Abbiamo sviluppato un modello di corioamionite per simulare l'esposizione fetale all'infiammazione materna (FEMI) senza complicazioni di organismi vivi per esaminare gli effetti del FEMI sullo sviluppo del tratto intestinale della prole. Ciò consente lo studio delle cause meccaniche per lo sviluppo di lesioni intestinali a seguito della corioamionite.
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Articolo metodologico
Un modello murino di esposizione fetale all'infiammazione materna per studiare gli effetti della corioamionite acuta sullo sviluppo intestinale appena nato
In questo articolo
Sommario
Abstract
La corioamionite è un precipitante comune di nascita pretermine ed è associata a molte delle morbilità della prematurità, inclusa l'enterocolite necrotizzante (NEC). Tuttavia, un legame meccanicistico tra queste due condizioni rimane ancora da scoprire. Abbiamo adottato un modello murino di corioamnionite che coinvolge l'esposizione fetale indotta dal lipoppiosaccaride (LPS) all'infiammazione materna (FEMI). Questo modello di FEMI induce una cascata infiammatoria sterile materna, placentare e fetale, che è presente anche in molti casi di corioamionite clinica. Sebbene esistano modelli che utilizzano batteri vivi e imitano più accuratamente la fisiopatologia di un'infezione ascendente con conseguente corioamionite, questi metodi possono causare effetti indiretti sullo sviluppo del tratto intestinale immaturo e del microbioma in via di sviluppo associato. Utilizzando questo protocollo, abbiamo dimostrato che il FEMI indotto dall'LPS si traduce in un aumento dose-dipendente della perdita della gravidanza e della nascita pretermine, nonché in interruzione del normale sviluppo intestinale nella prole. Inoltre, abbiamo dimostrato che il FEMI aumenta significativamente la lesione intestinale e le citochine siere nella prole, riducendo contemporaneamente calice e cellule di Paneth, entrambe forniscono una prima linea di immunità innata contro l'infiammazione intestinale. Sebbene un modello simile di FEMI indotto dall'LPS sia stato utilizzato per modellare l'associazione tra corioamionite e successive anomalie del sistema nervoso centrale, a nostra conoscenza, questo protocollo è il primo a tentare di chiarire un legame meccanicistico tra corioamionite e successive perturbazioni nello sviluppo intestinale come potenziale legame tra corioamninite e NEC.
Introduzione
Le membrane corioniche svolgono un ruolo fondamentale nella gravidanza dei mammiferi. Includono il chorion e l'amnion, che servono più funzioni. Circondano e proteggono il feto, facilitano la segnalazione paracrina tra i compartimenti materno efetale 1e creano anelli di feedback locali all'interno delle membrane corioniche, che possono essere coinvolti nell'avvio della parto1. La comprensione attuale delle membrane indica che l'amnione fornisce una funzione di barriera strutturale e il corione fornisce un buffer immunologico principalmente per proteggere il feto in via di sviluppo dal sistema immunitario
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Protocollo
Tutte le procedure per gli animali sono state approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università dell'Iowa (Protocol #8041401). Tutti gli animali sono stati ospitati in un vivarium approvato dall'Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) presso l'Università dell'Iowa. Tutti i topi erano ceppo di tipo selvatico C57Bl/6J.
1. Istituzione del FEMI nei topi gravidi
- Preparazione LPS
- Utilizzare LPS derivato da Escherichia coli O55:B5 (concentrazione di scorte 2 mg/mL).
- Diluire la concentrazione di materiale LPS 1:100 con salina sterile pe....
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Risultati
L'esposizione al FEMI il giorno 15 embrionale porta ad una perdita di gravidanza dose-dipendente e ad un'intensità dose-dipendente di lavoro pretermine (Figura 1)42. Per gli esperimenti, abbiamo scelto di utilizzare una dose LPS di 100 μg /kg per ridurre al minimo la perdita di gravidanza e la prematurità (perdita del 50% sia tra prematurità che per scomparsa fetale intrauterina) esponendo i feti a un significativo insulto infiammatorio.
Ut.......
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Discussione
La corioamniionite ha un impatto sul 2\u20124% del termine e sul 25\u201230% delle consegne pretermine8,9. Tuttavia, l'impatto della corioamionite può estendersi a lungo oltre la nascita in quanto ha dimostrato di avere effetti significativi sul feto e sul neonato10,11,12,13,14,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte attraverso il National Institutes of Health (DK097335 & T32AI007260) e il Dipartimento di Pediatria della Famiglia Stead dell'Università dell'Iowa.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Formalina tamponata neutra al 10% | Sigma | HT501128 | |
| colorazione blu Alcian | Fornitura nuovi arrivati | 1003A | |
| C57Bl6/J topi | Jackson Laboratories | 664 | |
| Ethanol | Decon labs | 2701 | |
| HCl | Sigma | H1758 | |
| Colorazione ematossilina | Leica | 381562 | |
| LPS | Sigma | L2880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | |
| Nikon Eclipse Ni-U Microscopio | Nikon | 2CE-MQVJ-1 | |
| Acido periodico | ACROS | H5106 | CAS # 10450-59-9 |
| RNAlater | Thermofisher | Am7021 | |
| Reagente di Schiff | Sigma | S5133 | |
| Secor Imager 2400 | Scoperta su scala meso (MSD)Saggio | ||
| V-Plex | Scoperta su scala meso (MSD) | ||
| Xilene | Sigma | 534056 |
Riferimenti
- Myatt, L., Sun, K. Role of fetal membranes in signaling of fetal maturation and parturition. International Journal of Developmental Biology. 54 (2-3), 545-553 (2010).
- Verbruggen, S. W., Oyen, M. L., Phillips, A. T., Nowlan, N. C.
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Ristampe e permessi
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