קטיעה בגפיים התחתונות עלולה להתרחש גם לאחר אנגיופלסטיקה של כלי דם חסומים באיסכמיה של גפיים קריטיות (CLI). תאי אב מונונוקולריים (MPCs) משקפים תיקון כלי דם. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הכימות של MPCs מהמחזור קרוב אנגיופלסטיקה, ואת הקשר שלה עם תפקוד אנדותל וחיזוי של קטיעה בגפיים התחתונות.
איסכמיה קריטית של הגפיים (CLI) מייצגת שלב מתקדם של מחלת העורקים ההיקפית. אנגיופלסטיקה משפרת את זרימת הדם לגפה התחתונה; עם זאת, חלק מהחולים להתקדם באופן בלתי הפיך לקטיעה בגפיים. היקף הנזק לכלי הדם ואת המנגנונים של תיקון כלי הדם הם גורמים המשפיעים על התוצאה שלאחר אנגיופלסטיקה. תאי אב מונונוקולריים (MPCs) מגיבים לנזק כלי דם ותיקון, עם היכולת לשקף מחלות כלי דם. הפרוטוקול הנוכחי מתאר כימות של MPCs המתקבלים ממחזור הדם מכלי קרוב לאתר אנגיופלסטיקה, כמו גם את הקשר שלה עם תפקוד אנדותל ואת יכולת החיזוי שלה לקטיעה גפיים ב -30 הימים הבאים לאחר אנגיופלסטיקה בחולים עם CLI.
מחלת עורקים היקפית (PAD) מאופיינת בחסימה כלי דם כרונית ומתקדמת עם הגבלת אספקת הדם1. בקנה מידה עולמי, PAD של הגפיים התחתונות משפיע על כ -10% מהאוכלוסייה המבוגרת, בעוד עד 7% מהמקרים האלה מוגשים לקטיעה גפיים2,3.
איסכמיה גפיים קריטיות (CLI) מייצגת את המצגת החמורה ביותר של PAD1. חולים בדרך כלל חווים כאב במנוחה, כיבים, או נמק המיוחס לעורקים occluded; בעוד פרוגנוזה קלינית היא שלילית מסומן על ידי סיכון של 30% של קטיעה ותמותה במהלך 1 שנה3,4,5.
אנגיופלסטיקה היא הליך אנדווסקולרי זעיר פולשני שיכול להחזיר את זרימת הדם לגפה התחתונה בחולים עם CLI; עם זאת, חלק מהחולים בהכרח דורשים קטיעה גדולה של הגפיים, גם לאחר טיפול אנגיופלסטיקה1,5. זיהוי מוקדם של תוצאות שליליות לאחר אנגיופלסטיקה הוא בעל ערך רב למדי, בשל האפשרות של אכיפה טיפולית.
גורמי סיכון מסורתיים עשויים לספק יכולת חיזוי מוגבלת לקטיעה משמעותית של הגפיים בחולים עם CLI העוברים אנגיופלסטיקה6. סמנים ביולוגיים מונחי פתופיזיולוגיה מייצגים שיטות חדשניות עם יישומים קליניים פוטנציאליים, אשר עשוי לגרום שימושי במיוחד במחלות הקשורות לפציעה בכלי הדם7. כיום, ההשתתפות של אוכלוסיות הסלולר בעלות תכונות תיקון אנדותל, באתר של לוח טרשת עורקים, הוכרה יותרויותר 8,9.
תאי אב מונונוקולריים (MPCs) נגזרים ממח העצם ומאפיינים מבניים ותפקודיים משלו של תאי גזע עם יכולות רגנרטיביות של כלי הדם. בשל היכולת של MPC להתרבות, לנדוד ולהראות דבקות בכלי הדם; תאים אלה הפכו מועמדים טובים כדי לשקף תיקון אנדותל בתגובה איסכמיה10,11,12. בנוסף, עניין מתמשך במנגנונים שבבסיס פגיעה בכלי הדם הניע לחקור את התפקיד הפרוגנוסטי של סמנים ביולוגיים מקומיים המתרחשים, שכן הם נחשבים לשקף נזק לכלי הדם ולתקן7,13,14.
מטרת המחקר הנוכחי היא לתאר כיצד לקבוע את כמות חברי הפרלמנט המסתובבים קרוב לחסימת כלי הדם בחולים עם CLI שעברו אנגיופלסטיקה; וכיצד להעריך את הקשר בין חברי פרלמנט עם אינדיקטורים של תפקוד לקוי של אנדותל וכריתת איברים.
בהשוואה לפרוגנוזה המבוססת על מחלות רקע ותכונות כלי דם מהותיות, כמות חברי הפרלמנט המקומיים מראה יכולת ספציפית לחזות תוצאה קלינית לגבי תפקוד לקוי של אנדותל וכריתת גפיים. באופן עקבי, מספר מחקרים תיארו את התפקיד הפרוגנוסטי של סמנים ביולוגיים דומים במהלך הערכת חולים עם PAD15,16.
בהתבסס על תוצאותקודמות 7, השיטה המתוארת כאן עשויה להיות שימושית לזיהוי מוקדם של האוכלוסייה בסיכון לתוצאות כלי דם שליליות במספר הגדרות קליניות, כגון גפיים תחתונות ואיסכמיה כלילית, שבץ מוחי, דלקת כלי דם, פקקת ורידית ואחרים הכרוכים בפגיעה בכלי הדם ותיקון.
איסוף דם באתר המדויק של בלוק כלי הדם עשוי להראות קשיים טכניים; לכן, ביצענו איסוף דם בסמיכות לבלוק כלי הדם. כמו כן, כמות MPCs קרוב ללוח כלי הדם נראה דינמי מאוד ועשויים מקורם וריאציות לפני ואחרי אנגיופלסטיקה. על פי התצפיות שלנו, מומלץ להעריך שינויים בסיסיים- ו -30 דקות לאחר אנגיופלסטיקה במספר MPCs, ?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים לתמיכת התוכנית המוסדית E015 על מזהה הפרויקט 356.2015.
BSA | Roche | 10735086001 | Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending. |
Calibration Beads | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests |
CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated |
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34 |
CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated |
Conical Tubes | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | 15ml conical centrifuge tubes |
Cytometry Tubes | FALCON Corning Brand | #352052 | 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile. |
EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005% |
Improved Neubauer | Without brand | Without catalog number | Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2) |
K2 EDTA Blood Collection Tubes | BD Vacutainer | #367863 | Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL. |
Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL |
Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | #SZBF0920V | Fixation of biological samples, (powder, 95%) |
Pipette Transfer 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy. |
Test Tubes | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm |