干细胞作为心肌损伤患者的潜在治疗方法不断被研究,然而,干细胞在损伤组织中生存能力的降低和保留会影响其长期疗效。在这份手稿中,我们描述了一种替代干细胞传递方法,该模型采用缺血再灌注损伤的穆林模型。
人们对于使用干细胞(SCs)恢复心肌损伤个体的心脏功能有着浓厚的兴趣。最常见的是,心脏干细胞治疗是通过将SC同时与心肌损伤诱导同时提供来研究。然而,这种方法存在两个显著限制:早期敌对的亲炎缺血环境可能会影响移植的SC的生存,并且它并不代表可能使用SC的亚急性梗塞情景。在这里,我们描述了一个两部分的手术程序系列,用于诱导缺血-再灌注损伤和传递中质干细胞(MSCs)。这种干细胞管理方法可以通过规避最初的免疫反应,使受损组织周围的生存能力和保留时间更长。在小鼠中诱导了缺血再灌注损伤的模型,并伴之以间质干细胞(3.0 x 105),稳定地表达着记者基因萤火虫荧光酶在构成表达CMV促进剂下,7天后在心内。通过超声波和生物发光成像分别对动物进行成像,以确认损伤和细胞注射。重要的是,在执行此两程序方法进行 SC 交付时,没有增加的并发症率。这种干细胞施用方法,与利用最先进的报告基因一起,可能允许在临床上常见的慢性缺血情况下,在体内研究移植的SC的生存能力和保留,同时规避最初的亲炎反应。总之,我们建立了一个协议,延迟将干细胞传递到心肌,这可以用来作为促进受损组织再生的潜在新方法。
心血管疾病仍然是全世界发病率和死亡率的最常见原因。心脏缺血事件被发现有害于心肌和周围细胞1的整体功能。只有̴0.45-1.0%的心肌细胞在心肌损伤发生后每年再生。尽管不断增长的需求和固有的重点开发治疗,治疗帮助受伤组织再生已经很难建立,仍然需要进一步优化3,4,5。,4,5干细胞疗法已被引入,作为在缺血事件后恢复受损组织活力的替代途径;然而,这些疗法的进步已经受到有限的生存和保留细胞到受伤区域6的挑战。
缺血事件后心脏的微环境可以定性为缺氧、亲氧化和亲炎,为治疗干细胞适应生存7,8的敌对条件。由于免疫反应在受伤后触发,天真的淋巴细胞,巨噬细胞,嗜中性粒细胞和乳腺细胞试图通过去除垂死的细胞和调节组织重塑9,10,119,的过程来修复损伤。在缺血后的第一个3天内,炎症处于高峰期,在10,12区释放大量嗜中性粒细胞和单核细胞的亲炎细胞因子。7天后,大部分炎症已经消退,向修复细胞的过渡开始,一直持续到重塑级联完成,大约14天在小鼠13。我们的手术方法是将生物制剂引入心肌中,以绕过缺血再灌注损伤后的峰值先天免疫反应的一种潜在替代方法。同时,它将允许研究任何治疗在亚急性/慢性缺血的情况,其中可能有不同的变量要考虑相比,急性心肌梗死。
全世界有8500多万人患有心血管疾病。这些缺血事件的高流行率值得进一步发展和扩大替代疗法,以促进受损组织的再生。传统方法利用缺血再灌注程序在急性环境中,随后给予治疗1。炎症反应处于3-4天之间的高峰期,在心脏缺血事件后,与嗜中性粒细胞,巨噬细胞,和增加细胞因子信号10,12,的渗透。在这一段死细?…
The authors have nothing to disclose.
没有。
0.9% NaCl Irrigation, USP | Baxter | 0338-0048-04 | |
11×12" Press n' Seal surgical drape, autoclavable | SAI Infusion Technologies | PSS-SD | |
24G 3/4" IV catheter tube | Jelco | 4053 | |
28G x 1/2" 1mL allergy syringe | BD | 305500 | Injection of analgesic |
30G x 1/2" 3/10cc insulin syringe | Ulticare | 08222.0933.56 | Injection of stem cells |
6-0 S-29, 12" Vicryl suture | Ethicon | J556G | Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure |
9-0 BV100-4, 5" Ethilon suture | Ethicon | 2829G | Ligation of the LAD artery |
Absorbent underpad | Thermo Fischer Scientific | 14-206-64 | For underneath the animal |
Alcohol prep pads, 2 ply, medium | Coviden | 6818 | |
Anti-fog face mask | Halyard | 49235 | |
Bonn Strabismus scissors, curved, blunt | Fine Science Tools | 14085-09 | |
Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml | ZooPharm Pharmacy | Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity). | |
Castroviejo needle holders, curved | Fine Science Tools | 12061-01 | |
Curity sterile gauze sponges | Coviden | 397310 | |
Delicate suture tying forceps, 45 angle bent | Fine Science Tools | 11063-07 | |
Electric Razor | Wahl | Fur removal | |
Isoflurane 100 ml | Cardinal Health | PI23238 | Anesthetic |
Lab coat | |||
Monoject 1 mL hypodermic syringe | Coviden | 8881501400 | |
Moria iris forceps, curved, serrated (x2) | Fine Science Tools | 11370-31 | |
Moria speculum retractor | Fine Science Tools | 17370-53 | |
Mouse endotracheal intubation kit | Kent Scientific | ||
Nair depilatory cream | Johnson & Johnson | Fur removal | |
Optixcare eye lube plus | Aventix | Sterile ocular lubricant | |
Physiosuite ventilator | Kent Scientific | ||
PolyE Polyethylene tubing | Harvard Apparatus | 72-0191 | Temporary compression of LAD artery |
Povidone-iodine swabs | PDI | S41125 | |
Scalpel, 10-blade | Bard-Parker | 371610 | |
Sterile 3" cotton tipped applicators | Cardinal Health | C15055-003 | |
Sterile 6" tapered cotton tip applicators | Puritan | 25-826-5WC | |
Sterile gloves | Cardinal Health | N8830 | |
Sterilization pouches | Medline | MPP100525GS | |
Surgery cap | |||
Surgical Microscope | Leica | M125 | |
Suture tying forceps, straight (x2) | Fine Science Tools | 10825-10 | |
Transpore surgical tape | 3M | 1527-1 | |
Triple antibiotic ointment | G&W Laboratories | 11-2683ILNC2 | Topical application to prevent infection |
Vannas-Tübingen Spring Scissors, curved | Fine Science Tools | 15004-08 | |
Vetflo vaporizer | Kent Scientific |