Questo manoscritto descrive un metodo per registrazioni EEG video continue utilizzando elettrodi di profondità multipli in topi neonatali sottoposti a ipossia-ischemia.
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Articolo metodologico
Elettroencefalogramma video continuo durante l'ipossia-ischemia nei topi neonatali
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'ischemia da ipossia è la causa più comune di convulsioni neonatali. I modelli animali sono cruciali per comprendere i meccanismi e la fisiologia alla base delle convulsioni neonatali e dell'ischemia da ipossia. Questo manoscritto descrive un metodo per il monitoraggio continuo dell'elettroencefalogramma video (EEG) nei topi neonatali per rilevare le convulsioni e analizzare lo sfondo EEG durante l'ischemia da ipossia. L'uso di video ed EEG in combinazione consente la descrizione della semiologia delle convulsioni e la conferma delle convulsioni. Questo metodo consente anche l'analisi degli spettrogrammi di potenza e delle tendenze del modello di sfondo EEG nel periodo di tempo sperimentale. In questo modello di ischemia ipossia, il metodo consente la registrazione EEG prima della lesione per ottenere una linea di base normativa e durante la lesione e il recupero. Il tempo totale di monitoraggio è limitato dall'incapacità di separare i cuccioli dalla madre per più di quattro ore. Sebbene in questo manoscritto abbiamo utilizzato un modello di convulsioni ipossico-ischemiche, questo metodo per il monitoraggio EEG video neonatale potrebbe essere applicato a diversi modelli di malattie e convulsioni nei roditori.
Introduzione
L'encefalopatia ischemica ipossica (HIE) è una condizione che colpisce 1,5 neonati su 1000 all'anno ed è la causa più comune di convulsioni neonatali1,2. I neonati che sopravvivono sono a rischio di varie disabilità neurologiche come paralisi cerebrale, disabilità intellettiva ed epilessia3,4,5.
I modelli animali svolgono un ruolo fondamentale nella comprensione e nello studio della fisiopatologia dell'ipossia ischemia e delle convulsioni neonatali6,7
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Protocollo
Tutti gli studi sugli animali sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università della Virginia.
1. Costruzione di elettrodi / costruzione di cavi
- Utilizzare un filo di acciaio inossidabile isolato unipolare (diametro nudo di 0,005 ", 0,008") per creare un elettrodo collegato con un connettore a presa femmina (connettore presa femmina 0,079).
- Utilizzare uno speciale cavo su misura per collegare gli animali all'amplificatore.
- Collegare un connettore maschio a 4 pin (connettore maschio 0,079") all'amplificatore operazionale (op-amp) a 4 canali di unità di guadagno corrispo....
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Risultati
Semiologia convulsiva
L'esposizione neonatale all'ipossia-ischemia provoca convulsioni sia generalizzate che focali nei topi (Figura 1A-C). Le registrazioni video EEG consentono di correlare i risultati elettrografici al comportamento sul video. Questi comportamenti sono stati valutati utilizzando un punteggio comportamentale per roditori neonatali (BSS) precedentemente pubblicato. Oltre alla BSS, abbiamo classific.......
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Discussione
Abbiamo presentato un modello per il monitoraggio video-EEG continuo nei topi neonatali durante le crisi ipossico-ischemiche. L'analisi video in combinazione con l'EEG consente la caratterizzazione della semiologia convulsiva. L'analisi dell'EEG consente l'estrazione di spettrogrammi di potenza e l'analisi dell'ampiezza di fondo.
Il posizionamento corretto e attento degli elettrodi è fondamentale in questo protocollo, poiché lesioni durante il posizionamento dell'elettrodo o un posizionamento .......
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Ringraziamenti
Riconosciamo le seguenti fonti di finanziamento: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), University of Virginia School of Medicine (JB).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| SURGERY | |||
| Applicatore a sfera | Metrex Research | 8300-F | Applicatore i-bond |
| Cranioplast (Polvere/Resina) | Coltene | H00383 | Perm Reline/Power |
| I-Bond | Kulzer GmbH, Germania | ||
| LOOK Silk Suture | Surgical Specialities Corporation | SP115 | LOOK SP115 Seta intrecciata nera Sutura chirurgica non assorbibile |
| RS-5168 Pinze Botvin Strumento | chirurgico Roboz Pinza | RS5168 | per chirurgia/legatura |
| Pinze Graefe RS-5138 Strumento | chirurgico Roboz | RS5138 | Pinze per chirurgia/legatura |
| Luce UV per I-Bond | Blast Lite By First Media | BL778 | Luce UV per I-bond |
| Vannas Forbice | da microdissezioneRoboz Strumento Chirurgico | RS5618 | Forbice per legatura |
| Vet Bond | 3M Vetbond | 1469SB | Vet Glue |
| HYPOXIA | |||
| Hypoxidial | Starr Life Science | ||
| Oxygen sensor | Medical Products | MiniOxI- analizzatore/sensore di ossigeno per impianto di ipossia | |
| EEG RECORDING | |||
| Connettore femmina 0.079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 832-10-024-10-001000 | Ordinato da Digikey |
| Grass Amplifier | Natus Neurology Incorporated | Grass Product | |
| LabChart Pro | ADI Instruments | Software per far funzionare il sistema | |
| Connettore femmina maschio 0,079" | Mill-Max Manufacturing Corp | 833-43-024-20-001000 | Ordinato da Digikey |
| Amplificatore operazionale | Texas Instruments, Dallas, TX, USA | TLC2274CD | TLC2274 Amplificatore operazionale rail-to-rail Quad |
| Quad Amplificatore operazionale | Texas Instruments, Dallas, TX, USA | TLC2272ACDR TLC2274 Amplificatore operazionale rail-to-rail a basso rumore Quad Amplificatore operazionale | |
| Filo di acciaio inossidabile | A-M Systems | 791400 | 0.005" Bare/0.008" Rivestito 100 piedi |
| Filo ultra-flessibile | McMaster-Carr | 9564T1 | 36 Filo di garza di vari colori |
Riferimenti
- Vasudevan, C., Levene, M. Epidemiology and aetiology of neonatal seizures. Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).
- Volpe, J., et al. Neonatal Seizures. Volpe's Neurology of the Newborn. , Elsevier. 275-321 (2018).
- Shankaran, S., et al.
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Ristampe e permessi
