098 | Per la conservazione e la scansione dei campioni |
| Siringa da 60 cc | Becton Dickinson | 309653 | |
| seta 7-0 sutura | Teleflex | 103-S | |
| Analyze 12.0 Software | AnalyzeDirect Inc. | N/A | Software primario |
| Amira 6.7 Software | Thermo Scientific | N/A | Alternative Sofware |
| CeramaCut Forbici 9cm | Fine Science strumenti | 14958-09 | |
| Pinze curve rivestite in ceramica | Strumenti Fine Science | 11272-50 | |
| Serbatoio CO2 | Robert's Oxygen Co. | n/a | |
| Pompa a siringa doppia | Cole Parmer | EW-74900-10 | |
| Dumont Mini-Pinza | Strumenti per le scienze fini | 11200-14 | |
| Etanolo | Pharmco | 111000200 | |
| Formalina | Sigma - Scienze della vita | HT501128 | |
| Garza | Covidien | 441215 | |
| Emostatico | Strumenti per le scienze fini | 13013-14 | |
| Eparina (1000USP Unità/ml) | Hospira | NDC 0409-2720-01 | |
| Horos Software | Horos Project | N/A | Camera di induzione Sofware alternativa |
| n/a | n/a | ||
| Kimwipe | Fisher | 06-666 | salvietta per la pulizia in fibra ottica |
| Nastro per etichettatura | Fisher | 15966 | |
| Base magnetica | Kanetec | N/A | |
| Sistema Micro-CT | PerkinElmer | Quantum GX | |
| Microfil (Composto polimerico) | Flowech Inc. | Kit B - MV-122 | 8 once di composto MV; 8 once di diluente; MV-Curing Agent |
| Micromanipolatore | Stoelting | 56131 | |
| Monoject 1/2 ml Siringa da insulina | Covidien | 1188528012 | |
| Pinza ottagonale Denti dritti | Strumenti di scienza fine | 11042-08 | |
| Parafilm | Bemis company, Inc. | ||
| Tubo PE-10 | Instech | BTPE-10 | |
| Phospahte tamponato Soluzione salina | BioRad | #161-0780 | |
| Supporto ad anello | Fisher | S13747 | Altezza 24in. |
| Sodium Nitroprusside | sigma | 71778-25G | |
| N/A | N/A | 16 x 16 pollici di area, 1/16 di spessore | |
| Forbici a molla diritte | Strumenti per la scienza fine | 15000-08 | |
| Catetere per flebo in teflon SURFLO 24G | Santa Cruz Biotechnology | 360103 | |
| Surgical Board | Fisher | 12-587-20 | Questo è un supporto per diapositive convertito |
| Morsetto universale a 3 rebbi | Fisher | S24280 | |
| Inf. alato Set 25X3/4, tubo da 12" | Nipro | PR25G19 | |
| Zeiss Stemi-508 Cannocchiale di dissezione | Zeiss | n/a |
Riferimenti
- Vasquez, S. X., et al. Optimization of microCT imaging and blood vessel diameter quantitation of preclinical specimen vasculature with radiopaque polymer injection medium. PLoS One. 6 (4), 19099(2011).
- Hong, S. H., et al.
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Ristampe e permessi
